胡永浩
- 作品数：241 被引量：697H指数：12
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白的高效表达及免疫活性分析被引量：8
- 2010年
- 在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白,并对其免疫活性进行分析。应用PCR技术从刚地弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码SAG2的基因片段,亚克隆至原核表达载体pET32a(+),在大肠埃希菌(E.coli)BL21内表达,并对其表达条件进行优化,Western blotting和ELISA分析纯化蛋白的免疫原性;纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗,用间接免疫荧光试验(IFA)分析表达蛋白的免疫反应性。成功构建重组质粒pET32a(+)-tSAG2,所表达的融合蛋白大小约为38kD。在IPTG终浓度为0.1mmol/L、诱导时间4-6h和培养温度32℃条件下,重组SAG2蛋白主要以可溶性形式在大肠杆菌中高效表达,每升培养菌液约获得可溶性重组SAG2蛋白16mg。Western blotting及ELISA结果显示纯化蛋白具有良好的免疫原性。IFA显示重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫表面的SAG2天然蛋白,所表达蛋白具有良好的免疫反应性。截断的SAG2基因在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白保持了天然蛋白的免疫活性,为进一步利用该重组蛋白进行弓形虫病免疫诊断及基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。
- 聂福旭蒋蔚王权陈永军胡永浩
- 关键词：刚地弓形虫蛋白表达免疫活性
- 一例猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染病例的诊断及防治
- 2015年
- 规模化养猪场常出现病毒与细菌混合感染疾病,严重影响我国养猪业的发展。广东某猪场的猪群发病,病猪表现为高热、嗜睡、精神沉郁、咳嗽、皮肤发红、眼结膜发炎、腹式呼吸等临床症状,发病率40%、病死率60%。通过病理剖检、细菌分离鉴定、药敏试验和RT-PCR等实验室检测,诊断为猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株及副猪嗜血杆菌混合感染。在此基础上提出和实施了相应防治措施,疫病得到控制。
- 裴仉福陈瑞爱贺东生张显浩唐续刘好朋胡永浩
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒副猪嗜血杆菌
- 小反刍兽疫研究进展被引量：19
- 2014年
- 小反刍兽疫病毒(PPRV)是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的成员,主要感染山羊、绵羊等小反刍动物,引起一种高度接触性病毒性传染病。小反刍兽疫为一种重大的外来性疾病,2007年在中国西藏自治区日土县首次发生。自2013年末以来中国新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙、湖南、辽宁等地频繁暴发小反兽疫疫情,给中国的畜牧业带来了巨大的损失,引起极大的重视。为更好的分析小反刍兽疫的病原特性及采取有效的防控措施,文章对小反刍兽疫的病原学及疫苗研究进展进行论述。
- 李景玉高玉竹李元果孙喜清徐亚杰秦峻岭胡永浩黄耕高玉伟
- 关键词：小反刍兽疫病原学疫苗研究
- 禽源多杀性巴氏杆菌保菌方法研究被引量：1
- 1995年
- 通过对禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株和Ｃ４８－１株及６株田间分离细菌的保存观察试验，表明用脱纤羊血和感染小鼠肝脾组织在－２０℃条件下，禽源多杀性巴氏杆菌可存活２年；用鲜血斜面封盖石蜡油保存法，禽源多杀性巴氏杆菌在４℃条件下可存活３个月，菌株保存前后生物学特性及毒力不发生变化。试验提供的方法对禽霍乱流行病学调查和血清分型研究具有实际意义。
- 胡永浩
- 关键词：多杀性巴氏杆菌
- 抗大肠杆菌O157单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞的观测
- 2008年
- 采用细胞活力测定、形态学观察和遗传学检测的方法,研究了在用常规方法制备大肠杆菌O157单克隆抗体过程中,融合前后的细胞在细胞活力、细胞形态以及染色体数量的差异.结果表明,与凯骨髓瘤细胞相比,杂交瘤细胞的细胞活力和细胞形态无明显变化;当脾细胞与凯骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞后,其染色体数目接近两亲本细胞染色体数目之和.
