汪桦
- 作品数：13 被引量：48H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金西北工业大学基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 汉坦病毒包膜糖蛋白G2重组腺病毒的构建及其在Hela细胞中的表达
- 2009年
- 本研究旨在构建可表达汉坦病毒(HTNV)糖蛋白G2的重组腺病毒。应用PCR方法扩增G2编码基因,经T/A克隆、测序鉴定后再亚克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV中并用磷酸钙沉淀法分别将携带G2编码基因的重组腺病毒shuttle载体与携带报告基因eGFP的腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装、扩增、纯化后得到携带HTNV糖蛋白G2编码基因的重组腺病毒;用重组腺病毒感染Hela细胞并收获蛋白,间接免疫荧光、Western blotting检测蛋白表达。经酶切鉴定表明已成功构建了携带G2基因的重组腺病毒载体;RT-PCR鉴定表明目的基因能够在感染重组腺病毒的Hela细胞中转录;荧光显微镜观察重组腺病毒感染的Hela细胞,可见报告基因eGFP的表达;间接免疫荧光法和Western blotting均证实表达产物可被抗G2单克隆抗体所识别,表明糖蛋白G2在感染细胞中得到了表达。本研究成功构建了可表达HTNV包膜糖蛋白G2的重组腺病毒,转染宿主细胞可稳定表达目的蛋白,为HTNV糖蛋白G2的结晶、结构解析研究以及新型汉坦病毒疫苗的研制奠定了基础。
- 呼延霆薛小平宋凯汪桦杨慧王伟
- 关键词：汉坦病毒重组腺病毒
- 动态磁场下微生物的生物学效应研究被引量：3
- 2009年
- 磁场是一种普遍存在的环境因子,但其对微生物的影响尚不清楚.使用超导磁体产生的静态磁场,配以自制实验装置对所选菌株(枯草芽胞杆菌和鼠伤寒沙门氏菌)进行动态磁场处理,比较处理组与地磁场对照组之间包括生长曲线、酶活力等在内的各项生理生化指标,研究动态磁场对微生物的影响.研究发现,动态磁场下两株细菌的生长过程均受到影响.处理组枯草芽胞杆菌对数期提前,衰亡期菌体死亡速率受抑制,碱性蛋白酶活力增加,中性蛋白酶活力降低,而蛋白酶表达量无差异;鼠伤寒沙门氏菌动态磁场处理组对数期推迟,衰亡期菌体死亡亦受到抑制,细菌粘附实验与侵袭力实验表明,细菌毒力相对增强.以上结果表明,动态磁场可对微生物产生影响,并随着微生物种类的不同而异.
- 尹焕才薛小平杨慧唐蕊华谢玉为苏婧宋凯呼延霆汪桦
- 关键词：超导磁体动态磁场酶活力侵袭力粘附力
- 模拟微重力环境下细菌生物学效应的初步研究被引量：9
- 2009年
- 目的研究模拟微重力环境下细菌的生物学效应。方法应用回转器处理实验菌株(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、鼠伤寒沙门氏菌),检测其生长曲线,抗生素敏感性,以及抗生素敏感性变化株与野生株间脂肪酸图谱的差别。结果模拟微重力条件下,细菌对数期提前、生长曲线形状改变。回转器处理30d后可检测到大肠杆菌抗生素敏感性突变株,并且突变株的数量与处理时间呈现正相关趋势;鼠伤寒沙门氏菌处理120d后,检测到氨苄西林和左氧沙星耐受株突变为敏感株;脂肪酸图谱分析显示,突变株与对照株相比脂肪酸的种类和含量存在一定差异。结论回转器模拟微重力条件下,细菌生物性状受到影响,抗生素敏感性的改变可能与细菌脂肪酸图谱的变化有关。
- 尹焕才薛小平杨慧谢玉为唐蕊华苏婧宋凯呼延霆汪桦
- 关键词：模拟微重力回转器抗生素敏感性脂肪酸
- 截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
- 2010年
- 为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清。说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体。
