孔庆然
- 作品数：63 被引量：132H指数：6
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生电气工程更多>>
- 胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:通过shRNA干扰高效敲低猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的表达,进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响,为构建2型糖尿病模型猪奠定基础。方法:首先通过重叠PCR方法克隆了猪IRS1基因全部的mRNA序列(4 814bp)以及通过3'RACE方法克隆了猪IRS2基因的部分3'非编码区(3-untranslated region,3'UTR)。然后,通过Real-time PCR筛选获得了能显著敲低这两个基因的shRNA片段,并在同时敲低IRS1和IRS2的猪肝脏细胞中,检测糖脂代谢相关基因的表达。结果:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2的表达被显著敲低,分别下降了78%和64%。另外,糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,F-1,6-BP)基因表达显著上升,并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶(glucokinase,Gck)基因表达的显著下降。同时,胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBP-1)基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因Abcg8,CYP7a1表达明显上调。结论:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的敲低可激活糖异生作用,并抑制糖酵解反应,从而导致糖代谢的异常,同时也能引起脂类代谢的异常。
- 黄天晴孔庆然李妍于淼刘忠华
- 关键词：RNA干扰糖脂代谢
- 一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用
- 本发明公开了一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。本发明还提供了一种抑制IRS2基因表达的shRNA干扰载体。根据克隆经对比分析后的...
- 尹智孔庆然刘忠华
- 文献传递
- 一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用
- 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接，本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS...
- 孔庆然黄天晴刘忠华
- 文献传递
- Iloprost对猪早期胚胎体外发育的影响被引量：1
- 2012年
- 本研究旨在探讨PGI2类似物iloprost对猪胚胎体外发育的影响。试验以IVF胚胎为研究对象,分别在不同时期(0、24、48、72h)将不同浓度(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol.L-1)iloprost加入到猪胚胎培养液中,于156h时记录囊胚发育率和囊胚细胞数,筛选获得最佳添加方案,检测胚胎脂肪代谢速度和代谢相关基因(cox2、creb、pparδ、pdk、cpt2)的表达水平,分析iloprost影响胚胎发育的机制。结果显示,最佳的添加方案为,在受精后48h加入2.0μmol.L-1 iloprost,胚胎囊胚发育率(28%)和囊胚细胞数(49.42)显著高于(P<0.05)对照组的囊胚发育率(16%)和囊胚细胞数(28.22);添加iloprost后,胚胎脂肪酸降解速度也显著加快(P<0.05),脂肪酸代谢相关基因cox2、creb、pparδ、cpt2的表达量上升,糖代谢相关基因pdk表达量无显著变化。结果表明,PGI2类似物iloprost可以促进胚胎降解脂肪酸,为胚胎发育提供能量,提高了胚胎体外发育能力。
- 王峰刘仲凤史春荣张朔吕明孔庆然刘彪刘忠华
- 关键词：PGI2胚胎体外发育脂代谢
- 一种猪印迹基因Slc22a18
- 本发明公开了一种猪印迹基因Slc22a18及其应用，属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Slc22a18基因第4外显子79位碱基存在SNP位点，进一步应用该位点鉴定Slc22a18基因的印迹状态。本发明所公开...
- 孔庆然尹智刘忠华周洋
- 文献传递
- 甲基-β-环化糊精对猪体外受精及早期胚胎发育的影响
- 2012年
- 为了优化猪体外受精技术体系,本试验探索了甲基-β-环化糊精(methyl-beta-cyclic dextrin,MBCD)对猪体外受精以及早期胚胎发育的影响。在体外受精0和4 h向受精液(modified Tris-buffered medium,mTBM)中添加不同浓度(0,0.5,1,2,5,10,15,20μmol/mL)的MBCD,受精孵育结束后转至PZM-3培养液中进行胚胎培养。对各处理组卵母细胞的受精情况以及胚胎发育能力进行了系统的检测,并用金霉素(chlortetracycline,CTC)染色法评估了MBCD处理后精子获能状态。结果显示:1)体外受精0 h添加5μmol/mL MBCD组的卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数显著高于(P<0.05)对照组和除10μmol/mL MBCD组之外的其他试验组。2)体外受精0 h添加5和10μmol/mL MBCD组、单精入卵率显著高于(P<0.05)对照组和其他试验组,而多精入卵率显著低于(P<0.05)对照组和其他试验组。3)添加5μmol/mL MBCD组,0～1 h,F型精子迅速减少(78.56～19.43),B型精子迅速增加(10.79～69.86);1～4 h,F型精子和B型精子基本保持不变(B型:69.86～78.78,F型:19.43～9.11)。上述结果表明在体外受精0 h向mTBM中加入5μmol/mL MBCD可以显著提高获能精子比例,减少多精受精发生,提高早期胚胎发育潜能。
- 吕明何文腾焦明霞郇延军石永乾孔庆然刘忠华
- 关键词：体外受精精子获能
- 胞质成熟对猪克隆胚胎体外发育潜能的影响
- 引言首例体细胞克隆猪已出生十多年,但体细胞克隆猪效率一直很低,主要原因是卵母细胞胞质未能完全重编程供体细胞核,因此卵母细胞成熟质量是影响到克隆胚胎能否发育到期的关键因素。为了探讨在胞质成熟过程中,何种物质决定了胞质成熟,...
