成小林
- 作品数：14 被引量：42H指数：4
- 供职机构：同济大学附属第一妇婴保健院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市市级医院新兴前沿技术联合攻关项目上海市卫生局青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。
- 庄志刚成小林蒋蓓琦傅韵李正东罗建民金伟
- 关键词：LKB1基因HEDGEHOG信号通路裸鼠
- Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响被引量：4
- 2012年
- 目的:研究环靶明(cyclopamine)抑制Sonic Hedgehog(SHH)信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法:抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 :在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 :抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。
- 成小林蒋蓓琦李正东傅韵庄志刚庄传经
- 关键词：乳腺癌HEDGEHOG信号通路LKB1基因
- 人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中LKB1基因过表达抑制HER-2蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨不同LKB1基因表达的人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白的表达。方法:建立不同LKB1基因表达的人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,免疫组化检测原位移植瘤组织中LKB1及ER,PR,HER-2表达。结果:LKB1低表达的MDA-MB-435细胞株(MDA-MB-435)裸鼠移植瘤及转染空质粒的MDA-MB-435(MDA-MB-435/vect)裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白呈高表达,而转染LKB1cDNA的MDA-MB-435(MDA-MB-435/LKB1)裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白呈低表达,转染与未转染LKB1的裸鼠移植瘤组织中HER-2蛋白表达差异显著,具有统计学显著意义(P<0.01)。三组中ER,PR的表达无显著差异。结论:人乳腺癌裸鼠移植瘤中LKB1基因的过表达抑制HER-2蛋白表达。
- 庄志刚贺其志蒋蓓琦李正东成小林罗建民金伟
- 关键词：乳腺肿瘤HER-2LKB1基因
- 转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系被引量：1
- 2011年
- 目的探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0、5×10-6、1×10-5、2×10-5 mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT-PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6 mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6 mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6 mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6 mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6 mol/L时效果最明显;推测存在LKB1-SHH-cAMP/PKA通路。
- 成小林李正东蒋蓓琦庄志刚庄传经
- 关键词：LKB1基因乳腺癌
- 上海市乳腺癌患者对遗传咨询和基因检测的了解及意愿调查被引量：5
- 2016年
