张雅春
- 作品数:7 被引量:10H指数:2
- 供职机构:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- 鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定被引量:1
- 2014年
- 本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。
- 周长良张雅春王伟李越赵颖慧臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词:单克隆抗体原核表达
- 鸭RIG-1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究被引量:5
- 2013年
- 视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG-1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平;并将pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞,通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。结果显示,从金定鸭脾脏中扩增的RIG-1基因的CDS序列大小为2 802 bp,编码934个氨基酸;RIG-1基因在不同组织中的表达各不相同,在鸭的脾脏和肾脏中表达量较高,肝脏中度表达,心脏、肺脏和肌肉低度表达;pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞组与pcDNA3.1(+)转染组相比,病毒TCID50及相对表达量显著降低,IFN-β及Mx的相对表达量显著升高,表明RIG-1产生了显著的抗AIV作用。本研究为禽类RIG-1蛋白功能和家禽的天然免疫研究奠定了基础。
- 张雅春胡卫杰王建超王伟邓瑞坡李越赵颖慧孟庆文
- 关键词:抗病毒
- 鸡Mx蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量:2
- 2013年
- Mx蛋白为GTP酶动态蛋白家族成员,已被证明具有抗禽流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的作用。为制备鸡Mx蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的鸡Mx蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得4株稳定分泌抗鸡Mx蛋白抗体的杂交瘤细胞株。间接ELISA测定4株MAb纯化后腹水的效价介于1∶3.2×104~1∶2.5×105之间。Western blot结果证实4株MAb均具有良好的反应性;间接免疫荧光试验表明其中一株MAb与真核表达的鸡Mx蛋白发生反应。本研究为鸡Mx蛋白功能及表达鸡Mx蛋白的转基因动物等研究奠定了基础。
- 胡卫杰王伟孙建华邓瑞坡张雅春尹海畅孟庆文
- 关键词:MX蛋白单克隆抗体
- 维甲酸诱导蛋白Ⅰ在禽类抗病毒天然免疫中的研究进展被引量:2
- 2013年
- 维甲酸诱导蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)是机体先天性免疫系统中的一类重要受体,能识别细胞中的外源RNA,诱导Ⅰ型干扰素、细胞因子及趋化因子的产生,对机体抗病毒天然免疫的建立有重要作用。研究结果发现,RIG-Ⅰ在哺乳动物中能抑制流感病毒和新城疫病毒等病毒。鸡体内不含有RIG-Ⅰ,鸭RIG-Ⅰ能在鸡源细胞系中产生显著的抗禽流感病毒效果。作者重点论述了RIG-Ⅰ的作用机制,展望了RIG-Ⅰ在提高禽类抗病力和推进禽类先天性免疫基础研究方面的潜力。
- 张雅春王伟孟庆文
- 关键词:禽类天然免疫抗病毒
- 鸭RIG-1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究
- 2014年
- 视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG—1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平;并将pcDNA—RIG-1转染DF-1细胞,通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。
- 张雅春
- 关键词:禽流感病毒基因蛋白金定鸭PCDNA3.1(+)体外组织特异性表达
- H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型的建立
- 2015年
- 为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量。感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至104.5EID50,滴鼻、点眼各0.1mL,对照组接种PBS,感染后24h放入同居鸡;感染后连续观察14d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量。结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID50)为10-8.167/0.1mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为104.5 EID50。感染模型试验结果显示,以104.5 EID50的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8d全部死亡;在感染和同居3d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P<0.05)。本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础。
- 王伟张雅春邓瑞坡李越赵颖慧陈洪岩孟庆文
- 关键词:禽流感H5N1
- 鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备
- 2014年
- 利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(m Ab),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析。获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性。制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础。
- 臧凤霞张雅春王伟赵颖慧李越周长良陈洪岩孟庆文
- 关键词:原核表达单克隆抗体