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邢小勇: 作品数：76 被引量：200H指数：7; 供职机构：甘肃农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金甘肃省高等学校基本科研业务费项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>

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犬细小病毒临床分离株VP2基因进化分析被引量：1: 2019年; 为了对犬细小病毒临床分离株的VP2基因进行遗传变异分析,了解本地区犬细小病毒流行的优势型别及病毒变异情况。采集2例患犬细小病毒病的动物粪便,提取病毒基因组,设计特异性引物,PCR扩增VP2基因,对扩增产物测序,对序列结果与同属其他毒株VP2基因序列用MEGA 7和MegAlign进行同源性分析和遗传进化分析。同时比较其氨基酸变异情况。结果显示,PCR扩增出VP2基因,测序结果显示大小为1755 bp,2株病毒VP2基因NCBI序列登录号分别为MH155192和MH155193,MH155192与MF467233.1和JQ743891.1的核苷酸同源性为99.9%,MH155193与KY937651.1、KP260509.1、KY937641.1核苷酸同源性为99.8%。MH155192主要位点氨基酸分别为为267Y,324I,370Q,426D,440A。MH155193主要位点氨基酸分别为267Y,324I,370R,426E,440T。且2株病毒297位均为A。表明分离到的2株病毒分别为新CPV-2b和CPV-2c型。; 温峰琴项海涛郝宝成邢小勇包世俊胡永浩; 关键词：犬细小病毒 VP2基因

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的克隆、表达及多克隆抗体制备被引量：4: 2020年; 利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白,制备鼠源多克隆抗体.通过MDBK细胞增殖病毒,提取RNA,RT-PCR扩增E2全长基因,进行生物信息学分析后设计截短引物,构建优化表达载体pET-30-E2,转化BL21,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达;用SDS-PAGE电泳分析蛋白表达,纯化蛋白联合弗氏佐剂免疫小鼠;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价水平,用免疫印迹(WB)和免疫荧光(IFA)法验证抗体特异性.结果表明:E2基因在大肠杆菌中成功表达,蛋白大小为32000,不可溶形式表达,表达量为0.4 mg/mL;多克隆抗体效价为1∶256000,可特异性结合重组蛋白及细胞中的病毒.; 陈文龙张阳阳张生英邢小勇胡永浩; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因 E2蛋白原核表达多克隆抗体

牛支原体脂蛋白P48单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2016年; 为制备牛支原体表面脂蛋白P48的单克隆抗体,应用纯化的牛支原体武威株脂蛋白P48基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠,继而取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆和筛选,获得2株能分泌抗牛支原体脂蛋白P48抗体的杂交瘤细胞融合株,并分别命名为C7及E5。ELISA和W estern-blot检测结果表明,2株单克隆抗体均可与牛支原体特异性地结合,而与牛的其他常见病原菌无任何反应。亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体重链均为Ig G 1,轻链均为λ型。稳定性试验结果表明,2株杂交瘤细胞均可稳定分泌单克隆抗体。本研究结果为建立牛支原体有效的检测方法和深入研究脂蛋白P48的生物学功能奠定了基础。; 包世俊胡国明邢小勇郝宝成薛惠文伏小平温峰琴胡永浩项海涛; 关键词：牛支原体单克隆抗体杂交瘤

滑液支原体DnaK的原核表达及免疫原性分析和亚细胞定位被引量：8: 2020年; 参照GenBank中滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)WVU1853株dnaK基因序列(CP011096.1)设计并合成特异性引物,利用overlap PCR技术扩增获得MS dnaK基因,并将其克隆至pMD19-T载体,在序列分析的基础上将该基因克隆至pET-28a(+)质粒,构建原核表达载体pET-dnaK并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,进行SDS-PAGE分析。继而将纯化表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA、Western-blot和免疫荧光试验对MS DnaK的免疫原性及其在细胞内的分布进行分析。结果显示,MS dna K基因全长1 791 bp,编码596个氨基酸,重组蛋白rMSDnaK在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,且其相对分子质量约为67 ku。间接ELISA和Western-blot结果表明,rMSDnaK具有良好的免疫原性,且MS DnaK在其胞浆和胞膜中均有分布,但在胞膜中含量较多,免疫荧光试验进一步证实DnaK在MS膜表面的分布。本研究结果为进一步研究MS DnaK的生物学功能奠定了基础。; 刘佳张生英邢小勇武小椿温峰琴包世俊; 关键词：滑液支原体免疫原性亚细胞定位

牦牛漫游球菌的分离与生物学特性鉴定: 2019年; 为探究1只牦牛屠宰后肝脏有干酪样结节形成的原因,对肝脏进行细菌的分离培养,对分离到的1株细菌的16S rRNA和16S～23S rRNA基因序列用通用引物扩增和并用NCBI blast和MEGA 7进行序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验,结果显示:该菌的16S rRNA为1 524 bp,NCBI GenBank登录号为MG753544.1,与水獭漫游球菌的同源性较高,16S～23S rRNA有大小不同的2个片段,分别为522,425 bp,NCBI GenBank登录号分别为MG758122.1和MG758123.1。Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为迟缓葡萄球菌。该菌对妥布霉素、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感,对苯唑西林、头孢西丁有抗性。结果表明,分离出的细菌为漫游球菌,该菌是否具有致病性还有待进一步试验验证。; 温峰琴项海涛郝宝成邢小勇包世俊胡永浩; 关键词：RRNA 生化试验药敏试验

