朱怡文
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 利用Ty片段构建高稳定的整合型酵母菌表达载体
- 1991年
- 本文提出了一种利用酵母转座子Ty因子的新战略.本文中构建的酵母整合型质粒含有TyH25片段,利用这一片段与染色体之间的同源重组,可把质粒上的目的基因带入染色体,并可获得相当稳定的表达.本文还报道了GAL4基因和CUP1基因的稳定表达.脉冲梯度电场电泳(PFGE)揭示,质粒上的同一基因可以整合到不同的染色体上.Southern杂交分析表明,质粒整合的靶位点具有较高的结构相似性;整合后的质粒可以以单拷贝形式,也可以成串排列的多拷贝形式存在.我们还发现,随着整合情况的不同,质粒中同一目的基因在不同转化子中表达的情况也不尽相同.
- 徐岗朱怡文朱心良匡达人
- 关键词：整合型酵母菌
- 酿酒酵母5号染色体精细物理图谱绘制
- 1997年
- 利用脉冲电泳（ＰｕｌｓｅｄＦｉｅｌｄＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ）分析了酵母菌Ａ３６４ａ的电泳核型，以５号染色体专一探针确定了该染色体在电泳核型中的位置，以内切酶ＢａｍＨＩ对该染色体ＤＮＡ进行部分酶切后，与整合型载体ＹＩｐ５连接获得了一个染色体专一的基因文库，其转化子数目超过了理论要求值。从文库中筛选与已知探针有同源性的片段并用内切酶ＢａｍＨＩ，ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄＩＩ，ＰｓｔＩ和ＳａｌＩ分析这些插入片段，获得了一个覆盖Ａ３６４ａ５号染色体（其长度估计为６２０ｋｂ）９．４％的精细物理图谱。利用边界克隆和菌落杂交将使我们能够对整条染色体进行进一步的“步查”
- 杨智勇朱怡文余允华匡达人
- 关键词：酵母酿酒酵母5号染色体
- 酿酒酵母A364a第Ⅴ号染色体基因库的构建及ARS的克隆被引量：2
- 1996年
- 利用脉冲梯度电泳(PFGE)分离酿酒酵母A364aV号染色体DNA,克隆在酵母的整合型载体YIp5中,得到染色体专一的基因库。从该基因库克隆的16类ARS,接近估计的酵母Ⅴ号染色体复制子数目,基本覆盖Ⅴ号染色体。同源性分析发现酵母Ⅴ号染色体的绝大部分ARS之间不具同源性或存在极低的同源性。
- 钱志坚朱怡文匡达人
- 关键词：酵母菌酿酒酵母基因库
- 对在酵母Ⅴ号染色体克隆ARS过程中发现的一个重组现象的初步分析
- 1996年
- 早期在有关A364a的Ⅴ号染色体ARS研究中发现3株再次重组的含ARS的质粒。在深入探讨这一再次重组现象的机理时,发现它们的外源片段能与A364a的V号染色体DNA杂交,而不与大肠杆菌DNA或酵母转座子杂交。证明这个外源片段来源于酵母Ⅴ号染色体,而不来自A364a其他染色体(因为它来自Ⅴ号染色体专一文库)。并意外地发现它与Car2基因5′调控区高度同源(95％),与其编码区也有73.4％同源。提出一个可能的解释,即酵母A364a中存在Car2基因族,包括没有功能的假基因(这是为什么过去用测功能来定位Car2基因在第12条染色体上时,却测不到这些假基因)。它们的分布不局限于Ⅴ号染色体,并在建库时在细菌中再次发生重组,所以同源片段有重复,也有缺失。
- 钱志坚朱怡文匡达人
- 关键词：酵母无性系啤酒染色体
