吴恒芳
- 作品数：31 被引量：92H指数：5
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省医学重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病
- 2006年
- 目的:观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。方法:实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行WesternBlotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量。结果:12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P<0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白I水平均正常(P>0.05)。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr55000,24000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达。③模型组在Mr55000,30000,28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P<0.05)。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在Mr55000,28000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55000,30000,28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达,正常对照组在Mr30000,见肌钙蛋白I表达,未见降解片断。结论:AdcCTnIArg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内�
- 朱春霞吴恒芳马继政朱舒舒陈相健卞智萍徐晋妉杨笛张寄南
- 关键词：肌钙蛋白I心肌
- 肥厚梗阻型心肌病化学消融术酒精用量对术后早期血流动力学和心脏重构的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨经皮室间隔心肌化学消融术(PTSMA)最适酒精使用剂量。方法:连续选择2007年1月～2010年12月在本院接受低剂量酒精(≤2.0 ml)消融的肥厚梗阻型心肌病(HOCM)患者10例;按1∶2配比的病例对照研究,选择2000年1月～2006年12月接受较大剂量酒精(>2.0 ml)消融治疗的患者20例作为历史对照组,分别评估两种治疗方案对术后早期血流动力学和心脏重构的影响。结果:低剂量和对照组术后即刻[(28.0±8.8)mmHg和(27.5±7.2)mmHg]、术后3个月[(29.5±6.6)mmHg和(28.1±5.0)mmHg]的左心室流出道压力阶差(LVOTPG)均较基线时[(69.9±13.1)mmHg和(70.6±13.4)mmHg]显著性下降(P<0.01),术后室间隔厚度明显减小(P<0.01),左心室舒张末内径无变化;而两组间术后即刻、术后3个月LVOTPG水平及下降幅度均无差异(P>0.05);相关分析显示,酒精用量分别与术后即刻LVOTPG以及术后3个月LVOTPG、室间隔厚度和左室舒张末内径等变化无相关性(P>0.05)。结论:小剂量酒精消融同样导致术后早期血流动力学和心脏结构的改善。
- 王晖徐东杰吴恒芳朱铁兵王连生戴振华杨迪杨志健曹克将
- 关键词：经皮室间隔心肌化学消融术
- 黄芪甲苷逆转血管紧张素Ⅱ引起的主动脉平滑肌细胞线粒体功能障碍被引量：5
- 2015年
- 目的 :研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,As-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)引起的线粒体功能障碍的逆转作用。方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),低血清培养液饥饿处理后分为24 h对照组、AngⅡ24 h处理组、48 h对照组、AngⅡ48 h处理组、As-Ⅳ治疗组。24 h对照组和AngⅡ24 h处理组使用线粒体呼吸功能检测仪进行线粒体呼吸功能检测,线粒体ATP含量检测;48 h对照组、AngⅡ48 h处理组和As-Ⅳ治疗组进行线粒体呼吸功能检测、线粒体ATP含量检测、电镜观察线粒体结构变化,共聚焦显微镜检测线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和Mn-SOD活性检测。结果:AngⅡ24 h处理组与24 h对照组相比,线粒体耗氧率(oxygen consumption rates,OCRs)出现下降,线粒体ATP含量减少(P≤0.05);AngⅡ48 h处理组与48 h对照组相比,线粒体OCRs显著下降,线粒体ATP含量明显减少(P<0.05),线粒体出现嵴模糊、肿胀、空泡,线粒体内ROS水平升高(P<0.05),Mn-SOD活性下降(P≤0.05);As-Ⅳ治疗组较AngⅡ48 h处理组线粒体OCRs和线粒体ATP含量明显回升(P<0.05),线粒体形态结构损伤减轻,线粒体内ROS水平降低(P<0.05),Mn-SOD活性升高(P≤0.05)。结论 :As-Ⅳ可以通过增强线粒体Mn-SOD活性,降低线粒体内ROS水平,进一步减轻线粒体结构损伤并提高线粒体OCRs和ATP含量,从而逆转AngⅡ引起的线粒体功能障碍。
- 路遥徐晋妉卞智萍吴恒芳顾春荣陈相健杨笛
- 关键词：黄芪甲苷线粒体功能障碍活性氧平滑肌细胞
- 肥厚型心肌病发病与心肌肌钙蛋白IArg145Trp突变研究
- 背景:肥厚型心肌病/(HCM/)是一种常染色体显性遗传的心肌疾病,主要表现为心肌肥厚,心肌细胞排列紊乱及间质纤维化。其人群发病率约0.2/%,是心血管系统最早发现且最常见的遗传性疾病。目前已检测出近300种突变与HCM的...
- 吴恒芳
- 关键词：肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白T复制缺陷型腺病毒成年大鼠心肌细胞无血清培养显微注射
- 文献传递
- 心脏肿瘤学(CardiOncology)--面对肿瘤病人心脏问题的一个新学科分支
- 陈相健吴恒芳赵树梅顾春荣杨笛李虹伟顾复生张寄南
- OX40L逆向信号对主动脉内皮细胞胞浆游离钙浓度的影响
- 背景:炎症反应在急性冠状动脉综合征及其它动脉粥样硬化性疾病中扮演重要的角色,并且OX40/OX40L双信号通路具有促进和加重炎症反应的作用。同时,在动脉粥样硬化斑块部位的巨噬细胞、内皮细胞以及淋巴细胞中均可检测到丰富的O...