- 目的分析乳腺癌患者对遗传咨询和基因检测的了解和接受意愿。方法428例乳腺癌患者配合完成调查表，对数据进行统计分析。结果大多数患者对遗传咨询和基因检测不了解，但经简单介绍后，大多数患者愿意接受，并愿意推荐家系成员参与遗传咨询。当告知基因检测利于患者时，92．1％的愿意接受检测，而当告知检测仅有利于家系成员时，仅33．9％的愿意接受基因检测，后者与年龄、学历和收入相关，差异有统计学意义。此外，愿意进入基因检测流程的比预期意愿低。整体有74．1％的愿意接受价格便宜的基因检测初筛，只有19．2％的愿意接受价格高昂的检测。尽管告知检测结果保密，仍有43．2％的担忧受歧视，其中年轻、低收入家庭和有其他肿瘤史或家族史的患者更加担忧，差异有统计学意义。结论大多数患者不了解但愿意接受遗传咨询和基因检测并推荐家系成员参与。对乳腺癌遗传知识的缺乏、费用和受歧视的担忧是患者接受遗传咨询和基因检测的障碍。需要普及相关知识，建立高危人群的随访筛查制度，争取完善乳腺癌三级预防体系。
- 成小林李正东孙晓寅蒋蓓琦庄志刚
- 关键词：乳腺癌基因检测
- LKB1基因与Hedgehog信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制机制的探讨
- 2011年
- 目的:探讨乳腺癌细胞中LKB1基因与Hedgehog信号转导途径的关系。方法:以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,LKB1基因转染或干扰处理后,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测Hedge-hog信号通路中Shh、Sufu、Ptch、Smo、Gli 1、Hip mRNA和蛋白表达的变化。建立LKBl基因表达抑制的细胞移植瘤模型,验证体外实验结果并进行对比分析。结果:Hedgehog信号通路激动因子Ptch的mRNA和蛋白的表达在各组细胞中差异无统计学意义。而激动因子Shh、Gli1和Smo的mRNA和蛋白的表达在MDA-MB-231正常细胞及其空质粒细胞、siRNA无关序列细胞中差异无统计学意义;在LKB1转染细胞中降低(F=29.56,P<0.05),在LKBl转染siRNA细胞中升高(F=32.15,P<0.05)。而抑制因子Sufu、Hip的mRNA和蛋白的表达正好相反,在LKB1转染细胞中升高,在LKBl转染siRNA细胞中降低,F=30.25,P<0.05。移植瘤检测Shh、Su-fu、Smo、Gli 1、Hip蛋白表达与体外实验相似,F=8.40,P<0.01。而且发现LKBl转染siRNA细胞组裸鼠肿瘤平均体积显著大于对照组(F=4.68,P<0.05),生存时间显著短于对照组,F=3.50,P<0.01。LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达呈负相关,r=0.232,P<0.05。结论:LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达在乳腺癌细胞中呈负相关,LKB1基因可能通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞的发生,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治可能有重要影响。
- 庄志刚成小林蒋蓓琦李正东屈雪莹
- 关键词：乳腺肿瘤信号传导
- Cx43对乳腺癌细胞侵袭和迁移及细胞间隙通讯的影响被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨Cx43对乳腺癌侵袭、迁移以及细胞间隙通讯功能的影响。方法:用脂质体转染法将Cx43质粒、Cx43 siRNA及阴性对照转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。细胞黏附实验、Transwell试验检测细胞黏附、侵袭和迁移能力。分子生物学方法检测MMP-2、MMP-9、BRMS-1的表达。荧光染料传输实验检测不同Cx43表达的细胞间隙通讯的功能。结果:细胞黏附实验结果表明相较于野生型细胞,Cx43 siRNA组黏附能力(0.43±0.07)降低(t=20.801,P=0.002),Cx43质粒组黏附能力(1.63±0.26)增高(t=5.917,P=0.027)。Transwell实验表明相较野生组,Cx43质粒组侵出小室的细胞数增加(侵袭:1.25±0.04,t=16.339,P=0.004;迁移:1.33±0.02,t=22.770,P=0.002),而Cx43 siRNA组侵出小室的细胞数减少(迁移:0.84±0.04,t=11.139,P=0.008;侵袭:0.79±0.04,t=5.743,P=0.029)。分子生物学检测发现Cx43质粒组MMP-2、MMP-9表达增高,BRMS-1表达降低,而Cx43 siRNA组MMP-2、MMP-9表达降低,BRMS-1表达增高。染料传输实验证实相较野生组传输能力,Cx43质粒组传输作用增强;Cx43 siRNA组细胞间的传输作用减弱。结论:Cx43对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力存在正调控。这一调控能力可能通过GJIC实现。