- 郇延军李竞宇孔庆然尹智刘忠华
- 文献传递
- 外源中心体在哺乳动物胚胎发育中的遗传机制
- 2008年
- 中心体是一个非膜包被的半保留细胞器,由一对相互垂直的圆柱形中心粒及其周围大量的高电子密度的蛋白质——中心体基质(pericentriolar material,PCM)组成。在所有哺乳动物细胞中,中心体(centrosome)作为主要的微管组织中心(microtubule organizing centers,MTOCs),起到组装和稳定微管的关键功能。在大多数哺乳动物精子形成过程中,精子保留了近端中心粒,失去了大部分的中心体旁蛋白和远端中心粒,而在卵母细胞形成过程中两个中心粒被逐渐降解,主要的中心体旁蛋白被保留了下来,弥散于卵胞质中。受精后,在卵母细胞中精子中心粒被进一步降解,来源于卵母细胞和精子的中心体旁蛋白形成受精卵的MTOCs在胚胎分裂过程中行使功能。但在小鼠等啮齿类动物精子形成过程中,两个中心粒全部被降解,因此受精卵中的MTOCs主要由来源于卵母细胞中心体旁蛋白组成。在大多数哺乳动物核移植胚胎中,外源中心粒在胚胎1-细胞期即被降解,而是来源于供体细胞和受体卵母细胞的中心体旁蛋白形成重构胚的MTOCs指导纺锤体形成,中心粒是在囊胚期才从头合成的。在灵长类中,来源于精子的中心粒能与PCM一起组成典型的中心体在胚胎分裂过程中行使功能,但在其核移植胚胎中,体细胞中心体和去核卵母细胞中剩余的中心体旁蛋白不能有效的组装形成功能性中心体,这可能是灵长类哺乳动物体细胞克隆失败的一个关键原因。
- 孔庆然刘忠华
- 关键词：中心体受精核移植胚胎发育
- 牛肌源性干细胞的培养和鉴定被引量：5
- 2008年
- 探讨牛肌源性干细胞(MDSCs)的体外分离、培养、鉴定方法,旨在为牛体细胞核移植研究提供优质的供核细胞。使用胶原酶消化牛骨骼肌,然后采用差速贴壁分离技术纯化获得MDSCs。在倒置显微镜下观察细胞形态,测定生长曲线,分析MDSCs的增殖能力,采用结蛋白(Desmin)、CD34和CD45免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定。结果显示,已成功地从牛骨骼肌中分离培养出具有干细胞特征的细胞,该细胞呈Desmin和CD34阳性、CD45阴性。因此,可通过体外原代培养获得高纯度肌源性干细胞。
- 韩颖孔庆然尹智魏延昌张鑫淼汪亦男刘忠华
- 关键词：肌源性干细胞
- 克隆种公猪生长状况和繁殖性能评价被引量：4
- 2012年
- 体细胞核移植技术可以成功用于克隆性能优良的种用家畜,理论上克隆个体与供体在遗传上是完全相同的。为验证该理论,本试验检测了克隆种公猪自身在出生后的生长发育指标以及克隆种公猪与供核种公猪精液品质各项指标、情期受孕率、窝产仔数、产活仔数、断奶活仔数、仔猪初生重、仔猪断奶重和平均日增重等指标,探讨了克隆种公猪与供核种公猪在繁殖性能以及遗传性能之间的关系。结果显示,克隆种公猪与供核种公猪在各检测指标之间均不存在显著差异(P>0.05),提示克隆种公猪与供核种公猪在繁殖性能和遗传性能上无显著差异,可以作为种公猪用于扩繁。
- 逯心玉刘彪胡魁孔庆然苏兴盼李玉田刘忠华
- 关键词：克隆繁殖
