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陆海荣: 作品数：13 被引量：30H指数：3; 供职机构：上海高科联合生物技术研发有限公司更多>>; 发文基金：中国博士后科学基金上海市重大科技攻关项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学经济管理更多>>

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重组溶葡萄球菌酶成品蛋白含量测定方法的建立被引量：1: 2016年; 重组溶葡萄球菌酶(recombinant lysostaphin,rLysn)对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,是一种新型抗菌药物,含有该酶的药用制剂在临床上能有效控制金葡菌感染。为在rLysn成品中增加蛋白含量测定以控制制剂的质量,建立了成品中rLysn蛋白含量测定方法,并进行验证。采用体积排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatograph,SEHPLC)测定rLysn理化对照品及成品蛋白质含量。色谱柱:TSK gel 2000SWXL(7.8 mm×30 cm,5μm);流动相:20 mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)+0.3 mol/L NaCl;流速:0.5 mL/min;柱温:25℃;检测波长:280 nm。结果显示,rLysn在2-32μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=1);低、中、高3种浓度的rLysn理化对照品空白加标平均回收率为102.9%,成品加标平均回收率为102.1%;3种不同上样量在不同时间内测定,蛋白含量RSD<1%;每隔1 h测定同一支供试品溶液,蛋白含量RSD为0.98%;同一批供试品溶液取6份进样,蛋白含量RSD为1.71%。实验结果表明,采用SE-HPLC方法简便,准确性、精密度、稳定性及重复性好,可用于rLysn成品蛋白质含量的测定。; 许燕张宜涛叶贵子陆海荣黄青山; 关键词：蛋白质含量

重组溶葡萄球菌酶的PEG定点修饰被引量：2: 2016年; 为获得高抗菌活性聚乙二醇(PEG)定点修饰的溶葡萄球菌酶(Lysn),根据该酶的高级结构,在它的催化域和结合域上优选8个位点(Q9、N13、N40、T172、N174、G197、V240和T244),将其分别突变成半胱氨酸,纯化后的溶葡萄球菌酶突变体经DTT处理后与20 kDa的单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺(m PEG-MAL)进行定点修饰反应,RP-HPLC分析显示PEG修饰率大于70%,修饰产物经MacroCap SP阳离子交换层析纯化后,PEG化溶葡萄球菌酶的纯度大于95%。比浊法和最小抑菌浓度(MIC)实验表明20K-PEG-Lysn V240C和20K-PEG-Lysn T244C的抗菌活性维持在原来的50%左右。研究结果为溶葡萄球菌酶全身给药治疗金黄色葡萄球菌感染奠定基础。; 陆海荣张宜涛黄青山; 关键词：金黄色葡萄球菌抗菌活性最小抑菌浓度

肺炎球菌噬菌体裂解酶CPL-1的克隆表达、纯化和抑菌活性研究: 目的:利用基因工程方法制备肺炎球菌噬菌体裂解酶Cpl-1。方法:根据大肠埃希菌密码子偏爱性合成一段编码Cpl-1的基因序列，克隆到表达载体pET28a中，构建出表达质粒pET28a-cpl-1，转化至大肠埃希菌BL21(...; 陆海荣黄晋江李斌宾吴宏宇陆敏黄青山; 关键词：肺炎链球菌大肠埃希菌基因序列; 文献传递

KLK14蛋白亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法: 本发明公开了一种人重组SPINK6蛋白的亲和层析纯化方法，包括：将人重组KLK14蛋白与亲和层析介质混合，偶联反应，制得人重组KLK14蛋白亲和层析介质；将人重组SPINK6蛋白通过预先用缓冲液A平衡好的装有上述的胰蛋白...; 陆海荣黄晋江李斌宾黄青山; 文献传递

氢氘交换质谱技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用被引量：1: 2013年; 氢氘交换质谱法(hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry,H/DX-MS)是一种研究蛋白质空间构象的新技术,蛋白质主链氨基氢原子和重水溶液(D2O)中氘原子的交换过程可用来研究蛋白质空间结构。H/DX-MS包括五个基本步骤:样品氢氘交换反应、终止反应、样品酶解、质谱检测和数据分析。目前,该技术已被广泛应用于蛋白质的结构、结构动态变化及蛋白质相互作用等方面的研究,与经典的X-射线蛋白质结构研究方法形成互补。文章介绍了H/DX-MS的基本原理和技术流程,并综述了H/DX-MS在蛋白质相互作用研究中的应用情况。; 陆海荣黄青山; 关键词：质谱蛋白质相互作用