- 王燕琴李克生杜蕙芬胡永浩
- 关键词：大肠杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞
- 表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达
- 2012年
- 为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。
- 常晓飞赵双成田石柳金雄王靖飞曾显营胡永浩姜永萍陈化兰
- 关键词：H5亚型禽流感病毒
- 牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定被引量：6
- 2019年
- 一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。
- 温峰琴项海涛郝宝成邢小勇包世俊胡永浩
- 关键词：RPOB生化试验药敏试验
- 禽致病性大肠杆菌O2株跨膜输出蛋白基因组文库的构建与分析
- 2016年
- 为构建禽致病性大肠杆菌(APEC)跨膜输出蛋白基因组文库,本研究以APEC O2菌株基因组DNA为模板,采用基因随机片段PCR方法扩增,纯化约250 bp^500 bp的片段构建APEC O2菌株跨膜输出蛋白基因组文库。共获得约1.8×10~5个克隆容量的基因组文库,经氨苄/卡那/阿拉伯糖平板筛选到318个克隆。ORF及Signal P分析显示318个克隆插入片段均含有信号肽序列,其中,78个克隆预测为膜蛋白;启动子分析显示144个克隆含有完整启动子,除去29个能自主表达的克隆,推测其余115个克隆的启动子在实验培养条件下沉默,可能需要特殊条件诱导才能表达;GO功能分析克隆插入片段所对应全长基因的ORF显示,其参与的生物过程主要集中于定位、转运;从分子功能角度分析,其主要集中于催化和结合;从细胞组成角度分析,其主要集中于细胞膜、周间质、外膜等与外壳相关的结构中。本实验将为进一步研究APEC的致病性机理奠定基础。
- 李永霞谭双刘蕾赵俊皓刘金泽王明晓胡永浩余旭平
- 关键词：大肠杆菌基因文库克隆分析
- 兰州地方分离PCV毒株ORF2阅读框的测序分析与原核表达鉴定被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank中发表的PCV1和PCV2的ORF2基因序列,设计合成了一对共用引物,用PCR的方法从兰州本地病料中分离出毒株,通过PK-15的增殖,扩增出ORF2序列,测序分析后发现分离毒株序列与PCV1的ORF2序列同源性达到99.1%～99.4%。根据GenBank中PCV2的ORF2序列对目的序列进行了改造、优化和合成后,目的序列和pET-32a载体连接,转化BL21(DE3)细胞后,挑取阳性克隆。对鉴定后的融合质粒用IPTG诱导,裂解液经过SDS-PAGE分析、纯化操作和Western-Bloting分析,表明改造合成ORF2序列在大肠杆菌中得到了表达,并能被PCV2阳性血清所识别。
- 傅昱郝晓芳卢曾军孙普胡永浩刘在新
- 关键词：PCV克隆
- 抗BVDV Erns蛋白单克隆抗体制备及生物学特性鉴定被引量：1
- 2022年
- 为制备抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns蛋白单克隆抗体,本试验用Erns重组蛋白免疫Balb/c鼠,刺激小鼠脾脏产生特异性免疫细胞;通过化学剂诱导剂PEG-4000诱导免疫细胞和骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞;间接ELISA方法结合亚克隆方法筛选阳性细胞孔;鉴定为稳定分泌抗体的细胞株做扩大培养,细胞悬液计数并无菌注射KM小鼠腹腔,制备、收集腹水抗体;SDS-PAGE鉴定抗体大小、ELISA测定抗体效价、Western blot和IFA鉴定抗体特异性。本试验建立了3株稳定分泌抗体的细胞株;腹水抗体重链大小为55 kDa,轻链25 kDa,均为IgG1型,效价高于10^(4),抗体可特异性结合病毒抗原。结果证实,制备的单克隆抗体效价高、特异性好,为制备检测BVDV试剂盒奠定基础。
- 陈文龙米晓钰张阳阳张生英张玉珺邢小勇胡永浩
- 关键词：BVDV单克隆抗体
