张佩芬
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- 病毒感染与真核细胞应激颗粒
- 2012年
- 病毒感染真核细胞后诱导细胞eIF-2α磷酸化,翻译的起始受到阻滞,mRNA随后与起始因子、核糖体亚基、mRNA结合蛋白(TIA-1、G3BP、HuR等)结合,聚集形成细胞质RNA应激颗粒(SG)。近几年的研究表明SG可影响病毒复制过程,而病毒亦可通过与SG蛋白组分的相互作用,反馈调节SG形成。本文介绍了SG的形成、组分、生物学意义,以及病毒与SG之间的相互关系。
- 张佩芬夏君李玉叶张萍
- 关键词：病毒感染翻译
- 登革病毒非结构蛋白NS4A的克隆表达及与其相互作用蛋白质的亲和纯化被引量：2
- 2013年
- 目的克隆表达登革病毒非结构蛋白NS4A，分离纯化与其相互作用的细胞蛋白。方法用特异性引物PCR扩增出FLAG—NS4A-HA基因片段，克隆至真核表达载体pSG5中，将重组质粒通过脂质体法瞬时转染入A549细胞，并通过Western blot检测NS4A融合蛋白的表达情况。利用串联亲和纯化系统（TAP）纯化分离与NS4A相互作用的蛋白，Western blot技术及银染SDS．PAGE验证NS4A蛋白复合物的纯化和分离情况。结果成功构建NS4A蛋白融合表达载体和FLAG、HA串联亲和纯化系统，SDS·PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了NS4A蛋白带和2条可能与NS4A相互作用的蛋白质片段。结论成功分离纯化与NS4A相互作用的细胞蛋白，为进一步研究机体抗登革病毒感染的机制奠定了基础。
- 夏君谢炯张佩芬李玉叶刘超黄曦张萍
- 关键词：登革病毒NS4A串联亲和纯化相互作用
- dsRNA诱导应激颗粒形成的研究
- 2014年
- 目的探索病毒感染产生的中间产物双链RNA（dsRNA）分子刺激对细胞形成应激颗粒（sG）的影响，为进一步研究病毒诱导与拮抗SG形成的分子机制提供实验依据。方法采用不同长度的dsRNA，包括长链（HMW，1．5～8kb）、短链（LMW，0．2-1kb）以及小分子dsRNA（19bp），分别转染A549细胞，模拟病毒感染产生的应激压力。通过免疫荧光检测形成sG的细胞百分率，以及蛋白免疫印迹（WB）检测不同长度的dsRNA诱导抗病毒激酶蛋白激酶R（PKR）及其底物elF2α的活化水平。结果HMW、LMWdsRNA可诱导A549细胞产生sG，而小分子dsRNA并不能诱导sG产生。免疫印迹结果发现HMW、LMWdsRNA可诱导PKR和下游底物eIF2α的磷酸化，而小dsRNA不足以活化PKR。结论病毒可能通过降解其dsRNA避免PKR的激活和sG形成，从而逃逸宿主应激应答。
- 张佩芬刘静宇张萍何军芳
- 蛋白激酶PKR的克隆表达及与其相互作用的蛋白质的亲和纯化被引量：2
- 2012年
- 目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质。方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HA-PKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中。将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,Western blot检测PKR及标签表达情况;最后,利用HA、FLAG串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与PKR相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证PKR蛋白复合物的纯化和分离情况。结果:成功构建了PKR融合蛋白表达载体及FLAG、HA亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了PKR蛋白带和两条可能与PKR相互作用的蛋白质片段。结论:成功纯化和分离了与PKR相互作用的蛋白质,为进一步研究奠定了基础。
- 谢炯夏君张佩芬李玉叶吴敏昊黄曦张萍
- 关键词：PKR亲和纯化相互作用
- 双链RNA依赖性蛋白激酶及与其相互作用的蛋白质被引量：1
- 2012年
- 双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)是一个经典的干扰素可诱导蛋白,具有抗病毒活性,并参与了细胞信号转导、细胞生长、分化和凋亡等生理过程。此外,PKR在抗病毒的天然免疫应答中亦发挥着十分重要的调控作用。近来,越来越多的研究发现报道了与PKR相互作用的蛋白质,为阐明PKR功能的分子机制提供了重要依据。本文主要介绍了已被证实与PKR相互作用的蛋白质,并对PKR发挥作用的机制进行探讨。
- 谢炯夏君张佩芬张萍
- 关键词：PKR相互作用信号通路
