鲁茁壮
- 作品数：84 被引量：191H指数：7
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术农业科学更多>>
- 腺病毒-甲病毒杂合载体的构建
- 2010年
- 目的将腺病毒Ad5/F11p造血细胞靶向和甲病毒复制子载体目的基因高效转录的特点相结合,构建腺病毒-甲病毒杂合载体,以提高目的基因在造血细胞的表达水平。方法基本实验过程包括骨架质粒构建,穿梭质粒构建,同源重组产生杂合病毒基因组,杂合病毒在包装细胞的拯救和扩增,以及杂合病毒对造血细胞基因转移效率的初步评价。具体步骤如下:利用重叠延伸PCR技术将pFiber5/11p质粒上Ad5的E4区部分删除产生骨架质粒pAdEasy/F11pDE4orf3。在pShuttle质粒的多克隆位点处分别插入造血细胞特异性启动子(CD11a promoter,CD11Ap)、甲病毒载体元件(nsP)、目的基因(GFP)、PolyA加尾信号构建杂合穿梭质粒pSh-SFV-GFP。骨架质粒与穿梭质粒在大肠杆菌BJ5183菌株中同源重组产生杂合病毒质粒pAd5/F11p-SFV-GFP,经与辅助病毒质粒Ad5/f11p-HV共转染293细胞后拯救出杂合病毒Ad5/F11p-SFV-GFP,经CsCl密度梯度离心法纯化,得到的病毒滴度为3×1010pfu/ml。与对照病毒Ad5-GFP相同感染复数(100MOI)分别感染U937细胞,利用流式细胞术检测GFP+细胞比例。结果pAdEasy-1/F11p-E4orf3和pSh-SFV-GFP经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致;CsCl密度梯度离心纯化得到杂合病毒;100MOI Ad5/F11p-SFV-GFP感染U937细胞2 d后,GFP+细胞比例为55.79%,而对照病毒Ad5-GFP的感染效率为2.42%。结论成功构建了腺病毒-甲病毒杂合载体,为进一步评价其对造血细胞的基因转移效率奠定了基础。
- 李泽良王华杨月峰肖凤君鲁茁壮王立生
- 关键词：腺病毒科甲病毒属复制子基因转移技术
- 携带人鞘氨醇激酶及突变体基因重组腺病毒载体的制备及表达被引量：3
- 2005年
- 目的 制备携带人野生型鞘氨醇激酶基因(SPKwt)及其突变体(SPKDN)的腺病毒载体,为研究SPK的生物学功能提供高效基因转移载体。方法 将野生型和突变体SPK基因亚克隆至穿梭载体pshuttle cmv,重组的穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,电转化E. coliBJ AD 1感受态,获得带有目的基因的腺病毒重组子质粒;重组子经PacⅠ线性化后,以脂质体介导转染293包装细胞,获得重组腺病毒载体;分别行PCR鉴定重组腺病毒是否携带目的基因,Western blot鉴定目的基因是否表达,酶活性检测判断野生型基因和突变体基因表达活性。结果 重组腺病毒带有目的基因,可以感染内皮细胞并正确表达,酶活性分析表明野生型SPK基因增强SPK活性,突变体SPK基因抑制SPK活性。结论 成功构建了携带SPK野生型及其突受体的重组腺病毒,为研究SPK的功能提供了物质基础。
- 易军鲁茁壮段海峰王莉陈光辉王立生
- 关键词：腺病毒科鞘氨醇激酶突变体
- 重组人Delta-like-1胞外区促进细胞因子对脐带血造血祖细胞的扩增
- 2004年
- 目的 :Notch信号通路对造血干 /祖细胞的增殖分化具有重要调控作用。Delta like 1(Dll 1)是Notch的配体之一 ,本研究观察了重组人Dll 1胞外区 (hDll 1ext)对细胞因子扩增脐带血造血祖细胞的促进作用。方法 :RT PCR用于检测Notch 1及其配体在脐带血细胞上的表达情况。利用免疫磁性分离 (MACS)的方法分离人脐带血CD34+ 细胞。在无血清培养体系中 ,hDll 1ext分别和不同的细胞因子组合联合培养CD34+ 细胞 ,通过集落形成实验检测hDll 1ext对造血祖细胞的扩增作用。结果 :RT PCR方法检测到脐带血单个核细胞表达Notch 1和它的配体Dll 1,Jagged 1,表明在生理条件下 ,脐血细胞的增殖分化可能受到Notch信号的调控。hDll 1ext能促进细胞因子组合对脐带血HPP CFC的扩增 ,其中hDll 1ext和SCF ,IL 3,IL 6联合的扩增作用最强 ,无血清培养 8,12d后 ,HPP CFC分别增加为培养前的 9.7和 4 3倍。结论 :重组hDll
- 鲁茁壮吴祖泽张群伟王华刘红军贾向旭王立生
- 关键词：NOTCH胎血细胞因子类
- 肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞对四氯化碳所致慢性肝损伤的治疗作用被引量：5
- 2005年
- 本研究基于肝细胞生长因子（HGF）能够促进肝脏细胞再生，抗纤维化及促进干细胞向肝脏细胞分化；骨髓干细胞具有向肝脏细胞分化或与肝脏细胞融合的特性，在肝脏细胞再生和修复中具有重要的作用。将肝细胞生长因子和骨髓间充质干细胞结合起来，即对间充质干细胞进行肝细胞生长因子的基因修饰，然后观察基因修饰后的间充质干细胞对四氯化碳（CCl4）慢性肝损伤的治疗作用，希望能为慢性肝病的治疗提供新的方法和途径。
