石衍君
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金湖北省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 应用PCR-SSCP技术对Ⅰ型糖尿病基因突变的初步分析
- PCR-SSCP是一种基于PCR的单链构象多态性的分析技术。是DNA已知突变的检测或未知变异的分析中十分常用和实用的方法之一,本实验用扩增片段长度多态性的方法,对35例胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)患者和正常人进行了AC...
- 杨艳燕石衍君许芳
- 关键词：PCR-SSCP糖尿病
- 文献传递
- 纳豆激酶基因在大肠杆菌中活性表达的比较研究被引量：14
- 2004年
- 实现纳豆激酶基因 (nattokinasegene)在大肠杆菌中高活性表达 ,并说明前肽 ( pro序列 )对纳豆激酶的活性表达必不可少。以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,采用PCR方法分别扩增编码信号肽、前肽及成熟肽的序列 ( pre pro NK)和编码前肽、成熟肽的序列 (pro NK) ,构建了大肠杆菌表达质粒 pTYB1 0 1 ,pTYB1 0 2 ,转化大肠杆菌ER2 5 66。在IPTG诱导下 ,分别在 1 5℃ ( 1 4h) ,3 0℃ ( 3h)和 3 7℃ ( 2h)培养。结果可见 ,pTYB1 0 2能表达有活性的纳豆激酶。SDS PAGE表明 ,1 5℃表达杂蛋白更少。薄层扫描显示表达的纳豆激酶占菌体总蛋白的 3 0 %以上。成功制备了表达纳豆激酶的工程菌。
- 许芳冯建成李洁石衍君阎达中杨艳燕
- 关键词：纳豆激酶大肠杆菌活性丝氨酸蛋白酶心脑血管疾病
- 微生物发酵法生产透明质酸
- 2004年
- 概述了透明质酸的发现、存在及生理作用,重点介绍了微生物发酵法生产透明质酸的方法及其前景。
- 冯建成李洁石衍君金义鑫袁琳杨艳燕
- 关键词：透明质酸HA微生物发酵法玻璃酸分离纯化技术
- 重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究被引量：6
- 2004年
- 将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶.首先对表达条件进行优化,最佳诱导温度是15℃,最佳诱导时间是10 h.然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶.冷冻干燥品在SDS-PAGE上呈一条蛋白质带.纯化倍数35倍,纯酶比活1147.54.该酶的最适反应条件是45℃,pH 8.0.酶活性在pH 6.0-11.0,55℃以下稳定.
- 许芳冯建成李洁石衍君杨艳燕
- 关键词：分离纯化大肠杆菌枯草芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶
- 应用PCR-SSCP技术对Ⅰ型糖尿病基因突变的初步分析
- 杨艳燕石衍君许芳
- 来源于豆豉的纳豆激酶基因在大肠杆菌中活性表达研究被引量：6
- 2004年
- 目的构建大肠杆菌表达质粒pTYB10 2 ,实现纳豆激酶基因 (nattokinasegene)在大肠杆菌中高活性表达。方法以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,采用PCR方法分别扩增编码前肽、成熟肽的序列 (pro NK) ,构建大肠杆菌表达质粒pTYB10 2 ,转化大肠杆菌ER2 5 6 6。在IPTG诱导下 ,分别在 37℃ (2h)、30℃ (3h)和 15℃ (14h)培养。结果pTYB10 2能表达有活性的纳豆激酶。SDS PAGE表明 ,15℃表达杂蛋白质更少。结论证明具有 77个氨基酸序列的前肽 (pro序列 )对纳豆激酶的活性表达是必不可少的。
- 杨艳燕李洁石衍君袁琳许芳
- 关键词：纳豆激酶基因大肠杆菌表达质粒活性表达
