黄青山 作品数:62 被引量:205 H指数:7 供职机构: 复旦大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 国家科技支撑计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
重组溶葡萄球菌酶的刺激性和皮肤变态反应试验 被引量:9 2008年 目的了解重组溶葡萄球菌酶的皮肤刺激性、阴道黏膜刺激性和产生皮肤变态反应的可能性及其强度。方法参照相关技术规范中的皮肤刺激试验、阴道黏膜刺激试验和皮肤变态反应试验方法进行。结果皮肤刺激试验受试皮肤的最高皮肤刺激指数为0;阴道黏膜刺激试验染毒组和对照组的阴道黏膜未见明显白细胞浸润、充血和水肿,阴道黏膜刺激指数为0.25;皮肤变态反应试验组动物皮肤未见红斑与水肿,各时间的皮肤刺激反应积分为零。结论重组溶葡萄球菌酶对兔皮肤刺激强度为无刺激性,对大鼠、兔一次阴道黏膜刺激强度为无刺激性,致敏强度为未见皮肤变态反应。 张继恩 莫云杰 张永容 杨伟敏 李合成 刘岩 巍金锋 严国峰 贾敏 王爱平 黄青山关键词:皮肤刺激 皮肤变态反应 小鼠体细胞核移植的早期研究 被引量:1 2002年 目的 建立成熟的小鼠体细胞核移植技术。方法 通过显微操作 ,以ICR鼠成纤维细胞核和C57鼠的去核卵母细胞进行胚胎的重构。重构胚经化学激活或 3种不同脉冲电压融合后再经体外或输卵管体内培养 ;3d后回收胚胎并进行胚胎的发育鉴定。结果 去核卵母细胞的成活率为 71 91%、化学激活率为 75 0 9%;刺激电压为 6 0V(80 μs、刺激 5次 )的融合率比其他几种方式高 ;经脉冲电压 70V(80 μs、刺激 2次 )处理后的胚胎发育潜力比其他几种方式处理后的胚胎发育潜力要好。结论 小鼠体细胞核移植技术基本获得成功。 黄青山 贾敏 张继恩 谢毅关键词:小鼠 体细胞 核移植 发育生物学 胚胎移植 鱼糜制品中主料含量的实时荧光定量PCR法测定 被引量:7 2011年 应用实时荧光定量PCR技术对鱼糜制品中主料成分进行了鉴定分析。该方法通过一个外源基因和内参校正基因对鱼糜制品标准品建立标准曲线,利用标准曲线计算出主料成分的质量百分比。方法线性程度良好(R2>0.985),回收率符合方法学要求,从而证明了此方法在实验室条件下的可行性。 曲勤凤 黄青山 段文锋 胡雪莲 张清平关键词:实时荧光定量PCR 鱼糜制品 氢氘交换质谱技术及其在蛋白质相互作用研究中的应用 被引量:1 2013年 氢氘交换质谱法(hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry,H/DX-MS)是一种研究蛋白质空间构象的新技术,蛋白质主链氨基氢原子和重水溶液(D2O)中氘原子的交换过程可用来研究蛋白质空间结构。H/DX-MS包括五个基本步骤:样品氢氘交换反应、终止反应、样品酶解、质谱检测和数据分析。目前,该技术已被广泛应用于蛋白质的结构、结构动态变化及蛋白质相互作用等方面的研究,与经典的X-射线蛋白质结构研究方法形成互补。文章介绍了H/DX-MS的基本原理和技术流程,并综述了H/DX-MS在蛋白质相互作用研究中的应用情况。 陆海荣 黄青山关键词:质谱 蛋白质相互作用 重组溶葡萄球菌酶的致突变实验 被引量:7 2008年 实验用 ICR 小鼠经口罐胃染毒(骨髓细胞微核实验和精子畸形实验的剂量分别为2 500、5 000、10 000 μg·kg^(-1)),取其股骨或睾丸组织常规制片,观察分散良好的中期分裂相鼠伤寒沙门氏菌回复突变(Ames)试验采用平板掺入法(剂量分别为0.01、0.04、0.2、1.00、5.00 μg·皿^(-1)),探讨了重组溶葡萄球菌酶的致突变性;预防其遗传危害性和潜在致癌作用的可能性。结果表明:小鼠骨髓、睾丸细胞染色体畸变实验显示:重组溶葡萄球菌酶给药组与阴性对照组比较,差异无显著性(P>0.05),Ames 试验显示各菌株的各测试浓度的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍。由此证明在本实验条件下,重组溶葡萄球菌酶无致突变性。 