- 王莉莎段海峰扈江伟张群伟王华鲁茁壮吴祖泽王立生
- 关键词：干细胞肝细胞生长因子慢性肝损伤
- 人巨细胞病毒感染指示细胞株的建立
- 2015年
- 目的 建立指示细胞株,该细胞株被人巨细胞病毒（HCMV）感染后能够诱导表达绿色荧光蛋白（GFP）.方法 使用PCR方法克隆GFP基因和HCMV UL54基因的启动子（UL54p）;用GFP替换质粒pGL4.17[luc2/Neo]中的luc2基因,并将UL54p序列插入多克隆位点得到报告质粒pGL4UL54p-GFP.将该质粒转染永生化的人胚肺成纤维细胞MRC-5T,通过G418筛选,获得多株克隆化的MRC-5TUG细胞.使用HCMV（AD169毒株）感染各株MRC-5TUG,利用荧光显微镜观察GFP表达情况.使用人5型腺病毒和H1N1甲型流感病毒感染筛得的目的细胞株,观察GFP表达情况.结果 构建的报告质粒pGL4UL54p-GFP经酶切和测序鉴定,证实与预计的一致.质粒转染MRC-5T细胞,筛得9株MRC-5TUG克隆化细胞株;HCMV感染后,有2株细胞GFP表达由阴转阳,其中MRC-5TUG#7细胞GFP表达最强.人腺病毒和流感 病毒感染MRC-5TUG#7,GFP不表达.结论 成功构建了MRC-5TUG细胞,该细胞可以用于指示HCMV的感染。
- 郭小娟邹小辉吴萌屈建国鲁茁壮洪涛
- 关键词：巨细胞病毒基因表达荧光抗体技术
- p53与p21/WAF1/CIP1基因对肿瘤细胞辐射敏感性的修饰
- p53基因与细胞辐射敏感性密切相关,但其机理比较复杂.诱导细胞内p53的表达可以 产生细胞凋亡或细胞周期滞两方面的结果,细胞周期蛋白激酶抑制蛋白p21/WAF1/CIP1在p53依赖的G1期阻滞中起重要的介导作用,但并不...
- 鲁茁壮
- 关键词：P53基因P21基因基因转染细胞周期
- 文献传递
- 适配器-超速离心法提高电镜检测病毒的灵敏度被引量：1
- 2010年
- 通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心,能够将病毒粒子直接离心到载网上。利用重组腺病毒和重组腺相关病毒为模式病毒,适配器-超速离心法较悬滴法的病毒检测灵敏度提高了50～200倍;对人腺病毒41型(Ad41)细胞培养物进行电镜检测,灵敏度提高了50倍。如果将免疫凝集法(immune clumping)与适配器-超速离心法相联合进行电镜制样,检测灵敏度较常规免疫凝集法提高1～2个数量级。这些结果说明适配器-超速离心法能够高效地富集病毒,可以应用于病毒的电镜检测工作。
- 屈建国余兴明鲁茁壮邹小辉宋敬东洪涛
- 关键词：适配器超速离心
- 一种重组5型腺病毒载体、制备方法、疫苗及其应用
- 本发明属于重组腺病毒疫苗领域，具体地说，涉及一种重组5型腺病毒载体、制备方法、疫苗及其应用。重组5型腺病毒载体以复制缺陷的5型腺病毒载体为基础，插入诺如病毒的VP1基因；在所述VP1基因的3’端串联连接由U6启动子启动的...
- 段招军王金冬马亚林李金松鲁茁壮
- 一种编码MERS-CoV棘突蛋白的重组41型腺病毒载体疫苗
- 发明名称：一种编码MERS-CoV棘突蛋白的重组41型腺病毒载体疫苗。本发明首先合成了中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)棘突蛋白(S)的编码基因，将其插入pSh41-CMV载体，获得重组质粒pAd41-MERS-...
- 谭文杰鲁茁壮郭小娟蓝佳明邓瑶陈红洪涛
- 文献传递
- SARS-CoV-2污染的进口冷链产品导致的一起大连本土新冠疫情被引量：5
- 2021年
- 2020年12月15日,大连市报告了4名码头冷链货物搬运工人SARS-CoV-2核酸检测呈阳性,在此之前,大连市已经连续136天没有报告本土病例。在这次大连COVID-19疫情(简称"大连新冠疫情")中,我们收集了2020年12月15日至2021年1月8日期间大连新冠疫情中全部感染者(83)及部分接触的轮船货物样本,其中确诊病例占61.45%(51/83),无症状感染者占38.55%(32/83)。通过高通量测序,共获得76条SARS-CoV-2全基因组序列,其中72条(86.75%,72/83)来自临床样本,4条来自R国籍A货船上的冷链食品外包装样本。基因组分析数据显示,与武汉参考株(NC;45512)相比,76条全基因组分别存在12~16个核苷酸突变位点,共享12个核苷酸突变位点,符合B.1.1进化分支突变特征。结合病毒基因组学和现场流行病学调查结果综合分析表明,大连新冠疫情是一起由SARS-CoV-2污染的进口冷链产品感染码头工人导致的本土疫情,在传播过程中至少形成了3个病毒代际和3个相对独立的传播链。
- 王佶薄志坚薄志坚毛玲玲杨世宏鲁茁壮聂凯赵翔赵翔孙英伟姚文清孙英伟孙海波王越向妮娟王越宋洋马会来陈操马学军
- 关键词：冷链基因组学现场流行病学分子流行病学
