金伯泉
- 作品数：576 被引量：1,499H指数：16
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学哲学宗教更多>>
- 截短型BAP31/GST基因重组质粒的构建及融合蛋白的表达、纯化和鉴定
- 2011年
- 目的构建编码截短型肿瘤抗原BAP31(△BAP31)与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白(△BAP31/GST)进行纯化和初步鉴定。方法 PCR扩增编码△BAP31的基因片段,上下游分别引入EcoR I及Xho I酶切位点,亚克隆至含有GST标签的原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-△BAP31,将该载体转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达△BAP31/GST,用GST亲和层析分离纯化原核表达的△BAP31/GST,表达产物分别用SDS-PAGE和West-ern blot进行鉴定。结果重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达△BAP31/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量为40 000,与理论值相符,并主要以可溶性蛋白形式存在;经过对融合蛋白表达条件的优化,在IPTG浓度为1 mmol/L,诱导6 h目的蛋白表达量最高;灰度扫描分析发现,融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的70.6%,纯化产物的纯度最高可达94.5%,Western blot证实该△BAP31/GST可与抗GST单克隆抗体(mAb)发生特异性结合反应,分子量为△BAP31与GST分子量之和,提示为融合蛋白。结论成功构建了编码△BAP31基因原核表达载体pGEX4T1-△BAP31,利用大肠杆菌表达系统和GST亲和层析,获得了较高纯度的△BAP31/GST融合蛋白,为进一步研究肿瘤抗原BAP31的功能及开发以BAP31作为靶点的肿瘤疫苗提供了试验基础。
- 李海涛宋朝君孙元杰魏玉英李永明刘飞刘志佳张葵金伯泉杨琨
- 关键词：GST融合蛋白蛋白表达
- 非洲爪蛙卵母细胞系统 TLSF_(JM)mRNA 体外翻译研究
- 1992年
- 应用酸性胍一步法从分泌 TLSF_(JM)的细胞系 JM 中提取总 RNA,进而纯化 mRNA,并应用微注射技术将纯化的 mRNA 注入非洲爪蛙卵母细胞中进行翻译表达。结果表明:非洲爪蛙卵母细胞能有效地翻译外源注入的 mRNA,翻译的 TLSF_(JM)产物主要滞留在卵母细胞内,仅有少量分泌到卵母细胞培养液中.TLSF_(JM) mRNA 体外翻译的成功为其 CDNA 文库的构建以及 TLSF_(JM)基因克隆和表达提供了重要的理论依据和实验基础.
- 夏海滨金伯泉李恩善许辉
- 关键词：RNA
- 自然杀伤细胞活化性受体DNAM-1和NKG2D的配体在结肠癌中的表达被引量：2
- 2013年
- 目的探讨自然杀伤细胞活化性受体DNAM-1和NKG2D的配体在结肠癌中的表达。方法收集2010年6月至2011年1月第四军医大学唐都医院收治的42例结肠癌患者的结肠组织标本以及距肿瘤边缘≥10cm的正常肠黏膜组织，采用免疫组织化学法检测结肠癌组织及正常肠黏膜组织中自然杀伤细胞活化性受体DNAM-1和NKG2D的配体CD155、CD112和MICA／B的表达情况。采用流式细胞仪检测4种来自Duke’sA、B、C和D期的结肠癌细胞系SW116、SW480、SW620和Col0205的CD155、CD112和MICA／B的表达情况。3种配体的表达水平与临床病理因素之间的关系采用Mann—WhitneyU检验、χ2检验及Fisher确切概率法分析。结果正常肠黏膜组织可见CD155弱阳性表达，未见CD112及MICA／B的表达。在结肠癌组织中3种配体的表达水平均显著增高，CD155、CD112和MICA／B的表达率分别为81．0％、52．4％和47．6％。3种配体的表达水平与患者的性别、淋巴结转移、肿瘤分化程度和Duke’s分期无关（P〉0．05）。CD155、CD112和MICA／B在结肠癌细胞系SW116、SW480、SW620和Col0205中的总体表达率分别为88．9％、67．4％和42．3％；CD155的总体表达率显著高于CD112和MICA／B的总体表达率（F=23．17，P〈0．05）。结论CD155、CD112和MICA／B在结肠癌组织及4种结肠癌细胞系中均有表达，其中CD155的表达水平较高。
