刘敬华
- 作品数：12 被引量：112H指数：7
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省卫生厅科学研究基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种鉴定结核分枝杆菌“北京家族”菌株的新方法被引量：22
- 2008年
- 目的研究结核分枝杆菌“北京家族”菌株鉴定的新方法——RD105缺失检测的可行性。方法分别应用间隙寡核苷酸分型（Spoligotyping）和RD105缺失检测两种方法对结核分枝杆菌进行“北京家族”的鉴定，比较分析两种方法进行菌株鉴定结果的差异。结果共对来自北京、福建、新疆和吉林的342株结核分枝杆菌临床分离菌株进行了鉴定，“北京家族”菌株261株，占76．32％。非“北京家族”菌株81株，占23．68％。两种方法鉴定结果的符合度达100％。结论简单、快速的新方法——RD105缺失检测可替代原始经典方法Spoligotyping用于结核分枝杆菌“北京家族”菌株的鉴定。
- 刘敬华ChristinePourel Yolande Hauck赵秀芹刘志广万康林
- 关键词：北京家族
- 结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征初步分析被引量：22
- 2006年
- 目的阐明结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法对110株结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286 bp片段进行聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌rpoB基因此扩增区域进行序列测定。其中利福平耐药株73株,非利福平耐药株11株,敏感株26株。结果PCR-SSCP检测显示利福平耐药株中有47株有突变存在,经直接测序分析其中76．6%的菌株存在rpoB基因的单位点突变,主要集中在531位(61．1%)和526位(25．0%)；联合突变发生率为23．4%。此外,经PCR-SSCP检测,11株非利福平耐药株中2株有突变存在,26株敏感株中1株有突变存在。经直接测序分析突变涉及位点为511位、526位和535位。结论rpoB基因耐药决定区发生突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。
- 刘敬华张丽水刘志广黄明翔赵秀芹王琳万康林
- 关键词：结核分枝杆菌耐药聚合酶链反应-单链构象多态性
- IS6110限制性片段多态性分析标准方法的建立及其在结核分枝杆菌分子分型中的应用被引量：5
- 2008年
- 目的建立IS6110限制性片段多态性分析（IS6110一RFLP）标准方法并评价该方法的分型能力。方法采用核酸提取、PCR、限制性内切酶分析、Southern杂交、琼脂糖凝胶电泳等技术，结合Gel—Proanalyzer3．1和BioNumerics（Version5．0）软件，对78株结核分枝杆菌插入序列IS6110-RFLP进行分析。结果确定标准化的IS6110-RFLP技术，包括核酸提取、PCR、限制性内切酶分析、Southern杂交、琼脂糖凝胶电泳等实验步骤及标化参数的相关数据分析软件的使用；采用该技术，将78株结核分枝杆菌分为75个不同的基因型，分别归属于11个基因簇，其中有52株归属于同一个基因簇，占菌株总数的66．7％（52／78）。结论建立标准化的IS6110-RFLP技术方案，该方法具有很强的基因分型和株水平鉴定能力，可用于结核病的病原学监测。
- 刘敬华Kristin KremerChristine PourcelArnout Mulder刘志广赵秀芹万康林
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌分型鉴定技术及其研究进展
- 2004年
- 结核分支杆菌的分型鉴定方法,主要分为非核酸法和核酸法.非核酸分型方法即传统分型方法,多是在细菌表型特征的基础上认识细菌的,包括生化分型法、血清分型法和噬菌体分型法.但由于结核分枝杆菌分离株具有高度同源性,通过常规的生化试验和血清学方法是无法鉴别的,所以,对于结核分枝杆菌,唯一可用的传统的菌株鉴定方法只有噬菌体分型法.随着分子生物学理论和技术的飞速发展,1980年以后,逐步建立了一些根据核酸序列进行菌株鉴定的高度特异的基因分型方法,即核酸法.主要包括:限制性片段长度多态性、DNA指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳、PCR酶切分型、随机扩增多态性DNA、DNA序列分析以及基因芯片技术等等.随着上述方法的应用,使结核分枝杆菌的菌株分型进入了一个全新的领域,也进而使结核病流行病学的研究取得了很大的进展.……
- 刘敬华万康林程诗明
- 13个VNTR位点用于113株结核分支杆菌的基因分型研究被引量：10
- 2006年
