温南
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学中山医学院生物化学教研室更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人纤溶酶原K5突变体在原核系统的优化表达、活性检测与结构改建
- 血管增生(neovasculsrization)，即从已存在的毛细血管网上大量生成新生血管的过程，是肝癌等实体性肿瘤生长和转移的关键环节。新生血管的长入不仅提供肿瘤生长需要的营养物质和氧气以及带走代谢废物，内皮细胞还为肿...
- 温南
- 关键词：缺失突变体血管生成肠激酶
- 文献传递
- 人纤溶酶原K5突变体在大肠杆菌中的优化表达被引量：4
- 2008年
- 【目的】提高K5突变体(mK5)在原核系统的单位表达量。【方法】调整可能影响表达的参数:抗生素浓度、pH、A600值、IPTG终浓度、诱导时间、诱导温度,同时固定其它参数。通过电泳分析,获得mK5在原核系统pET22b-BL21的最优表达条件;组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得mK5蛋白,SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定mK5蛋白;MTT法分析mK5对人视网膜毛细血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响。【结果】优化后的表达条件为:最适细菌培养温度为37℃,最佳抗生素浓度为50μg/mL羧苄青霉素,最适pH值为7.0,在A600为0.9～1.0时加入终浓度为1.0mmol/L的IPTG为最佳诱导条件,37℃诱导10h为最佳诱导时间;优化条件后mK5纯化蛋白得率为21mg/L,产量较优化前(15mg/L)提高近30%;mK5特异性地抑制HRCEC的增殖,IC50=40nmol/L。【结论】本研究确定了mK5蛋白诱导表达的最适参数,并获得具有生物活性的高纯度、高表达量的重组蛋白,为工业化大规模发酵生产提供了基本参数。
- 李朝阳温南杨中汉蔡卫斌李明友刘祖国高国全杨霞
- 关键词：缺失突变体血管新生