- 张章董光龙陈安董瑞杜锡林金伯泉鲁建国
- 关键词：结肠肿瘤自然杀伤细胞受体免疫治疗
- 用7TD_1细胞检测IL-6生物学活性方法的改良被引量：4
- 1992年
- 本文对IL-6生物学活性检测试验的条件进行了研究。着重比较了4组不同状态的IL-6依赖细胞系7TD_1对IL-6的反应。~3H-TdR掺入结果显示,重组人IL-6(10u/ml)对长期培养组、饥饿组、复苏组和PH4.0枸橼酸缓冲液处理组7TD_1细胞的刺激指数分别为5.0、3.0、20.0和13.0。检测IL-6的敏感性以复苏组和pH4.0处理组7TD_1细胞为高。7TD_1细胞的密度以2×10~2/孔最佳。
- 朱勇金伯泉孙忱刘雪松赵宁陈慰峰
- 关键词：白细胞介素6免疫调控细胞
- 一种新的gp130结合分子的序列分析和真核表达被引量：4
- 1998年
- 目的对以ＧＳＴ－ｇｐ１３０融合蛋白为探针，筛选人胎盘ｃＤＮＡ文库而得到的一个分子（ＧＡＭ，ｇｐ１３０ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌｅ）ｃＤＮＡ序列进行测定并做真核表达。方法进行噬菌体制备及克隆测序，并做同源性检索和构型、亲水性分析，ＣＯＳ细胞转染和３５Ｓ－蛋氨酸标记。结果所得ＧＡＭ分子与另一已克隆成功但功能还不清楚的称为ｈＡＥＳ－１的分子同源性达９７．７％。此外，ＧＡＭｃＤＮＡ还与果蝇ｅｎｈａｎｃｅｒｏｆｓｐｌｉｔ基因相关的分子有较高同源性。ＧＡＭ分子具有一个５８８个核苷酸的开放读框，编码１９６个氨基酸。将ＧＡＭ分子ｃＤＮＡ转染ＣＯＳ细胞后，细胞裂解液电泳可见一分子量约为２４×１０３的表达带，与预期的分子量相符合。结论ＧＡＭ分子与ｈＡＥＳ－１分子在开放读框内仅相差一个氨基酸（且不排除测序的个别错误），其分子量也与已报道的ｈＡＥＳ－１分子量相同，故认为两者很可能是同一分子。
- 金伯泉刘飞
- 关键词：GP130信息传导DNA
- 人前单核细胞系U_(987)产生TNF-α条件的探讨被引量：4
- 1992年
- 本文观察了不同刺激剂诱导经TPA预处理的人原单核细胞系U_(927)表达TNF-α的条件。结果提示不经TPA预处理的U_(927)细胞在LPS或LPS+TPA等诱生剂诱导下不能产生TNF活性物质;只有经TPA预处理过的U_(927)细胞,才能在LPS或LPS+TPA诱导下产生较高水平的TNF活性物质,且TPA对LPS的诱导作用有协同效应.但TPA单独却不能诱导处理后的U_(927)细胞表达TNF活性物质;经用抗TNF-α多克隆鼠血清中和试验证实上述TNF活性物质为TNF-α。对上述产生TNF-α的时间动力学研究表明,经诱生剂作用6小时后,应用抗TN-α McAb的免疫组织化学技术能检出TNF-α阳性细胞,12小时达高峰,此后迅速下降。而培养上清中在诱导12小时后方可检出一定活性的TNF-α,24小时达高峰。此诱导系统的建立为研究某些免疫调节剂对TNF-α的调控作用提供了很好的研究模型。
- 黄传书金伯泉汪美先
- 关键词：肿瘤坏死因子单核细胞
- 肾综合征出血热患者血浆中可溶性AXL升高与病情严重程度相关
- 研究背景:Tyro3、AXL和Mer组成酪氨酸激酶受体中一个亚家族,TAM具有调节多种细胞的存活、增殖与分化功能。可溶型AXL与肿瘤及炎症性疾病相关。肾综合征出血热(HFRS)是由汉坦病毒引起的自然疫源性疾病,是危害人类...
- 张春梅唐康张宇丝马樱金伯泉张赟
- 关键词：肾综合征出血热发病机理
- 文献传递
- 杂交瘤腹水抗体效价的不稳定性及其对策被引量：4
- 2005年
- 陈立杰宋朝君李琦金伯泉
- 关键词：杂交瘤单克隆抗体克隆化
- 临床医学七年制学员《医学免疫学》英语教学探讨
- 2008年
- 为适应医学发展趋势和教学改革的要求，第四军医大学基础部免疫学教研室在临床医学七年制学员医学免疫学授课过程中，部分章节采用了英语教学。本文对这一教学模式的实践运用进行初步探讨，旨在进一步提高医学免疫学英语教学水平。
- 陈丽华李琦金伯泉杨安钢
- 关键词：临床医学七年制医学免疫学英语教学
- 一组小鼠抗大鼠单克隆抗体的鉴定被引量：1
- 2000年
- 闵密克朱勇金伯泉贾卫刘雪松
- 关键词：单克隆抗体流式细胞术
