范丽
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪CyclinA基因的克隆及其功能的初步研究
- 细胞周期蛋白A(Cyclin A)作为细胞周期蛋白家族的一员,在细胞周期调控系统中发挥着重要作用,它是调控细胞周期S期及G2/M期的关键蛋白,并控制着细胞DNA合成的起始。CyclinA的正常表达是细胞周期正确有序进行的...
- 范丽
- 关键词：克隆
- 文献传递
- 猪细胞周期蛋白A基因的克隆及其功能研究
- 2010年
- 本研究旨在克隆猪细胞周期蛋白A基因(CyclinA),并在猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)中表达,以验证其功能。以人的CyclinA基因为信息探针,经电子克隆得到猪CyclinA基因,通过RT-PCR和DNA测序验证电子克隆结果并对其作生物信息学分析,用RT-PCR、Westernblot研究它在SUVEC中的表达情况。应用激光共聚焦显微镜分析它在细胞中的亚细胞定位,并通过流式细胞仪分析细胞周期以及用MTS法测定细胞的增殖能力。结果如下:核酸测序证明RT-PCR产物同电子克隆结果相符。该cDNA包含1299bp的完整开放阅读框(ORF),共编码432个氨基酸,经NCBIBLAST分析,该基因定位于猪的8号染色体上。Westernblot结果显示CyclinA基因编码蛋白的相对分子质量大小约为40ku,亚细胞定位研究表明该蛋白定位于细胞核中。经流式细胞仪分析表明稳定表达该基因的细胞,其G1期的细胞数量比对照组细胞增加了15%～20%,而S期的细胞数量比对照组细胞减少了约18%;MTS法检测显示细胞株SUVEC-CycAGFP的增殖活性明显高于对照组细胞。作者成功克隆到新基因猪源细胞周期蛋白A,并验证了其生物学功能,为今后开展病毒感染对猪细胞周期蛋白A影响的研究奠定了基础。
- 范丽唐青海张彦明刘伟仝刚
- 关键词：克隆真核表达细胞周期MTS
