用单克隆抗体亲和层析法纯化重组人肿瘤坏死因子α 被引量:3 1992年 用抗rHuTNF-α单抗(G_(11)、D_(12))与溴化氰活化的Sepharose4B偶联制成亲和层析柱,纯化了rHuTNF-α。结果表明,经G_(11)-Sepharose4B柱纯化的TNFα比活性比纯化前提高2.71~4.51倍;经D_(12)-Sepharose4B柱纯化的TNF-α比活性提高2.3~3.4倍。G_(11)-Sepha-rose4B柱的蛋白回收率高于D_(12)-Sepharose4B柱。纯化产物经SDS-PAGE确定达电泳纯,其分子量约为17000道尔顿。 许辉 安献禄 刘雪松 金伯泉 王俊龙 智刚 黄传书关键词:肿瘤坏死因子-A 单克隆抗体 分泌肾综合征出血病热毒单克隆抗独特型抗体的杂交瘤细胞系的建立 1989年 将HFRS病人Ab_1免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合,制备了HFRSV的McAb_2。初期融合试验中用ELISA间接法检测阳性克隆,阳性率为3.2~7.4%。其中5株杂交瘤经克隆化后阳性率达到100%。特异性鉴定表明,5种McAb_2只与HFRS病人Ab_1结合,不与正常人Ig结合。McAb_2所识别的独特型是人Ab_1与部分小鼠抗HFRSV的McAb上的交叉反应独特型。本文还应用McAb_2作为探针,对抗HFRSV的单克隆抗体的独特型进行了分析。 许辉 汪美先 薛采芳 安献禄关键词:单克隆抗独特型抗体 杂交瘤细胞系 肾综合征 出血病 热毒 分泌 金黄色葡萄球菌A型肠毒素单克隆抗体的制备 被引量:3 1992年 金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)A型肠毒素(SEA)是金葡菌产生的一种水溶性胞外蛋白质,能引起人和某些哺乳动物的急性胃肠炎。SEA的致病作用机理目前尚不清楚。最近研究发现SEA还具有对人和小鼠等某些动物T淋巴细胞的多克隆丝裂原效应。因此,制备抗SEA单克隆抗体。 董邦全 李恩善 汪美先 田方 许辉 雷祚荣关键词:葡萄球菌 肠毒素 单克隆抗体 抗人CD8单抗κ轻链可变区基因的克隆和序列测定 被引量:8 1992年 OK T8杂交瘤细胞株从American typecuhure collection(ATCC)获得,产生抗人CD8分子的单克隆抗体IgG2a(γ2a,κ),为了对这一鼠源性单抗进行基因工程改造,我们首先克隆了该单抗的κ轻链可变区基因,并测定了其碱基序列,现将结果报道如下: 通过计算机查找并分析了已发表的几十株抗体的轻链可变区基因序列,经比较其5’端保守序列和J区序列,设计了一对DNA引物:GTGAATTCATGGACATCCAGATGACCCA- 杨安钢 吉昌华 韩骅 杨立宏 苏成芝 许辉 金伯泉关键词:基因 单克隆抗体 免疫球蛋白 血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备 1989年 作者用人γ球蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞系融合,并以猪γ球蛋白作ELISA进行筛选,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的McAb杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_4)。用有限稀释法对1B_(11)和2A_4进行了克隆化。阳性率达到100%。特异性试验结果表明:1B_(11)能识别人IgG、猪γ球蛋白和兔γ球蛋白;2A_4所识别的抗原存在于人Ig和猪γ球蛋白上,但未测出对兔γ球蛋白结合活性。 许辉 汪美先 薛采芳 安献禄关键词:交叉反应抗原 Γ球蛋白 单克隆抗体 血清 有限稀释法 克隆化 用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义 1989年 用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验,检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先,采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞,将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清,将沉降细胞重新悬浮后调至0.1ml并加入5%小牛血清.混匀,取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上,800rpm离心5分钟,取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒,水洗,吹干。 许辉 刘俊彬 汪美先 薛采芳 安献禄关键词:肾综合征出血热 病人 抗体检测 特异 单克隆抗独特型抗体 HFRS病毒 血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备 1990年 用人γ球蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的单抗杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_4)。鉴定表明,1B_(11)能识别人IgG、猪γ球蛋白和兔γ球蛋白;2A_4所识别的抗原存在于人IsG和猪γ球蛋白上,但未测出对兔γ球蛋白的结合活性。 许辉 汪美先 薛采芳 安献禄关键词:球蛋白 单克隆抗体 分泌肾综合征出血热病毒单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的初步建立 1989年 本文在己制备了HFRSV多克隆抗独特型抗体的基础上,又制备了HFRSV的单克隆抗独特型抗体,为HFR马的研究开辟了新的途径。 许辉 汪美先 薛采芳 安献禄关键词:单克隆抗独特型抗体 肾综合征出血热病毒 杂交瘤细胞系 HFRSV 分泌 多克隆 用酶标Ig交叉反应性单抗作间接ELISA检测肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体 1990年 自Tkachenko等和Gavrilovskaya等应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HFRS病毒抗体以来,ELISA在HFRS的诊断与血清流行病学调查上的应用得到不断的发展。1986年,柴瑞珍等建立了ELISA抗IgM固相法检测人血清中的IgM抗体,但若用于不同种属血清的检测则需选用不同的固相包被抗体。本文在制备了Ig交叉反应性单抗(McAb)的基础上,制备了可用于人、猪、兔血清IgG检测的酶标McAb,建立了检测人、猪、兔血清中HFRS病毒抗体的ELISA间接法。 许辉 汪美先 薛采芳 安献录关键词:肾综合征 出血热 病毒抗体 非洲爪蛙卵母细胞系统 TLSF_(JM)mRNA 体外翻译研究 1992年 应用酸性胍一步法从分泌 TLSF_(JM)的细胞系 JM 中提取总 RNA,进而纯化 mRNA,并应用微注射技术将纯化的 mRNA 注入非洲爪蛙卵母细胞中进行翻译表达。结果表明:非洲爪蛙卵母细胞能有效地翻译外源注入的 mRNA,翻译的 TLSF_(JM)产物主要滞留在卵母细胞内,仅有少量分泌到卵母细胞培养液中.TLSF_(JM) mRNA 体外翻译的成功为其 CDNA 文库的构建以及 TLSF_(JM)基因克隆和表达提供了重要的理论依据和实验基础. 夏海滨 金伯泉 李恩善 许辉关键词:RNA