王丽娜
- 作品数：6 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药物研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生产紫穗槐－4,11－二烯和青蒿酸的方法
- 本发明提供了一种在酿酒酵母细胞中生产紫穗槐－4，11－二烯的方法，包括：i)将HMG－CoA还原酶基因导入酿酒酵母细胞中的第一位点；ii)将紫穗槐－4，11－二烯合酶基因和FPP合酶基因一起导入酿酒酵母细胞中的第二位点，...
- 朱平王伟孔建强戴均贵程克棣王丽娜郑晓东
- 文献传递
- HMG-CoA还原酶和FPP合酶基因拷贝数对紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌产量的影响被引量：12
- 2007年
- 从青蒿中克隆了紫穗槐-4,11-二烯合酶基因(ADS),从酿酒酵母中克隆了HMG-CoA还原酶(HMGR)催化结构域和FPP合酶(FPPS)基因。构建含ADS基因的酿酒酵母表达载体pYeDP60/G/AS,将其转入酿酒酵母,获得能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌,以朱栾倍半萜为参照,产量为10μg.L-1。另外构建了含HMGR和FPPS基因的酵母表达载体pGBT9/A/HMG/G/FPP,将该载体和pYeDP60/G/AS共转入酿酒酵母,得到第二个能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌,产量为23.6 mg.L-1,结果表明增加HMG-CoA还原酶和FPP合酶基因的拷贝数能显著增加酵母工程菌的紫穗槐-4,11-二烯产量。
- 孔建强程克棣王丽娜郑晓东戴均贵朱平王伟
- 关键词：HMG-COA还原酶
- 重组SARS-C oV未知功能小蛋白X5表达、纯化及抗体制备
- 2008年
- 将SARS-CoV未知功能小蛋白X5的基因在大肠杆菌中进行诱导表达,获得以包涵体形式存在的重组X5蛋白。通过高浓度尿素变性溶解包涵体,亲和层析法纯化蛋白,然后对其进行尿素梯度透析复性,最终得到的蛋白纯度>95%,终产率93.3 mg.L-1。SDS-PAGE电泳和LC-ESI-MS/MS结果表明,该重组蛋白大小与理论相符,序列与GenBank中注册的X5蛋白序列一致,说明该蛋白为目的蛋白。利用纯化的X5蛋白制备得到多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1∶72900,说明纯化后的蛋白对兔有很强的免疫原性。X5多克隆抗体的成功制备,为将来鉴定X5蛋白的药理学活性奠定了基础。
- 王丽娜孔建强朱平杜冠华王伟程克棣
- 关键词：SARS-COVX5包涵体复性
- 酵母代谢工程菌生产青蒿素中间体的研究
- 青蒿素是重要的抗疟药物,紫穗槐-4,11-二烯是其中间体。本论文构建了两种能生产紫穗槐-4,11-二烯的酿酒酵母工程菌:整合体型和质粒型。以朱栾倍半萜为标准品,对这两种酿酒酵母的代谢产物进行GC-MS检测,发现都能产生紫...
- 孔建强王丽娜朱平程克棣王伟
- 关键词：青蒿素酿酒酵母
- 文献传递
- 生产紫穗槐-4,11-二烯和青蒿酸的方法
- 本发明提供了一种在酿酒酵母细胞中生产紫穗槐-4，11-二烯的方法，包括：i)将HMG-CoA还原酶基因导入酿酒酵母细胞中的第一位点；ii)将紫穗槐-4，11-二烯合酶基因和FPP合酶基因一起导入酿酒酵母细胞中的第二位点，...
- 朱平王伟孔建强戴均贵程克棣王丽娜郑晓东
- 文献传递
- 基于rDNA序列的酵母整合载体的构建及应用被引量：5
- 2011年
- 目的构建一个基于rDNA序列的酵母整合载体。方法通过PCR扩增得到酿酒酵母rDNA序列;通过常规分子生物学技术构建以rDNA序列为整合位点的酵母整合载体。为了确证该载体的效能,将青蒿紫穗槐-4,11-二烯合酶基因克隆到该载体上,构建了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的整合型酿酒酵母工程菌。提取该工程酵母的基因组,通过紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的特异引物进行扩增,确认紫穗槐-4,11-二烯合酶基因是否已整合到酵母基因组上。发酵酵母工程菌,对发酵产物进行GC-MS检测,确认是否产生紫穗槐-4,11-二烯。结果构建了1个酵母整合载体,具有如下特点:①能将外源基因表达盒序列整合到酿酒酵母rDNA序列上,增加目的基因的拷贝数;②选择标记能反复应用,方便获得多拷贝的整合形式;③整合片段不需要酶切线性化,节省了内切酶,而且简化了操作程序。酵母基因组PCR结果表明,紫穗槐-4,11-二烯合酶基因已经整合到了酵母基因组上。以朱栾倍半萜为标准品,对该酿酒酵母工程菌的代谢产物进行GC-MS检测,发现其能产生紫穗槐-4,11-二烯,产量达到(91.33±7.57)mg/L朱栾倍半萜当量。结论初步成功构建了一个基于rDNA序列的酵母整合载体。
- 支晓慧王丽娜朱平王伟孔建强
- 关键词：酵母菌酿酒DNA核糖体