重组溶葡萄球菌酶体外诱导的金黄色葡萄球菌耐药株生物学特征被引量：2: 2015年; 目的：探究重组溶葡萄球菌酶体外诱导金黄色葡萄球菌（金葡菌）耐药发生规律和机制。方法用3株临床分离金葡菌，体外以亚抑菌浓度重组溶葡萄球菌酶一步法诱导耐药，观察耐药株对多种抗菌药物的药敏改变情况，测序分析肽聚糖甘氨酸五肽桥联的关键合成酶编码基因 femABX。并观察其中1株耐甲氧西林金葡菌（MRSA）和1株甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）的生长曲线、小鼠感染毒力情况。结果金葡菌耐药发生频率为10－4～10－8水平，与原代株比较，耐药株体外生长速率和小鼠体内毒力显著降低，对β内酰胺类敏感性提高2～4000倍。测序结果显示耐药株 f emA编码基因存在突变，可致终止密码子提前。结论重组溶葡萄球菌酶体外可诱导金葡菌耐药性产生，但耐药株生长繁殖力、致病力及抵抗β内酰胺类抗生素的能力显著降低。; 卢曦任志涛李聪然胡辛欣聂彤颖黄青山陆海荣李雪李国庆蒋建东游雪甫杨信怡; 关键词：金黄色葡萄球菌诱导耐药 FEMA X基因

溶葡萄球菌酶高效裂解细菌细胞壁的机制研究: 金黄色葡萄球菌（金葡菌）是人类主要的病原菌，它能引起肺炎、骨髓炎、心内膜炎及败血症等多种感染性疾病。随着各种广谱抗菌药物在临床的大量不合理使用，导致金葡菌对抗生素高度耐药，造成临床治疗上的困难及病死率增高，严重威胁人类健...; 陆海荣; 关键词：抗菌机制

肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1的克隆表达、纯化和抑菌活性鉴定被引量：3: 2010年; 目的利用基因工程方法制备肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性合成一段编码cpl-1的基因序列,克隆到表达载体pET28a中,构建出表达质粒pET28a-cpl-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果重组CPL-1在大肠埃希菌中以可溶形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%。经胆碱类似物DEAE亲和纯化后,重组CPL-1的纯度大于97%。经体外抑菌活性试验证明其对肺炎链球菌具有明显的抑菌效果。结论噬菌体裂解酶CPL-1的开发利用为预防和治疗肺炎链球菌感染提供了新的方法。; 陆海荣黄晋江李斌宾吴宏宇陆敏黄青山; 关键词：肺炎链球菌大肠埃希菌

KLK14蛋白亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法: 本发明公开了一种人重组SPINK6蛋白的亲和层析纯化方法，包括：将人重组KLK14蛋白与亲和层析介质混合，偶联反应，制得人重组KLK14蛋白亲和层析介质；将人重组SPINK6蛋白通过预先用缓冲液A平衡好的装有上述的胰蛋白...; 陆海荣黄晋江李斌宾黄青山; 文献传递

金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Ply187的CHAP结构域的表达及抗菌活性分析被引量：2: 2016年; 噬菌体裂解酶是一种高效的抗菌蛋白,系统地分析噬菌体裂解酶催化域的活性,有助于设计高效杂合裂解酶。合成噬菌体裂解酶Ply187的CHAP催化结构域(CHAPPly187)基因,并构建表达载体p ET28a-CHAPPly187转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和两步纯化,获得高纯度的CHAPPly187,再与溶葡萄球菌酶催化域(CATLysn)进行活性比较。比浊法检测显示CHAPPly187和CATLysn对金黄色葡萄球菌都具有较强的抗菌活性;CHAPPly187具有更宽的抗菌谱,最适作用p H范围更大,对离子强度的耐受能力更好,易受EDTA的影响。低浓度的二价金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+对两种催化域都有明显的促进作用,低浓度的Zn2+、Cu2+、Fe2+对它们有很强的抑制作用。; 吴蒙陆海荣黄青山; 关键词：催化结构域抗菌活性

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