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荧光素标记抗CD3/CD4/CD8单克隆抗体的质量控制: 目的：对本室用荧光素标记的抗CD3、CD4和CD8单克隆抗体进行质量控制。方法：采用流式细胞术，利用其多参数的流式细胞分析技术，对单色、多色荧光标记抗体的偶联率及偶联效果进行分析与评价。结果: 荧...; 孙可芳闭兰端义坤赵亚杰张涛张爱华; 关键词：荧光标记单克隆抗体生物制品; 文献传递

HIV跨膜蛋白gp36-gp41的截短及联合表达: 目的:将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行联合表达.方法:用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用Bam...; 张涛孙可芳汪超英端义坤彭祥兵王志友余模松; 关键词：人类免疫缺陷病毒1型跨膜蛋白; 文献传递

利用生物信息学确定质粒中所含HIV基因片段相应特性被引量：5: 2003年; 目的　确定质粒中所含HIV基因片段的来源以及相应表达产物的特性。方法　将质粒中的该段基因克隆到载体pUC19上进行测序后 ,利用生物信息学相关技术对该基因序列进行分析 ,并对其表达产物的基本特性作初步预测。结果　分析表明 ,该段基因与HIV ⅢB的同源性高达 99% ,属于HIVenv基因的序列 ,表达的产物含有HIVgp4 1和gp12 0的部分结构。结论　利用生物信息学的有关方法能迅速地对序列进行准确分析 ,有利于生物学、医学的迅速发展。; 张涛端义坤余模松; 关键词：人免疫缺陷病毒生物信息学跨膜蛋白

HIV-1跨膜蛋白gp41的截短及表达被引量：3: 2003年; 将HIV 1跨膜蛋白gp4 1进行截短 ,在大肠杆菌中进行表达并纯化。PCR扩增 gp4 1的部分编码基因 ,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体 pGEM T上 ,然后用EcoRⅠ和Sa1Ⅰ切下目的基因 ,并构建到表达载体pGEX 4T3上 ,导入宿主细胞BL2 1(DE3) ,用IPTG诱导表达 ,表达产物用亲和层析进行纯化并作相应鉴定。截短的HIV 1跨膜蛋白 gp4 1能直接在大肠杆菌内进行表达 ,利用亲和层析能方便地将目的蛋白进行纯化。; 端义坤张涛余模松; 关键词：人类免疫缺陷病毒1型基因表达

噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析被引量：2: 2005年; 目的　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子 ,并进行基因序列分析。方法　采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原 ,对自建的 4× 10 5Fab噬菌体抗体库进行富集筛选 ,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌 ,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后 ,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析。结果　共挑选了 6 0个单克隆菌株 ,其中噬菌体ELISA阳性有 2 7个 ,阳性率为 4 5 % ;PCR鉴定均为相应大小片段 ;限制性内切酶鉴定表明 2 7个阳性克隆菌中有 13个具有约 15 0 0bp的片段 ,其余均为约 75 0bp大小 ;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同 ;选取 5个含约 15 0 0bp片段和 2个含约75 0bp片段的克隆菌株 ,经测序均为人免疫球蛋白基因 ,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族 ,轻链分别属于L5、L6、L8和 0 12 /0 2家族。结论　从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子。表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性。; 张爱华端义坤闭兰赵亚杰张智阎莹王志友余模松; 关键词：FAB抗体抗乙型肝炎病毒表面抗原噬菌体展示

三种方法提纯小鼠单克隆IgM抗体的比较研究被引量：4: 1991年; 本文报道用聚乙二醇(PEG)沉淀、超速离心和SephacrylS-200柱层析三种方法从小鼠腹水中提纯单克隆IgM抗体,并比较了它们的纯度、免疫活性和回收率。其中,纯化IgM的纯度以Sephacryl S-200柱层析最高;免疫活性以PEG沉淀最好;而超速离心的回收率较高。我们认为用PEG沉淀提纯单克隆IgM是一种简单、快速、有效的方法,可推广。; 鲁仲云周北平邓立群温重秋端义坤; 关键词：单克隆抗体 IGM抗体提纯方法超速离心

荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体被引量：3: 2006年; 以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联。使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析。; 赵亚杰闭兰孙可芳端义坤詹骞金玉玲吕兰君张爱华; 关键词：R-藻红蛋白

单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清醛缩酶A被引量：2: 1991年; 哺乳动物果糖1,6-二磷酸酶缩酶(简称醛缩酶,ALD,EC4,1,2,13)有三型同工酶:ALD-A(肌型),ALD-B(肝型)和ALD-C(脑型)。近年来,一些学者应用放射免疫分析技术对ALD-A的研究表明,肝细胞癌(HCC)血清和癌组织中ALD-A替代了正常组织中的ALD-B,成为肝癌组织中的主要同工酶,显示胚胎型同工酶在肝脏中的重现。但是最近RoydS等报道。; 鲁仲云周北平温重秋端义坤邓立群; 关键词：单克隆抗体 ELISA 血清

我国狂犬病疫苗生产用毒株糖蛋白氨基酸序列及其抗原位点分析被引量：3: 2006年; 目的分析我国狂犬病疫苗生产用毒株aG(PG)株和CTN株糖蛋白结构及抗原位点的差异。方法登录GenBank搜寻aG株和CTN株糖蛋白的氨基酸序列,用Vector NTI Suite8软件分析两毒株糖蛋白的同源性;用DNAStar5分析两毒株糖蛋白的二级结构和潜在的抗原位点。结果aG株和CTN株的糖蛋白氨基酸序列的同源性为88·2%,特征性二级结构的位置与数量相似,主要的抗原位点均为13个。结论两毒株的糖蛋白氨基酸序列虽然存在一定的差异,但生产的狂犬病疫苗均能产生较好的保护效果,提示某些表位是产生中和抗体的关键。; 尹娟肖健周志军朱华松端义坤; 关键词：狂犬病疫苗糖蛋白氨基酸抗原位点

抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达被引量：2: 2011年; 目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dotblot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析。结果成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列;抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确;表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子;免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区。结论已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础。; 胡迪超张爱华潘勇兵端义坤孙可芳张银川杨晓明; 关键词：基因拼接嵌合抗体

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端义坤

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