李洁
- 作品数：6 被引量：37H指数：4
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金湖北省教育厅重点项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 纳豆激酶基因在大肠杆菌中活性表达的比较研究被引量：14
- 2004年
- 实现纳豆激酶基因 (nattokinasegene)在大肠杆菌中高活性表达 ,并说明前肽 ( pro序列 )对纳豆激酶的活性表达必不可少。以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,采用PCR方法分别扩增编码信号肽、前肽及成熟肽的序列 ( pre pro NK)和编码前肽、成熟肽的序列 (pro NK) ,构建了大肠杆菌表达质粒 pTYB1 0 1 ,pTYB1 0 2 ,转化大肠杆菌ER2 5 66。在IPTG诱导下 ,分别在 1 5℃ ( 1 4h) ,3 0℃ ( 3h)和 3 7℃ ( 2h)培养。结果可见 ,pTYB1 0 2能表达有活性的纳豆激酶。SDS PAGE表明 ,1 5℃表达杂蛋白更少。薄层扫描显示表达的纳豆激酶占菌体总蛋白的 3 0 %以上。成功制备了表达纳豆激酶的工程菌。
- 许芳冯建成李洁石衍君阎达中杨艳燕
- 关键词：纳豆激酶大肠杆菌活性丝氨酸蛋白酶心脑血管疾病
- 一株黄原胶降解菌的筛选与鉴定被引量：1
- 2013年
- 从土壤中分离出一株能够降解黄原胶的菌株,对这株黄原胶降解菌进行形态特征、生理生化特征及16SrDNA的序列分析,并利用系统发育分析等研究结果,确认该菌株属于芽胞杆菌科的芽胞杆菌属,为进一步开展菌株改良、定点诱变等提高菌株降解黄原胶能力的工作奠定基础.
- 刘亚云李洁杨伍苏柯杨艳燕
- 关键词：生理生化特征RRNA基因序列分析
- 纳豆激酶基因克隆及其在大肠杆菌中活性表达研究被引量：17
- 2003年
- 以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增了纳豆激酶基因(nattokinasegene)中编码前肽、成熟肽的核苷酸序列(pro NK),构建大肠杆菌表达质粒pTYB102,转化大肠杆菌ER2566.在IPTG诱导下,分别在15℃(14h)、30℃(3h)、37℃(2h)条件下培养,pTYB102均能表达出有活性的纳豆激酶.实验证实纳豆激酶基因得到活性表达需要Pro序列.SDS PAGE表明,15℃比30℃和37℃培养表达的杂蛋白更少.薄层扫描测定表达的纳豆激酶占菌体总蛋白的30%以上.
- 闫达中许芳李洁冯建成杨艳燕
- 关键词：纳豆激酶基因克隆大肠杆菌基因表达
- 微生物发酵法生产透明质酸
- 2004年
- 概述了透明质酸的发现、存在及生理作用,重点介绍了微生物发酵法生产透明质酸的方法及其前景。
- 冯建成李洁石衍君金义鑫袁琳杨艳燕
- 关键词：透明质酸HA微生物发酵法玻璃酸分离纯化技术
- 重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究被引量：6
- 2004年
- 将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶.首先对表达条件进行优化,最佳诱导温度是15℃,最佳诱导时间是10 h.然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶.冷冻干燥品在SDS-PAGE上呈一条蛋白质带.纯化倍数35倍,纯酶比活1147.54.该酶的最适反应条件是45℃,pH 8.0.酶活性在pH 6.0-11.0,55℃以下稳定.
- 许芳冯建成李洁石衍君杨艳燕
- 关键词：分离纯化大肠杆菌枯草芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶
- 来源于豆豉的纳豆激酶基因在大肠杆菌中活性表达研究被引量：6
- 2004年
- 目的构建大肠杆菌表达质粒pTYB10 2 ,实现纳豆激酶基因 (nattokinasegene)在大肠杆菌中高活性表达。方法以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板 ,采用PCR方法分别扩增编码前肽、成熟肽的序列 (pro NK) ,构建大肠杆菌表达质粒pTYB10 2 ,转化大肠杆菌ER2 5 6 6。在IPTG诱导下 ,分别在 37℃ (2h)、30℃ (3h)和 15℃ (14h)培养。结果pTYB10 2能表达有活性的纳豆激酶。SDS PAGE表明 ,15℃表达杂蛋白质更少。结论证明具有 77个氨基酸序列的前肽 (pro序列 )对纳豆激酶的活性表达是必不可少的。
- 杨艳燕李洁石衍君袁琳许芳
- 关键词：纳豆激酶基因大肠杆菌表达质粒活性表达
