黄昭亮
- 作品数：2 被引量：20H指数：1
- 供职机构：广东药学院生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：广东省大学生创新实验项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应
- 2012年
- 目的探讨HLA—A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用。方法生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽；流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率；肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）诱导反应性CTLs，用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况；肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育，CytoTox96@非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况，倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化。结果生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2（KMSSGCAFL），流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞，HLA-A2表达率显著提高，经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ，Sur79M2诱导的CTLs能通过HIA．A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2，对HLA—A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用。结论点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生，该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系。
- 沈晗黄昭亮陈晓华林燕梅王腾邵红伟黄树林
- 关键词：SURVIVIN抗肝癌HLA-A2限制性
- 腹水型单克隆抗体纯化方法的研究被引量：20
- 2013年
- 目的比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果,探索出最适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的IgG1单克隆抗体腹水(4-D10)分别利用两步硫酸铵沉淀法(AS法)、辛酸-硫酸铵沉淀法(CA-AS法)、辛酸-硫酸铵沉淀法联合DEAE阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白G亲和层析法纯化处理后,经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后,比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果①AS法的蛋白纯度为25%,低于CA-AS法(44%);AS法回收率为63%,高于CA-AS法(41.8%);比较抗体效价表明,AS法(1.024×106)与CA-AS法(1.024×106)两者相当。②粗提后纯化效果表明,蛋白G亲和层析法回收率明显降低,DEAE纯品虽纯度略低,但回收率较高,且效价(5.12×105)高于蛋白G亲和层析法(1.28×105)。结论 CA-AS联合DEAE离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。
- 肖增鸿黄昭亮林月霞董斌田素娟
- 关键词：分步沉淀色谱法离子交换