张继恩 吴聪明 沈建忠 黄青山关键词:致突变性 兽药 肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1的克隆表达、纯化和抑菌活性鉴定 被引量:3 2010年 目的利用基因工程方法制备肺炎链球菌噬菌体裂解酶CPL-1。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性合成一段编码cpl-1的基因序列,克隆到表达载体pET28a中,构建出表达质粒pET28a-cpl-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果重组CPL-1在大肠埃希菌中以可溶形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%。经胆碱类似物DEAE亲和纯化后,重组CPL-1的纯度大于97%。经体外抑菌活性试验证明其对肺炎链球菌具有明显的抑菌效果。结论噬菌体裂解酶CPL-1的开发利用为预防和治疗肺炎链球菌感染提供了新的方法。 陆海荣 黄晋江 李斌宾 吴宏宇 陆敏 黄青山关键词:肺炎链球菌 大肠埃希菌 肝癌细胞及其细小病毒H1抗性克隆间基因表达谱的研究 自主性细小病毒H1(Parvovirus H1,PV H1)具有选择性杀伤人源的肿瘤细胞和转化细胞的特性,而对正常人细胞无明显影响。细小病毒及其重组载体除了可直接被应用于抗肿瘤治疗研究之外,已有研究证实,还可以作为选择压... 袁伟 郭兰萍 罗祖玉 顾卫国 黄青山关键词:基因表达 寡核苷酸芯片 文献传递 VEGF siRNA降低人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性 被引量:6 2007年 本研究应用RNA干扰(RNAi)技术高效抑制VEGF的表达,明显降低了人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性。化学合成针对人VEGF基因的siRNA,体外瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721,RT-PCR和Elisa法检测表明VEGF siRNA实验组与对照组相比,细胞内VEGF mRNA表达下降了76.16%,VEGF分泌蛋白表达则下降了96.28%,而MTT法结果显示VEGF siRNA对SMMC7721细胞增殖没有明显作用。体内实验中,不同时间对荷SMMC7721细胞瘤裸小鼠进行siRNA直接瘤内注射,同时测量瘤体积,最后取瘤块进行组织切片观察并进行分子生物学分析,结果显示,与对照组相比,VEGF siRNA实验组肿瘤体积明显缩小,瘤内出现细胞坏死,同时肿瘤组织中VEGF mRNA和蛋白表达水平均明显降低。 黄建 王海波 葛盛芳 贾仁兵 黄青山 郑新民关键词:小干扰RNA VEGF SMMC7721细胞 非最终灭菌无菌灌装生产工艺人员微生物质量风险分析 2013年 为最大程度地降低药品无菌工艺生产中微生物污染的风险,以重组溶葡萄球菌酶粉的生产过程为例,利用休哈特控制图、饼图统计工具、失效模式及影响分析(FMEA)风险工具对生产中操作人员可能引入微生物污染的五个因素(手套、前臂、胸口、前额、口罩)进行了监控和风险分析。试验结果表明,口罩的微生物检测结果最差,手套为污染的高风险因素。经过最差条件干预的培养基模拟灌装试验,验证了以预防为主的微生物质量控制措施可以有效控制无菌灌装生产工艺中人员对药品污染的风险。 解虹 张鲁敬 钱春妹 陆珉 黄青山 张继恩关键词:无菌灌装 休哈特控制图 抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体的制备与鉴定 被引量:1 2009年 为了制备抗溶葡萄球菌酶N端合成多肽抗体,合成了溶葡萄球菌酶(lysostaphin)分子的3-13位的11个氨基酸的多肽(THEHSAQWLN),并利用戊二醛双功能试剂将人工合成多肽成功地与KLH进行偶联,免疫新西兰兔制备抗lysostaphin合成多肽的抗体,并经亲和层析进行了纯化。对此抗体进行鉴定的结果表明,抗溶葡萄球菌酶合成多肽抗体可与重组溶葡萄球菌酶分子发生特异性反应,并可用于蛋白免疫印迹。该抗体的制备为使用亲和层析纯化溶葡萄球菌酶提供了有用的配基。 吴宏宇 黄晋江 张继恩 黄青山关键词:多克隆抗体 酶联免疫吸附测定法 蛋白免疫印迹