冯文利 作品数:5 被引量:16 H指数:2 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 国家大学生创新性实验计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
白血病细胞中共表达P2X7受体和Notch1胞内区 被引量:2 2013年 本研究旨在构建野生型及N187D突变型P2X7与ICN1基因的共表达载体,并在白血病细胞中表达,为进一步探讨P2X7在白血病发展中的作用奠定基础。采用Overlap PCR法,通过2A连接,构建野生型或N187DP2X7与ICN1的共表达载体;经DNA序列分析验证后,包装病毒、感染K562细胞并经细胞分选获得稳定感染细胞系。采用RT-PCR、Western blot、胞浆游离钙离子浓度测定等方法,验证外源基因的表达及P2X7受体的功能。结果表明,序列分析显示载体构建正确;包装病毒对K562细胞感染效率40%-70%,流式分选获得稳定表达细胞株;RT-PCR结果显示,P2X7受体和/或ICN1基因可在对应的稳定表达细胞株中高效表达;Western blot也证明,P2X7受体可在感染编码P2X7受体基因病毒的K562细胞中高效表达;胞浆游离钙离子浓度检测显示,在BzATP刺激下,表达野生及N187D突变型P2X7的K562细胞胞浆游离钙离子浓度持续升高。结论:本研究在白血病细胞中成功共同高表达P2X7受体与ICN1,为进一步探讨野生型和N187D突变型P2X7受体在白血病发展中的作用奠定基础。 冯丽 杨骁 廖金凤 陈莎燕 冯文利 林永敏 任倩 郑国光关键词:白血病细胞 P2X7受体 NOTCH1 胞内区 氧化型低密度脂蛋白促动脉硬化机制 被引量:13 2015年 动脉粥样硬化(As)是一种复杂的炎症性疾病,主要症状为动脉壁增厚变硬,失去弹性及管腔狭小等。其伴随的病理特征主要为动脉某些部位内膜下脂质沉积,伴有平滑肌细胞和纤维基质成分的增殖,并逐步发展形成动脉硬化斑块。研究发现低密度脂蛋白(LDL),尤其是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)在As的发病形成过程中起着重要作用。 张谦 李培华 岳文峰 冯文利 阿拉坦高勒关键词:氧化型低密度脂蛋白 溶血磷脂酰胆碱 溶血磷脂酸 动脉粥样硬化 兔LPA受体(LPAR1-LPAR3)保守片段的克隆及同源性分析 背景:溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)是一种细胞膜脂类衍生物,由血小板、成纤维细胞、癌细胞和脂肪细胞分泌,在多种重大疾病如心脑血管病、肾病、肿瘤的发生、发展中起着重要作用,LPA的上述各种... 冯文利 张学娇 马强 李敏 Gansukh Oyun 阿拉坦高勒关键词:基因克隆 同源性分析 人质子感知受体TDAG8基因的克隆、表达载体构建及瞬时转染293T细胞 被引量:1 2012年 克隆了人质子感知受体TDAG8基因,构建了TDAG8基因的表达载体并瞬时转染293T细胞,检测了TDAG8的过表达。从人胃癌组织cDNA中克隆了TDAG8基因,亚克隆到pEASY-T1载体,通过测序、酶切、连接到表达载体pEGFP-N3,通过酶切、测序鉴定获得了pEGFP-N3-TDAG8重组质粒;表达载体以lipofectamine2000介导转染了293T细胞。Real time PCR法检测了外源基因在293T细胞中的表达。结果表明:克隆到了TDAG8基因并获得了pEGFP-N3-TDAG8表达载体,在293T细胞中检测到了表达过的TDAG8基因。 杨德志 李敏 马强 冯文利 阿拉坦高勒关键词:基因克隆 瞬时转染 293T细胞 MLL-AF9 AML模型NK细胞终末功能成熟的研究 背景:在近年来的研究中,NK细胞发育、功能及相关通路机制的研究受到了广泛关注。作为肿瘤微环境中重要组成成分,NK细胞参与白血病免疫反应,并且其功能行使与终末阶段功能成熟密切相关。目的:利用MLL-AF9诱导的小鼠AML模... 杨斐斐 王荣 冯文利 陈冲 杨骁 王丽娜 胡雨婷 任倩 郑国光关键词:AML NK细胞 文献传递