- 目的应用数目可变串联重复序列(VNTR)分子分型技术,对北京地区113株肺结核临床分离菌株进行分型研究,探讨北京地区菌株DNA多态性和基因型特征。方法采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分支杆菌13个VNTR位点进行检测,并应用Gel-Pro analyzer 3．1软件和BioNumerics 3．0软件进行结果分析。结果113株结核分支杆菌可分为4个基因型(分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ型),其中Ⅰ型占92．0％(104／113),其他3型所占比例很小,分别为Ⅱ型占4．4％(5／113),Ⅳ和Ⅴ型均为1．8％(2／113),而标准菌株H37Rv在分型中为独立的一个基因型,即Ⅲ型。结论北京地区的结核分支杆菌存在基因多态性,其主要流行型为Ⅰ型。
- 曹晓慧蒋毅张媛媛刘志广赵秀芹金秀琴韩宝龙徐瑞兴刘敬华吕晶薛小洛万康林
- 关键词：结核分支杆菌基因分型聚类分析
- 结核分支杆菌株水平鉴定技术及其研究进展被引量：12
- 2003年
- 刘敬华万康林成诗明
- 关键词：结核病流行病学发病机制
- 结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分型方法标准化操作程序的建立被引量：28
- 2008年
- 目的建立结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）的标准化方法，评价该方法的分型能力、应用价值。方法选取15个位点，采用核酸提取、PCR和琼脂糖凝胶电泳等技术，结合BioNumerics（Version5．0）软件，对中国54株结核分枝杆菌临床分离株进行分型。结果确定标准化的MLVA方法，包括细菌分离培养、核酸提取、PCR、琼脂糖凝胶电泳等实验步骤及标化参数的相关数据分析软件的使用。VNTR位点确定为ETRA、ETRB、ETRC、ETRD、ETRE、MIRU10、MIRU16、MIRU23、MIRU26、MIRU27、MIRU39、MIRU40、Mtub21、Mtub30和Mtub39。结论建立MLVA标准化技术方案，该方法操作简便，分型鉴定能力及实验室间结果可比性强，便于网络化，有利于结核病流行中追溯传染源，分析流行趋势。
- 吕冰Christine Pourcel刘敬华董海燕张媛媛蒋毅刘志广赵秀芹万康林
- 关键词：结核分枝杆菌
- 5个VNTR位点用于我国三省65株结核分支杆菌菌株基因分型的研究被引量：4
- 2004年
- 目的初步探讨我国结核分支杆菌的数目可变串联重复位点 (VariableNumberofTandemRepeat ,VNTR)的分布特征及其在基因分型中的应用。方法 选取结核分支杆菌基因组中的 5个VNTR位点 ,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术 ,并应用BioNumerics(Version3.0 )软件进行处理 ,分析结核分支杆菌DNA中VNTR分布多态性。结果 检测分析的 6 5株结核分支杆菌具有明显的多态性 ,共分成 12个不同的型别 ,其中大部分菌株属于一个型 ,占 6 4 .6 % ,其他菌株呈散在分布。结论 我国结核分支杆菌的VNTR具有明显的多态性。VNTR分型技术具有简便、快速、特异、重复性好等优点 ,可广泛用于结核病的分子流行病学研究。
- 刘敬华万康林刘志广张媛媛赵秀琴王庆谭云洪许卫国
- 关键词：VNTR位点结核分支杆菌菌株基因分型
- 7个VNTRs用于65株中国分离的结核分枝杆菌基因多态性研究被引量：14
- 2004年
- 目的 应用数目可变串联重复位点 (variablenumberoftandemrepeats ,VNTRs)分子分型技术 ,初步探讨我国结核分枝杆菌的基因多态性特征。方法 采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术 ,对结核分枝杆菌的 11个数目可变重复位点进行检测 ,并应用Gel Proanalyzer 3.1软件和BioNumerics(Ver sion 3.0 )软件进行结果分析 ,分析结核分枝杆菌DNA多态性特征。结果 选取结核分枝杆菌基因组中的 7个 (ETR A、ETR B、ETR C、ETR D、ETR E、ETR F、MPTR A)具有明显多态性特征的串联重复位点 ,检测分析了 6 5株来自安徽、湖南和江苏省的结核分枝杆菌 ,结果显示被测菌株可分为 10个不同的基因型 ,其中以 2个型别为主 ,占总菌株数的 6 9.2 % ,其他菌株呈散在分布。结论 采用VNTR分型技术初步分析表明 ,中国结核分枝杆菌具有明显的基因多态性 ,且存在主要流行菌群。
- 刘敬华Christine Pourcel赵秀芹万康林刘志广张媛媛王庆谭云洪许卫国
- 关键词：结核分枝杆菌基因多态性VNTR分子分型分型技术流行菌群
- DNA数目可变串联重复序列用于结核分枝杆菌分型研究被引量：8
- 2005年
- 目的 采用数目可变串联重复序列 (VNTR)分型方法对安徽省的 5 2株结核分枝杆菌进行分子分型研究 ,探讨该方法用于结核分枝杆菌分型的作用。方法 设计引物 ,采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分枝杆菌 13个VNTR位点进行检测 ,并通过BioNumerics 3 0软件进行DNA指纹图谱多态性分析。结果 5 2株结核分枝杆菌可分 4个类别 ,其中 88. 5 %菌株属于一个型 ,其他 3个型所占比例很小 ,分别为 5 . 8%、3 .8%和 1 .9%。结论 来自安徽的结核分枝杆菌存在主要的流行型 ,VNTR分型技术简便、快速 ,是较好的结核分枝杆菌分型方法。
- 阚晓宏万康林金玉莲刘敬华杨建安刘志广丁虹赵秀琴王庆唐婧
- 关键词：结核分枝杆菌数目可变串联重复序列基因分型