- 刘强韩学府张丹丹吴恒芳卞智萍张寄南杨笛
- 关键词：游离钙浓度
- 文献传递
- 黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护作用被引量：9
- 2014年
- 目的:研究黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护作用。方法:采用两肾一夹制备肾血管性高血压大鼠,术后2周将大鼠随机分为手术组和黄芪甲苷治疗组[5.0 mg/(kg·d)],以假手术组为正常对照,治疗2周后,观察大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体超微结构的变化,应用免疫组化染色法观察大鼠胸主动脉内皮细胞锰超氧化物歧化酶(SOD2)的表达。结果:术后2周大鼠收缩压明显高于正常对照大鼠。手术组大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体内嵴断裂、消失,基质电子密度降低,肿胀、空泡化明显;黄芪甲苷治疗后大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体损伤程度明显减轻。手术组大鼠胸主动脉内皮细胞SOD2表达水平较正常对照大鼠明显降低,黄芪甲苷治疗后恢复至正常大鼠水平。结论:黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体的损伤有保护作用,上调主动脉内皮细胞SOD2表达是其可能途径之一。
- 张少君吴恒芳陈相健杨笛朱铁兵
- 关键词：黄芪甲苷肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞锰超氧化物歧化酶
- 心肌病心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解的初步研究
- 2007年
- 目的探讨心肌肌钙蛋白 I(cTnI)在心室扩张、心力衰竭患者心肌组织中的磷酸化与降解及其信号通路调节。方法 4例原发性扩张型心肌病患者。3例其他病因继发心室扩张,心脏移植术受体心脏,1例行双瓣膜置换及左心室改良术,部分左心室切除心肌组织。6例正常心脏。分别行光镜、电镜病理学检测,Western blot 方法检测左心室心肌组织 cTnI 磷酸化、去磷酸化,cTnI 降解片段及蛋白激酶 C(PKC)表达,甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参半定量。结果扩张左心室心肌内均检测到 cTnI 表达及降解片段,正常左心室心肌内均可见 cTnI 表达,未见降解条带。扩张左心室心肌均有明显磷酸化 cTnI 表达,半定量结果均明显高于正常对照组(P<0.05),两组心肌病表达比较差异无统计学意义。扩张左心室心肌内均可见程度不同的去磷酸化 cTnI 表达,正常组未出现明显去磷酸化 cTnI 表达。扩张左心室及正常对照组左心室心肌组织内均未检测到明显的 PKCβ1、PKCβ2表达。结论扩张心室心肌组织内 cTnI 降解片段的存在可能与心肌病变的发生、发展有关,并在长期慢性心功能的损害中起重要作用。衰竭心肌组织内 cTnI 磷酸化程度显著增强,PKCβ1、PKCβ2与其磷酸化程度增高可能不相关。
- 朱春霞吴恒芳陈相健赵胜卞智萍徐晋姚杨笛袁彪张寄南
- 关键词：氧化磷酸化降解
- 肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白I R145W突变对大鼠心肌细胞钙调控的影响被引量：3
- 2007年
- 目的探讨国人新的致肥厚型心肌病(HCM)心肌肌钙蛋白 I 基因突变(eTnI R145W)引起 HCM 发病的可能机制。方法采用定点突变技术在大鼠 cTnI cDNA 引入 R146W(相当于人R145W)突变,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)做报告基因,构建含野生型和突变型大鼠 cTnI cDNA 的重组腺病毒载体。Langendoff 逆流灌注系统分离成年大鼠心肌细胞,无血清法培养后重组腺病毒转染。Western blot 检测重组蛋白的表达,全膜片钳技术记录心肌细胞膜 L 型钙电流,Fura-2/AM 孵育后测定细胞内游离钙离子浓度和咖啡因诱导的肌浆网钙释放。结果 DNA 测序证实 R146W 突变成功引入大鼠 cTnI cDNA。新鲜分离的成年大鼠心肌细胞存活率达70%～80%,无血清培养7天后绝大部分能保持长杆状形态。重组腺病毒转染48h 后荧光显微镜下可观察到绿色荧光,cTnI 和绿色荧光蛋白单抗均能检测到重组蛋白。与野生型 cTnI 和正常对照组比较,突变型 cTnI 组心肌细胞膜 L 型钙电流峰值明显降低。Fura-2/AM 法测定细胞内游离钙离子浓度和咖啡因诱导的肌浆网钙释放,三组之间差异无统计学意义。结论含 R146W 突变的 cTnI 蛋白可能引起心肌细胞的电生理学重构,进一步研究可探讨肌丝对钙的敏感性及钙调节蛋白表达的改变。
- 吴恒芳陈相健杨笛卞智萍徐晋妉张寄南
- 关键词：突变腺病毒科L型钙通道
- 黄芪甲苷对小鼠心肌梗死后左室功能的作用
- 研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对小鼠心梗后左室功能的影响及可能机制.分离冠脉左前降支(LAD)与伴行静脉并于左心耳下缘2mm处结扎制备心梗模型(手术组),结扎后小鼠每日腹腔注射10 mg·kg AS-Ⅳ(治疗组);以分离LAD...
- 李苏陈相建吴恒芳杨笛