苦马豆素抗牛病毒性腹泻病毒的研究被引量：21: 2014年; 【目的】疯草是中国西部影响草地生态和畜牧业健康发展的毒草之一。主要有豆科棘豆属和黄芪属有毒植物等,在冬季牧草严重缺乏的时节,牛羊等牲畜被迫采食后可引起中毒和生产性能下降,甚至死亡,每年给我国草地生态和畜牧业造成的直接经济损失达几十亿元,是危害最严重的毒草。目前,我国西部天然草地动物因疯草中毒死亡所造成的经济损失仍持续剧增。苦马豆素被认为是引起动物疯草中毒的主要毒性成分。由于疯草分布广泛,资源丰富,如何改善草地生态,合理开发利用疯草成为研究的课题和方向。近几十年来,随着对疯草研究的深入和扩展,人们发现苦马豆素不仅具有良好的抗肿瘤效果,还可作为免疫调节剂、抗HIV及扩散抑制剂、抗病毒和细胞保护剂等药物使用。目前,国内在对苦马豆素抗肿瘤、调节机体免疫方面研究较热,但是,对苦马豆素在抗病毒活性、作用机理方面的研究尚无相关报道。为了探讨茎直黄芪中生物碱苦马豆素(swainsonine,SW)抗牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗BVDV的药物筛选提供参考依据。【方法】利用细胞培养技术,采用CPE观察法和MTT比色法相结合的方法测定不同浓度SW对牛肾原代细胞(madin-darby bovine kidney cells,MDBK)的毒性作用,确定药物的安全浓度和TD50,并分别采用先加药后感染病毒、先感染病毒后加药、药毒作用2 h后加入、感染病毒同时给药后再加药四种作用方式,检测不同浓度SW对BVDV入侵的阻断作用、复制的抑制作用、直接杀伤作用和综合作用,并计算不同作用方式下的治疗指数。【结果】结果显示:SW浓度小于0.256μg·mL-1范围内对MBDK细胞无毒性作用,在大于0.512μg·mL-1浓度下MBDK细胞表现出一定程度的病变,TD50为2.512μg·mL-1,按Reed-Muench氏法计算BVDV TCID50为10-4.7/0.1mL;在; 郝宝成武凡琳邢小勇项海涛温峰琴王学红权晓弟胡永浩梁剑平; 关键词：茎直黄芪 SWAINSONINE

实验室试管清洗烘干装置: 本实用新型公开了实验室试管清洗烘干装置，包括，箱体；清洁机构，所述清洁机构包括第一固定管、第二固定管、输送管、安装管、U型板、电动推杆、毛刷组件和出水孔，所述箱体的一侧侧壁的两端均转动插接有第一固定管，所述箱体的侧壁两端...; 武小椿赵淑琴郜原包世俊邢小勇; 文献传递

一种新型Eppendorf管架: 本实用新型公开了一种新型Eppendorf管架；其包括：支座、管架和管口限位装置；支座包括底板和支臂，支臂对称设在底板两侧；管架包括孔板、顶持板和侧连接板，孔板和顶持板上下间隔布置，侧连接板固定连接在孔板和顶持板的两侧，...; 邢小勇宋向东胡永浩包世俊温峰琴郝宝成; 文献传递

一株猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药物敏感性的筛选: 近年来,随着规模化养猪业的发展,猪巴氏杆菌病发病率逐年上升,已成为危害养猪业的主要疫病之一。多杀性巴氏杆菌（Pasteurela multocida,Pm）是引起多种畜禽巴氏杆菌病的主要病原菌,其对人也有致病性。于201...; 胡荣斌包世俊邢小勇杨红霞陈文龙; 关键词：多杀性巴氏杆菌药敏试验; 文献传递

1株林麝源绿脓杆菌的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：7: 2021年; 旨在确定甘肃省天水市某林麝养殖场致死林麝的病原菌,并开展其致病性和耐药性研究及全基因组序列分析。采集病死林麝肺,通过细菌的分离纯化、生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,对分离菌进行鉴定;随后对其致病性和药物敏感性进行分析,并在分离菌全基因组测序的基础上,对分离菌全基因组序列进行组装和注释,对毒力基因toxA和exoT进行遗传进化分析。结果表明,从病死林麝肺中分离到一株绿脓杆菌,命名为TS2019。致病性试验测得分离菌对小鼠的LD_(50)为2.82×10^(7)CFU·mL^(-1);药敏试验结果表明,TS2019具有多重耐药性,但对环丙沙星、洛美沙星等药物敏感。基因组测序表明,TS2019基因组全长为6308327 bp,编码5929个基因,其中有1035个编码产物参与新陈代谢途径;全基因组中有毒力因子编码基因875个,产物有黏附蛋白、调控因子、毒性蛋白等;有四环素类、氨基糖苷类等抗生素耐药相关基因5288个。遗传进化分析表明,TS2019毒力基因toxA、exoT与GenBank中绿脓杆菌众多菌株相应基因序列相似性均高于99%,其中eoxT基因与中国杭州人源分离株P33的遗传关系最近,但处于独立分支。本研究从病死林麝肺分离鉴定到一株绿脓杆菌,并证实该菌有较强致病性和多重耐药性,其毒力基因toxA和exoT与GenBank中绿脓杆菌相应基因序列具有高度相似性。研究结果为林麝绿脓杆菌感染相关疾病的防治提供了理论支持,也为绿脓杆菌致病机制和耐药机制的深入研究奠定了基础。; 贺健邢小勇武小椿温峰琴张阳阳张生英刘佳包世俊; 关键词：林麝绿脓杆菌全基因组序列分析

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