邹由
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金武汉市科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 大肠杆菌K12植酸酶热稳定性突变体在毕赤酵母中的高效表达和性质研究(英文)
- 2013年
- 植酸酶广泛用作工业饲料添加剂。通过基因优化和两步法基因合成了E.coli K12植酸酶的耐热突变体AppA NR,将其克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905A上,然后将构建好的质粒转入毕赤酵母GS115中表达。经过筛选得到了一株高表达毕赤酵母工程菌GS115/AppA NR,产量达到10mg·mL-1,活力为980U·mL-1。该重组酶在95℃加热10min,仍保留90%的活力,相比野生型植酸酶,更能抵抗高温。同时,该酶具有较宽的pH值范围和抗胃酶水解的能力。所有这些性质的改善表明该重组酶比较适合用作工业饲料添加剂。
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- 关键词：基因合成酶特性
- 毕赤酵母表达重组植酸酶酶学性质的比较研究被引量：2
- 2011年
- 通过酶学性质比较毕赤酵母GS115表达的E.coli K12植酸酶（appA）及其突变体植酸酶（appANR）和黑曲霉植酸酶（phyA）的最适pH、温度、热稳定性及对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性.结果表明,在95℃,加热10 min,appA NR可残余90%左右的活力,而其他两种只残余20%~50%的活力;appA NR和phyA具有两个最适pH值,而appA只有一个;相对phyA,appA及其突变体appA NR都具有良好的胃蛋白酶和胰蛋白酶耐受性.因此appA NR无论是热稳定性还是pH耐受性及对胃、胰蛋白酶的耐受性都比野生型appA和phyA更具备工业饲料要求的酶学特性.
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- 关键词：毕赤酵母酶学性质
- 植酸酶phyA基因在解脂耶氏酵母po1h中的表达
- 2010年
- 本实验通过PCR方法从毕赤酵母GS115-phyA中扩增出不含有信号肽及内含子的黑曲霉NRRL3135植酸酶phyA基因,并将其克隆到表达载体pINA1297中,得到表达载体pINA1297-phyA,利用醋酸锂转化法将线性化载体转化到解脂耶氏酵母po1h中,通过YNBcasa和PPB平板筛选出阳性表达菌株,阳性菌株在YM培养基中28℃培养6d后酶活达到最大为636.23U/mL。表达上清经SDS-PAGE分析得到表达植酸酶分子量约为130kDa,但通过去糖基化处理后其分子量变为51kDa,与理论值相符。经过酶学性质分析表明重组植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃,该酶在pH2.0-8.0处理1h后仍有较高酶活,并且90℃处理10min后还有86.08%的残留酶活,其抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶能力也较强。
- 陈云邹由王一丁马立新
- 关键词：黑曲霉植酸酶PHYA基因
