马颖
- 作品数：23 被引量：67H指数：5
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- EHECO157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化被引量：5
- 2006年
- 目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin2B,Stx2B),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2b基因约210bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coliBL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%。结论EHEC O157∶H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究。
- 马颖毛旭虎邹全明易勇程建平曾明张卫军
- 关键词：基因克隆原核表达纯化
- 肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠的实验研究
- 2008年
- 目的研究肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力。方法将60只BALB／c小鼠平均分为5组，分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组，用注射方式免疫3次，抗原和佐剂均为每次100μg／只。采集免疫前和各次免疫后7d的小鼠血清检测抗体，末次免疫10d后以10^9CFU的O157全菌液经口感染小鼠。观察小鼠临床症状及死亡情况，检测粪便与肠道带菌情况，并作病理组织学检测。结果各抗原免疫组小鼠特异抗体明显增加，感染后各组小鼠均有死亡，IntiminC300、Stx2B、HlyAN436和联合免疫组保护率分别为73％、64％、36％和91％。未病死小鼠粪便排菌情况：对照组22d，实验组为5—14d。肠道带菌情况：对照组阳性率为100％，实验组为25％-83％。病死小鼠肺脏、肝脏均有明显组织病理学改变。结论IntiminC300、Stx2B和HlyAN436疫苗对于O157感染具有一定的预防作用，而联合免疫效果又大于单独免疫。
- 程建平邹全明毛旭虎易勇王庆旭马颖
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗
- 单链抗体及其在生物医学中的应用被引量：17
- 2006年
- 单链抗体是一种小分子基因工程抗体,以其独有的优势在显像定位诊断、靶向治疗和基因治疗等方面展示了乐观的应用前景。本文对单链抗体的构建、表达及在生物医学中的应用作一综述。
- 马颖邹全明
- 关键词：噬菌体抗体库靶向治疗
- 肠出血性大肠埃希菌O157:H7 espA基因的克隆与表达被引量：9
- 2006年
- 目的通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的EspA蛋白,并分析其免疫学性质。方法采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增espA基因,T／A法克隆,连接至pET-28a(+)载体上,转化宿主细胞E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化目的蛋白, SDS-PAGE测定其相对分子质量,同时分析其N端氨基酸序列,免疫家兔鉴定其抗原性。结果重组espA基因片段的测序结果与GenBank上基因序列只有1个碱基不同,一致性为99．83％,所编码的氨基酸序列没有改变。重组EspA蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达,表达量约30％。免疫家兔所得抗体滴度为1:32。结论构建高效表达EspA蛋白的重组载体pET-28a(+)-espA,表达的蛋白具有良好的免疫原性,为进一步制备亚单位疫苗奠定基础。
- 王庆旭毛旭虎邹全明曾韦锟罗萍程建平易勇马颖
- 关键词：EHECO157:H7DNA重组
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7溶血素保护性片段(HlyAN436)克隆、表达、初步纯化与生物学活性研究被引量：2
- 2007年
- 目的获取重组表达肠出血性大肠杆菌O157的溶血素(Ehx)保护性片段,并研究其基本的生物学及免疫学特性。方法PCR法从EHECO157-SMR2菌株克隆O157:H7的HlyA亚单位的N端片段(436个氨基酸),T-A克隆后构建表达载体pET-28a(+)-HlyAN436,测序鉴定后转化到E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,初步纯化后免疫动物。结果Hly-AN436成功地在大肠杆菌表达系统表达,动物实验证实其具有良好的免疫原性和反应性以及一定的免疫保护性。结论Hly-AN436蛋白有可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。
- 程建平邹全明易勇毛旭虎马颖王庆旭丁红雷
- 关键词：肠出血性大肠杆菌溶血素免疫保护
- 一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及制备方法
- 本发明涉及一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗，其包含抗原亚单位EspA、IntiminC300和Stx2B，上述抗原亚单位来源于肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7；本发明还涉及上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗的...
- 毛旭虎邹全明肖大平宁元元刘艳青王庆旭易勇余抒程建平童文德张卫军马颖
- 文献传递
- 抗EHEC O157志贺样毒素ⅡA亚单位单克隆抗体5F3轻、重链可变区基因及应用
- 本发明属生物制药领域，涉及抗肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157志贺样毒素II毒素亚单位Stx2A单克隆抗体5F3重链和轻链可变区基因及其所述基因编码的多肽，以及所述基因和多肽在制备用于诊断和治疗EHEC O157感染及...
- 邹全明马颖毛旭虎杨珺
- 文献传递
- 应用Hoefer GE200 Gel Eluter纯化重组的LTB
- 2002年
- 目的 纯化基因重组表达的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)。方法 采用HoeferGE 2 0 0GelEluter从聚丙烯酰胺凝胶中回收LTB蛋白 ,SDS PAGE ,HPLC分析其纯度 ,western blot分析其免疫学性质。结果 电洗脱 1次可获得 30 0 μg重组蛋白 ,纯化蛋白经Tricine SDS PAGE电泳表现为单一蛋白质带 ,HPLC检测纯度为 99.4 6 % ,免疫印迹证实其保持有免疫学活性。结论 该系统纯化LTB蛋白操作方便、快捷 ,所得蛋白纯度好。
- 马颖邹全明吴超郭刚毛旭虎张卫军
- 关键词：基因重组蛋白纯化
- 一种高效融合表达载体
- 本发明利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体，构建一种高效原核融合表达载体。此载体含有T7强启动子、编码EspA伴体蛋白的核苷酸序列、连接区(包括柔韧区、6组氨酸纯化位点、肠激酶切割位点...
- 毛旭虎邹全明刘艳青王庆旭余抒顾江杨琴易勇杨珺张卫军程建平马颖童文德
- 文献传递
- 抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VHLinkerVL,并在VH基因5′端和VL基因3′端引入SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,SDSPAGE和Westernblot分析鉴定。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确。SDSPAGE和Westernblot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功地实现了抗SLT2AscFv基因的原核分泌表达,为探讨O157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。
- 毛旭虎马颖陈洪章邹全明
- 关键词：志贺样毒素单链抗体分泌表达
