张旭
- 作品数：8 被引量：7H指数：1
- 供职机构：贵阳医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省省长基金贵州省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备
- 2003年
- 目的 获取抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRARAIL)抗体。方法 利用PCR技术和基因重组技术将TRAIL基因构建于原核表达载体pPre-TMHTb中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导其在大肠杆菌DH-5α中获得表达,并将TRAIL蛋白免疫家兔,通过DotBlot及 Western Blot检测抗 TRAIL抗体的产生。结果 成功构建TRAIL基因原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,TRAIL蛋白表达量占菌体蛋白质总量的11.8％,经Dot Blot及 WesternBlot捡测证实获得了抗TRAIL抗体。结论 成功制备抗TRAIL抗体,从而为TRAIL在真核细胞水平的深入研究奠定了实验基础。
- 张旭孙等军方琴任志娟陈剑肖芸王季石
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体大肠杆菌聚合酶链反应基因重组技术
- 人类cyclophilin A基因cDNA的克隆和序列测定被引量：5
- 2003年
- 目的:克隆人类环孢霉素A受体亚型cyclophilinA(CypA)基因,对该基因进行序列测定。方法:利用EST重叠序列拼排技术,设计特异性CypA引物,以人外周血白细胞总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,纯化PCR产物,装pGEM-T载体,进行DNA序列测定。结果:成功克隆了人类Cyp A基因cDNA序列的开放阅读框,经DNA序列测定证实序列正确。结论:通过克隆人CypA基因,并克隆人pGEM-T载体,为下一步的基因表达和功能研究奠定了实验基础。
- 任志娟王季石肖芸张维陈剑孙等军张旭吴镇宇方琴
- 关键词：CDNA克隆环孢霉素受体
- TRAIL基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备
- 2004年
- 目的:获取抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抗体。方法:利用PCR技术和基因重组技术将TRAIL基因构建于原核表达载体pPreTMH-Tb中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌DH-5α中获得表达,并将TRAIL蛋白免疫家兔,通过Dot blot及Western blot检测抗TRAIL抗体的产生。结果:成功构建TRAIL基因原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,TRAIL蛋白表达量占菌体蛋白质总量的11.8％,Dot blot及Western blot检测证实获得了抗TRAIL抗体。结论:成功制备抗TRAIL抗体,这为TRAIL在真核细胞水平研究奠定了实验基础。
- 方琴孙等军张旭任志娟肖芸刘丰丰吴正宇文小平王季石
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因表达大肠杆菌
- G156A六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶原核表达载体的构建和表达
- 2004年
- 目的 :构建原核表达载体pPROEXHTb G15 6AMGMT ,观察突变型G15 6AMGMT在大肠杆菌中的表达情况。方法 :通过基因重组技术将G15 6AMGMT亚克隆至pPROEXHTb原核表达载体 ,在大肠杆菌DH5α中经异丙基硫代 β D半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。 结果 :经PCR及酶切分析证实 ,成功构建了pPROEXHTb G15 6AMGMT原核表达载体 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)显示重组克隆化基因pPROEXHTb G15 6AMGMT在大肠杆菌DH5α中有表达。结论 :G15 6AMGMT在大肠杆菌DH5α中有表达 ,为获取突变型MGMT工程蛋白奠定了基础。
- 肖芸王季石孙等军任志娟张维吴正宇张旭方琴
- 关键词：大肠杆菌基因表达
- 慢性粒细胞白血病MGMT基因的克隆及逆转录病毒表达载体的构建
- 2002年
- 目的 :从慢性粒细胞白血病病人外周血中克隆人MGMT基因 ,并进行逆转录病毒表达载体的构建。方法 :用RT PCR方法从慢性粒细胞白血病病人外周血白细胞中克隆得到长为 6 84bpMGMTcDNA。将该片段与 pGEM T载体连接 ,转化大肠杆菌DH5后得到重组质粒 pGEM T MGMT ,进行限制性内切酶酶切分析、PCR及测序鉴定。再将MGMTcDNA亚克隆到G1Na逆转录病毒载体EcoRⅠ和xhoⅠ位点之间 ,并进行酶切、PCR鉴定。结果 :成功克隆了人MGMT基因 ,经酶切分析、PCR初步筛选及测序鉴定证实序列正确 ,并成功构建到逆转录病毒载体上。结论 :通过克隆人MGMT基因 ,并构建逆转录病毒载体G1Na MGMT ,为探讨将耐药基因导入造血干细胞对烷化剂类化疗药物抗性的研究奠定了基础。
- 肖芸任志娟张维孙等军陈剑吴镇宇张旭方琴王季石
- 关键词：慢性粒细胞白血病MGMT基因克隆
- 新福菌素对人白血病细胞株K562的凋亡诱导作用被引量：1
- 2004年
- 目的 研究新福菌素对人白血病细胞株K562的体外抑瘤效应及其作用机制。方法应用MTT比色法观察新福菌素对细胞的生长抑制作用;显微镜观察细胞的生长变化和结构改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡和Bel-2蛋白表达情况。结果 新福菌素对人白血病细胞株K562有较强的体外增殖抑制作用。新福菌素能诱导K562细胞凋亡,同时伴随有Bel-2蛋白表达下调。结论 新福菌素对白血病细胞株K562有较强的抗瘤效应,其可能与Bel-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。
- 方琴孙等军王季石王培民张维张旭吴正宇刘丰丰
- 关键词：新福菌素白血病K562细胞抑瘤效应
- pPRMETb-TRAIL原核表达载体的构建和表达及纯化
- 2002年
- 目的 :为获取较高纯度的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TNF relatedapoptosis inducingligand ,TRAIL)工程蛋白。方法 :将TRAIL基因构建于原核表达载体pPRMETb中 ,在大肠杆菌中由异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,对包涵体进行洗涤、尿素裂解、复性后过镍柱层析纯化。结果 :经酶切、测序鉴定证实 pPRMETb TRAIL构建完全正确 ,在大肠杆菌xl1 blue中经IPTG诱导表达量较高 ,包涵体经尿素裂解后行镍柱纯化得到了较高纯度的TRAIL蛋白。结论
- 孙等军方琴陈剑肖芸任志娟张维张旭王季石
- 关键词：大肠杆菌聚合酶链反应肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体原核表达载体
- G156A MGMT体外定点诱导突变及逆转录病毒载体的构建被引量：1
- 2002年
- 目的获得含突变位点G1 5 6A(第 1 5 6位点的甘氨酸突变为丙氨酸 )的六氧甲基鸟嘌呤 DNA 甲基转移酶 (O6 methylguanine DNA methyltransferase ,MGMT) ,并构建含G1 5 6AMGMT(△MGMT)的逆转录病毒载体。方法通过体外定点诱导突变技术产生G1 5 6A突变的MGMT ,将其克隆入pGEM T载体 ,进一步亚克隆至G1Na逆转录病毒载体。结果通过DNA测序分析证实预期位点GGC(甘氨酸 )突变为GCC(丙氨酸 ) ,经PCR及酶切分析证实成功构建了逆转录病毒载体G1Na △MGMT。结论通过体外定点诱导突变技术成功获得了G1 5 6AMGMT ,并运用基因重组技术构建了逆转录病毒表达载体G1Na △MGMT ,为进一步将G1 5
- 肖芸王季石任志绢方琴孙等军张维张旭吴镇宇
- 关键词：逆转录病毒载体
