支晓慧
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶基因在酵母工程菌中具有协同作用被引量：2
- 2011年
- 为了构建高产的紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌,主要探究了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的不同表达载体在酵母工程菌中是否存在协同效应。首先构建了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的酵母表达载体pGADADS,分别将pGADADS和pYeDP60/G/ADS转入酿酒酵母W303-1B和WK1中,获得6种能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌:W303B[pGADADS]、W303B[pYGADS]、W303B[pYGADS+pGADADS]、WK1[pGADADS]、WK1[pYGADS]和WK1[pYGADS+pGADADS]。对上述6种酵母工程菌进行发酵培养,通过GC-MS对发酵产物进行检测。结果显示,这6种酵母工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,其产率随着紫穗槐-4,11-二烯合酶基因拷贝数的增加而上升,且产生的紫穗槐-4,11-二烯对酵母工程菌没有产生毒性。导入多种ADS重组质粒后酵母工程菌的紫穗槐-4,11-二烯产率显著高于多个单质粒工程菌产生的紫穗槐-4,11-二烯之和。上述结果表明,同一宿主细胞中多种含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的表达载体之间存在明显的协同效应,这为构建青蒿素前体高产工程菌提供了一种思路。
- 孔建强支晓慧王伟程克棣朱平
- 关键词：青蒿素
- 基于rDNA序列的酵母整合载体的构建及应用被引量：5
- 2011年
- 目的构建一个基于rDNA序列的酵母整合载体。方法通过PCR扩增得到酿酒酵母rDNA序列;通过常规分子生物学技术构建以rDNA序列为整合位点的酵母整合载体。为了确证该载体的效能,将青蒿紫穗槐-4,11-二烯合酶基因克隆到该载体上,构建了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的整合型酿酒酵母工程菌。提取该工程酵母的基因组,通过紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的特异引物进行扩增,确认紫穗槐-4,11-二烯合酶基因是否已整合到酵母基因组上。发酵酵母工程菌,对发酵产物进行GC-MS检测,确认是否产生紫穗槐-4,11-二烯。结果构建了1个酵母整合载体,具有如下特点:①能将外源基因表达盒序列整合到酿酒酵母rDNA序列上,增加目的基因的拷贝数;②选择标记能反复应用,方便获得多拷贝的整合形式;③整合片段不需要酶切线性化,节省了内切酶,而且简化了操作程序。酵母基因组PCR结果表明,紫穗槐-4,11-二烯合酶基因已经整合到了酵母基因组上。以朱栾倍半萜为标准品,对该酿酒酵母工程菌的代谢产物进行GC-MS检测,发现其能产生紫穗槐-4,11-二烯,产量达到(91.33±7.57)mg/L朱栾倍半萜当量。结论初步成功构建了一个基于rDNA序列的酵母整合载体。
- 支晓慧王丽娜朱平王伟孔建强
- 关键词：酵母菌酿酒DNA核糖体
