刘晓琼
- 作品数：8 被引量：31H指数：5
- 供职机构：中山大学肿瘤防治中心更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Epstein-Barr病毒A73基因在鼻咽癌组织中的表达及其细胞内定位研究被引量：5
- 2003年
- 背景与目的:A73基因是EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)BamHⅠA区右向转录物家族(BamHⅠArightwardtranscripts,BARTs)的主要成员,该家族基因转录表达于多种EB病毒相关细胞和肿瘤。本研究旨在了解A73基因在广东地区鼻咽癌病例中的表达特点,克隆该基因并明确其在上皮细胞中表达的亚细胞区域。方法:收集鼻咽癌组织、鼻咽非癌组织和鼻咽癌外周血淋巴细胞,常规培养SUNE1、B95.8、Raji和BJAB等细胞株,分别提取各样品的DNA和总RNA,以巢式PCR扩增W序列来检测EB病毒的感染,RT-PCR检测A73基因在各组织、细胞株中的表达,克隆测序后定向亚克隆入pEGFP-C2绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)表达载体,通过脂质体转染技术将其转入人胚肾上皮(humanembryokidney293,HEK293)细胞,RT-PCR检测A73mRNA的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察融合蛋白表达的亚细胞区域。结果:除BJAB细胞株外,所有标本中均检测到EB病毒W序列;A73mRNA在鼻咽癌组织中的表达率为79.63%(43/54),在鼻咽非癌组织中则仅为4%(1/25),两者差异有显著性(P<0.001);鼻咽癌外周血淋巴细胞中未检测到A73表达,SUNE1细胞中A73的表达高于B95.8和Raji细胞。所构建的A73重组质粒可稳定表达于HEK293细胞,其编码蛋白的表达以胞浆为主。
- 李昂张晓实王鸿鹤姜桔红刘晓琼刘启才曾益新
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒鼻咽癌上皮细胞绿色荧光蛋白
- 抑制性消减杂交分析肌动蛋白细胞骨架和细胞外基质基因在膀胱癌中的表达下调被引量：7
- 2002年
- 目的 分析膀胱移行细胞癌的差异表达基因 ,探讨肿瘤行为的分子生物学基础及筛选有效的肿瘤标记。方法 应用抑制性消减杂交 (SSH)方法构建在正常膀胱组织和膀胱癌组织中差异表达序列的消减文库 ,用差异筛选技术分离差异表达基因。结果 从消减文库中共获得了 9个在正常膀胱组织中高表达、在膀胱癌组织中表达下调的基因 ,分别属于细胞外基质成分和肌动蛋白细胞骨架体系。结论 细胞外基质和肌动蛋白细胞骨架体系中相关基因的表达下调可能反映了肿瘤细胞在细胞粘附、细胞间相互作用、迁移及运动等诸多过程中的异常 ,可能与癌细胞的侵袭和转移密切相关 ,对发展成为膀胱癌的分子标记物具有潜在价值 ;gelsolin。
- 刘晓琼付捷杨林王瑾雯龙綮新王珣章秦杨吕任奇
- 关键词：肌动蛋白细胞骨架膀胱癌基因表达
- 3号染色体短臂鼻咽癌候选抑癌基因的研究
- 该文采取定位侯选策略,在染色体3p的高频缺失区域中选取与癌症有关的候选基因,对候选基因在鼻咽癌组织和细胞系中进行了广泛地突变和表达检测,并进一步对在鼻咽癌中发生高频变异的候选基因进行启动子甲基化分析和功能研究,以期寻找和...
- 刘晓琼
- 关键词：鼻咽癌抑癌基因RT-PCR方法CNE2细胞
- 文献传递
- 在鼻咽癌中hCDC4基因编码区不存在突变
- 2002年
- 目的：hCdc4蛋白可以通过泛素介导的蛋白降解途径来调节细胞周期素E的水平。在一些人类肿瘤细胞系中，发现hCdc4突变。方法：采用PCR-测序方法在3个鼻咽癌(NPC)细胞系和21例NPC活检组织中对hCDC4基因的编码区进行了检测。结果：没有发现hCDC4基因突变。结论：说明hCDC4基因可能与NPC发病无关。
- 陈汉奎林洁刘晓琼邹青峰王远东
- 关键词：鼻癌基因编码区基因突变
- 3p21.3区域鼻咽癌相关基因——BLU的抑癌功能被引量：8
- 2003年
