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弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定: 目的克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化...; 雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利; 关键词：弓形虫克隆基因表达纯化免疫印迹; 文献传递

弓形虫表面抗原SAG1 DNA疫苗的构建被引量：4: 2004年; 目的　构建真核重组表达质粒 pVAX1-SAG1,并探讨其诱导的体液免疫应答。方法　采用多聚酶链反应技术 ,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增截短型的SAG1基因片断 ,并克隆至载体pMD18-T ,经菌落PCR鉴定和测序分析后 ,亚克隆至真核表达载体 pVAX1,构建重组真核表达质粒pVAX1-SAG1,并予菌落PCR和双酶切鉴定。以此为疫苗候选分子免疫小鼠 ,检测其诱导产生的抗体。结果　PCR扩增出SAG1基因的截短型片段 ,其大小约 780bp ;测序的阳性TA克隆除两处发生同义突变外 ,其余序列与原序列一致 ;TA克隆的插入片段被亚克隆到真核表达载体 pVAX1,构建了重组表达质粒pVAX1-SAG1;该质粒诱导小鼠产生了抗弓形虫抗原的抗体。结论　成功构建了弓形虫表面抗原SAG1的DNA疫苗。; 黄达娜吴少庭袁仕善高世同张仁利雷明军潘晖榕林琦萍秦莉; 关键词：弓形虫表面抗原 SAG1 DNA疫苗多聚酶链反应技术

重组SARS病毒M蛋白的免疫效应研究被引量：1: 2006年; 目的检测SARS冠状病毒重组M蛋白疫苗诱导小鼠的免疫应答能力。方法PCR扩增M蛋白基因,构建至原核表达质粒pET-23a,pET-23a-M重组质粒转化BL21(DE3)宿主菌,诱导表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析和纯化后免疫BALB/c小鼠,3次免疫后测定免疫功能,进行免疫效果评价。结果成功构建pET-23a-M重组质粒,转化宿主菌后诱导表达27 ku M蛋白。检测M蛋白免疫鼠体内有特异性抗体产生,抗体效价达1∶104;脾脏CD8+比例升高,CD4+/CD8+比值下降;免疫鼠血清IFN-γ和IL-4水平无显著变化。结论SARS病毒重组M蛋白疫苗能诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答。; 甘燕吴少庭秦莉雷明军戴五星袁仕善黄达娜; 关键词：SARS冠状病毒 M蛋白免疫效应

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究被引量：8: 2005年; 目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。; 林绮萍吴少庭翁亚彪高世同张仁利黄达娜袁仕善雷明军温见翔潘晖榕秦莉; 关键词：弓形虫 DNA免疫小鼠

弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究被引量：2: 2004年; 目的　利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位 ,并探讨其免疫保护效果。　方法　用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体 12肽库进行三轮筛选 ,对获得的日的噬菌体用间接ELISA和Dot -ELISA检测其特异性 ,并对其中的某些克隆进行Western -blot分析和序列测定 ;用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL/c小鼠 ,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度 ,攻击感染后观察小鼠存活情况。　结果　经三轮筛选 ,特异性噬菌体得到富集 ,随机挑取 18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定 ,有 16个克隆能与弓形虫免疫兔血清lgG呈特异性反应。Western -blot分析显示P2克隆能被免抗弓形虫血清所识别 ,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性 ,其序列为 5’ -CTTCAGTTGGATCGGGCTCCGTTTTGGAATCAGGGT -3’ ,与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性 ;与原肽库对照组相比 ,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体 ,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组。　结论　利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位 ,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用。; 林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善温见翔张仁利高世同黄达娜雷明军潘晖榕秦莉; 关键词：弓形虫小鼠表位噬菌体抗原感染后间接ELISA

SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达被引量：4: 2003年; 目的　构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列 2 (S2 )的原核表达质粒 ,分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法　采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第 2 170到 2 814位碱基的基因片段 ,克隆至 pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序。用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达。结果　RT -PCR扩增出S2特异片段 ,经测序与GenBank比对存在 1处碱基突变。S2基因片段亚克隆至表达载体 pGEX - 4T - 2构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S2融合蛋白。结论　成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白。; 秦莉吴少庭王西明袁仕善雷明军潘辉榕黄达娜高世同张仁利屈伸; 关键词：SARS 严重急性呼吸综合征冠状病毒 S2蛋白基因克隆

弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定: 目的:克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法:PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收...; 雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利; 文献传递

SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫被引量：2: 2005年; 目的构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础。; 林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善高世同秦莉雷明军潘晖榕张仁利黄达娜温见翔; 关键词：SARS N基因真核表达质粒体液免疫

弓形虫SAG2/GST融合蛋白在E.coli中的表达条件的研究与纯化: 目的:提高弓形虫SAG2/GST融合蛋白在在E.coli中的表达水平并纯化。方法:对诱导温度、诱导物浓度与诱导时间等条件与目的蛋白在细菌裂解上清中的表达量的关系进行了研究。在表达条件优化后,大量制备目的蛋白利用Gluta...; 雷明军吴少庭戴五星龙彩虹潘晖榕袁仕善黄达娜林绮萍; 文献传递

SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究被引量：4: 2005年; 目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒棘突糖蛋白的两个片段S1和S2的基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-S1和pVAC-S2重组质粒。并通过Lipofectamine 2000将它们转染到HEK293细胞,RT-PCR和Western-blot鉴定重组质粒在真核细胞中的转录和表达。以构建的重组质粒直接免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及抗体亚类,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布。结果成功构建了重组真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,并可在HEK293细胞中获得表达。免疫小鼠三次后,抗体滴度达到了1∶3 200。pVAC-S1诱导了高滴度的IgG2a,IgG2b和IgG1,pVAC-S2刺激产生高滴度IgG2a,IgG2b和较高滴度的IgG3。脾脏T淋巴细胞亚群分析示pVAC-S1和pVAC-S2两免疫组小鼠CD3+和CD8+T细胞明显升高。结论构建的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2能在哺乳动物细胞中表达,免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答。; 秦莉吴少庭王西明袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕黄达娜温见翔高世同张仁利屈伸; 关键词：SARS冠状病毒 DNA疫苗

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