- 傅韵蒋蓓琦夏晨武羿王奕静成小林李正东庄志刚
- 关键词：乳腺癌迁移细胞间隙连接通讯
- 乳腺导管原位癌患者生活质量调查及相关因素分析被引量：2
- 2013年
- 目的调查乳腺导管原位癌（DCIS）患者生活质量（QOL），分析其相关影响因素。方法采用36条目简明量表（sF-36），对术后1年的84例DCIS患者、125例浸润性乳腺癌患者进行QOL评估，分析年龄、手术方式、内分泌治疗、学历、婚姻状况、工作状态、医疗保险对患者QOL的影响。结果与正常女性相比，术后1年的DCIS患者在生理功能（t=2．468，P=0．029）、躯体疼痛（t=2．076，P=0．039）、总体健康（t=2．153，P=0．033）和精神健康（t=3．396，P=0．003）4个维度得分较低，而浸润性乳腺癌患者在生理功能（t=5．638。P=0．002）、躯体疼痛（t=5．417，P=0．002）、活力（t：4．438，P=0．002）、总体健康（t=3．960，P=0．002）和精神健康（￡=6．020，P：0．001）5个维度得分低于正常。两组患者QOL大致相似，有6个维度得分差异无统计学意义，但在生理功能（t：2．714，P=0．032）和活力（t=2．134，P=0．040）方面DCIS患者优于浸润性癌患者。术后内分泌治疗是影响DCIS患者QOL的重要因素，显著降低了患者生理功能（t：2．082）、躯体疼痛（t=2．003）、总体健康（t=2．751）、活力（t=2．048）和精神健康（t=4．162）5个维度得分，P均小于0．05。结论术后1年DCIS患者QOL较差，内分泌治疗是重要影响因素。
- 蒋蓓琦傅韵武弈成小林李正东庄志刚
- 关键词：乳腺肿瘤导管内生活质量
- 乳腺癌患者血亲亲属对遗传咨询和基因检测意愿的调查被引量：8
- 2017年
- 目的分析乳腺癌患者血亲亲属对遗传咨询和基因检测的了解和接受意愿。方法 992例乳腺癌患者的血亲亲属配合完成调查表,根据年龄、家庭收入、学历及肿瘤家族病史对数据进行建表分类及统计分析。结果参与完成调查的乳腺癌血亲亲属大多数对遗传咨询和基因检测不了解,但经简单宣教,大多数受调者愿意接受遗传咨询并参与风险评估、筛查。79.8%的受调者愿意接受基因检测,62.3%的受调者愿意进一步参与基因检测相关流程。大多数受调者能接受价格便宜的基因初筛,仅37.9%的受调者能接受价格较高的基因检测。假设基因检测阳性,大多数受调者愿意通过密切随访筛查进行预防,31.3%的受调者愿意选择预防性手术或药物。尽管告知检测结果保密,仍有32.9%的受调者担心不利影响。结论大多数乳腺癌患者的血亲亲属不了解但有明显意愿接受遗传咨询和基因检测,对乳腺癌遗传特点的误解、费用和受歧视的担忧是受调者接受遗传咨询、基因检测和相关预防筛查的主要障碍。
- 成小林李正东孙晓寅梅章懿庄志刚
- 关键词：乳腺癌基因检测
- LKB1通过增强间隙连接细胞通讯增加乳腺癌细胞对顺铂的敏感性被引量：1
- 2014年
- 目的研究LKB1对乳腺癌细胞顺铂化学敏感性的作用及机制。方法构建LKB1高表达的稳定转染细胞MDA-MB-231/LKB1及其空载对照细胞MDA-MB-231/VEC。RT-PCR、Western印迹法检测细胞间隙连接蛋白Cx26、Cx32、Cx43和Cx50的核酸、蛋白水平表达;免疫荧光实验对Cx43进行胞内表达定位;染料传输实验评估间隙连接细胞通讯功能;细胞毒实验检测顺铂杀伤乳腺癌细胞的"旁观者效应"及计算顺铂的半数抑制浓度。结果 LKB1增加了间隙连接蛋白Cx43的核酸及蛋白水平表达(P<0.01),但对Cx26、Cx32及Cx50的表达水平无明显影响。LKB1增加了细胞膜上Cx43的表达,增强了细胞传递荧光黄染料的能力,并使顺铂对细胞的旁观者杀伤效应增强。LKB1也增加了细胞对顺铂的敏感性,MDA-MB-231、MDA-MB-231/VEC和MDA-MB-231/LKB1的半数抑制浓度分别为22.46、24.72、6.55 nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LKB1通过增强乳腺癌细胞的Cx43表达及间隙连接细胞通讯功能增强了顺铂的旁观者杀伤效应,并增加了细胞对顺铂的敏感性。
- 夏晨傅韵李正东蒋蓓琪成小林庄志刚
- 关键词：间隙连接蛋白旁观者效应