- 背景与目的:染色体3p21.3区域的杂合性丢失是鼻咽癌细胞中高发和早期的细胞遗传学变异,提示缺失区域内可能存在与鼻咽癌发生相关的抑癌基因。BLU基因定位于3p21.3,蛋白质结构中含有MYND功能域。已有研究表明,BLU基因在鼻咽癌细胞中发生高频率的启动子甲基化和表达缺失。本研究构建了野生型BLU基因和其突变体的表达载体,分析BLU基因对鼻咽癌细胞恶性增殖的可能抑制作用。方法:用RT-PCR方法钓取BLU基因全长cDNA;用定点突变技术分别构建缺失MYND结构域的突变体、携带Ser402Phe点突变及缺失第405位Cys和第406位Ser的突变体、以及携带Gly160Arg点突变的BLU基因突变体的表达载体。将野生型BLU基因和MYND缺失型突变体转染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,用TUNEL方法检测、观察细胞凋亡情况;通过细胞计数和克隆形成实验分析稳定转染细胞的生长特性;分析稳定转染BLU基因的载体对CNE2细胞裸鼠致瘤性的影响。结果:瞬时转染野生型或MYND缺失突变型BLU基因不能诱导CNE2细胞凋亡;外源表达BLU基因对CNE2的细胞凋亡以及对CNE1、CNE2的细胞增殖和克隆形成能力均无明显影响;BLU基因对CNE2细胞的裸鼠成瘤能力也没有明显抑制作用。结论:尽管BLU基因在鼻咽癌中发生高频率变异,但其对鼻咽癌细胞的恶性增殖并没有明显抑制作用。
- 刘晓琼潘志刚李满枝姜桔红付捷龙綮新王睤章曾益新
- 关键词：鼻咽癌TUNEL基因缺失肿瘤生物学
- 发育调控基因Pax5 mRNA在膀胱癌中的表达及意义被引量：1
- 2001年
- 了解发育调控基因Ｐａｘ５在膀胱肿瘤中的表达，探讨其在膀胱肿瘤发生发展中的作用．采用逆转录ｍ（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交方法检测１３例膀胱移行细胞癌（ＴＣＣ）组织、４例癌旁组织、３例正常组织和３种癌细胞系（膀胱移行细胞癌。结肠腺癌、肺癌）中 Ｐａｘ５ ｍＲＮＡ的表达．结果显示，３种癌细胞系中均有Ｐａｘ５ｍＲＮＡ表达； １３例膀胱肿瘤组织和４例癌旁组织中Ｐａｘ ５ｍＢＮＡ阳性表达分别为１０例和３例，阳性率为７７％和７５％．３例正常组织中仅有 １例检出 Ｐａｘ５ ｍＲＮＡ表达．Ｐａｘ５基因在膀胱肿瘤组织中的表达提示Ｐａｘ５调控通路可能在膀胱肿瘤发生发展中具有重要作用．
- 刘晓琼秦杨杨林赵体德王珣章
- 关键词：膀胱肿瘤发育调控基因逆转录PCR
- 鼻咽癌中KLF6基因突变的检测被引量：5
- 2002年
- 背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)高发于中国南方和东南亚地区,其发病是一个多因素、多步骤的过程,与遗传因素、EB病毒感染和环境因子有关,但分子机理仍不清楚。KLF6基因编码一种广泛表达的核转录因子,在某些前列腺癌肿瘤中发现有高频的等位基因的丢失和基因突变。本研究通过对KLF6基因在NPC肿瘤中的突变检测,探讨KLF6基因与NPC发病的关系。方法:采用PCR-直接测序分析方法,在19例散发性NPC组织细胞和3个NPC细胞系(CNE1,CNE2,SUNE1)中对KLF6编码区和拼接位点进行检测。结果:在3例散发性NPC肿瘤组织DNA中检测到KLF6基因的3个不同位置的错义改变,分别为GAG→GTG(Glu75Val)、AGC→AGG(Ser136Arg)和AGA→AAA(Arg243Lys),在50个随机正常个体(100条染色体)和3个NPC细胞系中没有发现这3个位点的碱基变异。结论:这3个变异可能是KLF6基因的新的突变位点,在某些NPC发病中可能有作用。
- 陈汉奎刘晓琼林洁陈天渝冯启胜曾益新
- 关键词：基因突变鼻咽肿瘤NPC
- SEMA3B、SEMA3F基因在鼻咽癌细胞中突变和表达的研究被引量：6
- 2003年
- 背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)致病的分子机理至今仍不清楚,但高频的杂合性缺失和功能学证据均表明染色体3p21.3区段中存在着与鼻咽癌相关的抑癌基因。SEMA3B和SEMA3F基因是定位于3p21.3的两个semaphorin家族成员,最近被鉴定为抑癌基因。本研究通过对SEMA3B和SEMA3F基因在鼻咽癌中的突变和表达检测,探讨SEMA3B和SEMA3F基因与鼻咽癌发病的关系。方法:采用PCR-直接测序方法,在21例散发性NPC组织和2例NPC细胞株(CNE2,SUNE1)中对SEMA3B和SEMA3F基因的编码区、拼接位点和部分调控区进行突变检测;利用半定量RT-PCR方法,检测SEMA3B和SEMA3F基因在鼻咽癌中的表达。结果:在鼻咽癌中未发现SEMA3B或SEMA3F基因具有体细胞突变,但在SEMA3B基因中发现两个导致氨基酸改变的单核苷酸多态性Thr415Ile和Ile242Met。在Thr415Ile多态位点中,可导致SEMA3B基因功能缺陷的Ile等位基因频率在鼻咽癌患者中占有较高比例(64%,27/42)。SEMA3BmRNA在6例鼻咽非癌组织中正常表达,但在76%(16/21)的鼻咽癌组织中表达下调或缺失;SEMA3FmRNA的表达水平在鼻咽癌和非癌组织中无明显差异。结论:SEMA3BmRNA在鼻咽癌中发生高频表达缺失说明该基因失活与鼻咽癌密切相关,SEMA3B基因可能是定位于染色体3p21.
- 刘晓琼孙敏陈汉奎李京湘潘志刚龙綮新王珣章曾益新
- 关键词：基因突变杂合性缺失鼻咽癌