- 田江红雷迎峰尹文陈任安汪桦吕欣杨敬孙梦宁姚敏徐志凯
- 关键词：HCVNS5BRNA聚合酶蛋白表达
- Myostatin三维结构模建及分子进化分析被引量：3
- 2008年
- Myostatin(MST)为肌肉生长负调节因子,其功能受抑制可导致肌肉量增加。对MST核酸序列进行序列比对,构建进化树;采用同源模建方法首次模建MST成熟肽生物活性二聚体的四级结构,并预测MST与其受体ActRIIB的相互作用模式。进化树将肌肉生长抑制素基因(MSTN)分成4个亚家族:哺乳动物MSTN,鸟类MSTN以及鱼类MSTN1和2。MST受纯化选择作用,在不同物种的直系同源基因具有较高的同源性,其中哺乳动物、鸟类MSTC端活性肽氨基酸序列高度保守。表明哺乳动物、鸟类MST的结构、功能类似,且信号传导路径可能一致;而鱼类MST的调控机制可能存在较大差异。MST结构及其表面静电势和疏水氨基酸分布表明静电力和疏水相互作用在MST与其受体结合过程中可能起到十分重要的作用。
- 谢玉为薛小平尹焕才唐蕊华苏婧宋凯呼延霆汪桦杨慧
- 关键词：肌肉生长抑制素基因分子进化同源模建
- ASPH在肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布及检测被引量：13
- 2010年
- 目的:检测肿瘤细胞系和我国肿瘤患者癌组织中天冬氨酰-(天冬酰胺酰)β-羟化酶(ASPH)的分布及表达谱。方法:采用RT-PCR法检测肿瘤细胞系中ASPH基因的转录水平;细胞免疫荧光和Western blot方法检测肿瘤细胞系中ASPH蛋白的表达水平;免疫组织化学方法检测人癌组织和正常组织中ASPH的分布与表达。结果:在肿瘤细胞系中AS-PH在转录和翻译水平均有不同程度表达,ASPH蛋白分布于细胞膜和胞质区域;在肿瘤患者组织中有ASPH的高表达,而人正常组织中不表达或表达量极低。结论:ASPH是一种有潜力的广谱性肿瘤标记分子,有可能用于肿瘤的早期检测。
- 宋凯薛小平王伟呼延霆汪桦杨慧谢琼
- 关键词：肿瘤细胞系
- 鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达被引量：1
- 2010年
- 目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重叠延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。
- 汪桦薛小平雷迎峰宋凯呼延霆王伟杨慧
- 关键词：单链抗体单克隆抗体蛋白表达
- HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展被引量：5
- 2009年
- 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.
- 汪桦薛小平雷迎峰
- 关键词：丙型肝炎NS5B
- 人源性抗丙型肝炎病毒核糖体展示单链抗体库的构建被引量：2
- 2010年
- 汪桦田江红薛小平雷迎峰陈任安吕欣杨敬孙梦宁姚敏
- 关键词：核糖体展示单链抗体库肝炎病毒
- 失重或模拟失重对微生物的生物学效应研究进展
- 2010年
- 目的 综述国内外关于失重或模拟失重对微生物生物学效应方面的研究进展.资料来源与选择国内外该领域公开发表的相关论著及综述.资料引用引用文献资料38篇.资料综合空间失重环境可诱导微生物生理生化和遗传性状发生变异,一些原本对人体和环境无害的微生物种群会在毒力、致病性、抗生素敏感性等方面发生改变.结论 利用微生物开展空间失重生物学效应的研究对于阐明失重环境下微生物生存和变异的机制、未来空间受控生态生保系统的建立、空间微生物安全监控及空间失重资源的合理利用等都有重要的理论和实际意义.
- 杨慧薛小平谢琼王伟宋凯呼延霆汪桦
- 关键词：失重失重模拟环境微生物学生物学效应
