宋凯
- 作品数：12 被引量：54H指数：5
- 供职机构：西北工业大学生命学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金西北工业大学基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 模拟微重力环境下细菌生物学效应的初步研究被引量：9
- 2009年
- 目的研究模拟微重力环境下细菌的生物学效应。方法应用回转器处理实验菌株(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、鼠伤寒沙门氏菌),检测其生长曲线,抗生素敏感性,以及抗生素敏感性变化株与野生株间脂肪酸图谱的差别。结果模拟微重力条件下,细菌对数期提前、生长曲线形状改变。回转器处理30d后可检测到大肠杆菌抗生素敏感性突变株,并且突变株的数量与处理时间呈现正相关趋势;鼠伤寒沙门氏菌处理120d后,检测到氨苄西林和左氧沙星耐受株突变为敏感株;脂肪酸图谱分析显示,突变株与对照株相比脂肪酸的种类和含量存在一定差异。结论回转器模拟微重力条件下,细菌生物性状受到影响,抗生素敏感性的改变可能与细菌脂肪酸图谱的变化有关。
- 尹焕才薛小平杨慧谢玉为唐蕊华苏婧宋凯呼延霆汪桦
- 关键词：模拟微重力回转器抗生素敏感性脂肪酸
- Myostatin三维结构模建及分子进化分析被引量：3
- 2008年
- Myostatin(MST)为肌肉生长负调节因子,其功能受抑制可导致肌肉量增加。对MST核酸序列进行序列比对,构建进化树;采用同源模建方法首次模建MST成熟肽生物活性二聚体的四级结构,并预测MST与其受体ActRIIB的相互作用模式。进化树将肌肉生长抑制素基因(MSTN)分成4个亚家族:哺乳动物MSTN,鸟类MSTN以及鱼类MSTN1和2。MST受纯化选择作用,在不同物种的直系同源基因具有较高的同源性,其中哺乳动物、鸟类MSTC端活性肽氨基酸序列高度保守。表明哺乳动物、鸟类MST的结构、功能类似,且信号传导路径可能一致;而鱼类MST的调控机制可能存在较大差异。MST结构及其表面静电势和疏水氨基酸分布表明静电力和疏水相互作用在MST与其受体结合过程中可能起到十分重要的作用。
- 谢玉为薛小平尹焕才唐蕊华苏婧宋凯呼延霆汪桦杨慧
- 关键词：肌肉生长抑制素基因分子进化同源模建
- 汉坦病毒包膜糖蛋白G2重组腺病毒的构建及其在Hela细胞中的表达
- 2009年
- 本研究旨在构建可表达汉坦病毒(HTNV)糖蛋白G2的重组腺病毒。应用PCR方法扩增G2编码基因,经T/A克隆、测序鉴定后再亚克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV中并用磷酸钙沉淀法分别将携带G2编码基因的重组腺病毒shuttle载体与携带报告基因eGFP的腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装、扩增、纯化后得到携带HTNV糖蛋白G2编码基因的重组腺病毒;用重组腺病毒感染Hela细胞并收获蛋白,间接免疫荧光、Western blotting检测蛋白表达。经酶切鉴定表明已成功构建了携带G2基因的重组腺病毒载体;RT-PCR鉴定表明目的基因能够在感染重组腺病毒的Hela细胞中转录;荧光显微镜观察重组腺病毒感染的Hela细胞,可见报告基因eGFP的表达;间接免疫荧光法和Western blotting均证实表达产物可被抗G2单克隆抗体所识别,表明糖蛋白G2在感染细胞中得到了表达。本研究成功构建了可表达HTNV包膜糖蛋白G2的重组腺病毒,转染宿主细胞可稳定表达目的蛋白,为HTNV糖蛋白G2的结晶、结构解析研究以及新型汉坦病毒疫苗的研制奠定了基础。
- 呼延霆薛小平宋凯汪桦杨慧王伟
- 关键词：汉坦病毒重组腺病毒
- 动态磁场下微生物的生物学效应研究被引量：3
- 2009年
- 磁场是一种普遍存在的环境因子,但其对微生物的影响尚不清楚.使用超导磁体产生的静态磁场,配以自制实验装置对所选菌株(枯草芽胞杆菌和鼠伤寒沙门氏菌)进行动态磁场处理,比较处理组与地磁场对照组之间包括生长曲线、酶活力等在内的各项生理生化指标,研究动态磁场对微生物的影响.研究发现,动态磁场下两株细菌的生长过程均受到影响.处理组枯草芽胞杆菌对数期提前,衰亡期菌体死亡速率受抑制,碱性蛋白酶活力增加,中性蛋白酶活力降低,而蛋白酶表达量无差异;鼠伤寒沙门氏菌动态磁场处理组对数期推迟,衰亡期菌体死亡亦受到抑制,细菌粘附实验与侵袭力实验表明,细菌毒力相对增强.以上结果表明,动态磁场可对微生物产生影响,并随着微生物种类的不同而异.
- 尹焕才薛小平杨慧唐蕊华谢玉为苏婧宋凯呼延霆汪桦
- 关键词：超导磁体动态磁场酶活力侵袭力粘附力
- ASPH在肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布及检测被引量：13
- 2010年
- 目的:检测肿瘤细胞系和我国肿瘤患者癌组织中天冬氨酰-(天冬酰胺酰)β-羟化酶(ASPH)的分布及表达谱。方法:采用RT-PCR法检测肿瘤细胞系中ASPH基因的转录水平;细胞免疫荧光和Western blot方法检测肿瘤细胞系中ASPH蛋白的表达水平;免疫组织化学方法检测人癌组织和正常组织中ASPH的分布与表达。结果:在肿瘤细胞系中AS-PH在转录和翻译水平均有不同程度表达,ASPH蛋白分布于细胞膜和胞质区域;在肿瘤患者组织中有ASPH的高表达,而人正常组织中不表达或表达量极低。结论:ASPH是一种有潜力的广谱性肿瘤标记分子,有可能用于肿瘤的早期检测。
- 宋凯薛小平王伟呼延霆汪桦杨慧谢琼
- 关键词：肿瘤细胞系
- 鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达被引量：1
- 2010年
- 目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重叠延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。
- 汪桦薛小平雷迎峰宋凯呼延霆王伟杨慧
- 关键词：单链抗体单克隆抗体蛋白表达
- 阿莫西林人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备被引量：5
- 2011年
- 目的:合成阿莫西林(AMX)完全抗原,获得稳定、高效分泌抗AMX单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。方法:采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法制备AMX-OVA(免疫原)AMX-BSA(检测抗原),紫外光谱分析检测偶联物克分子比,以AMX-OVA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选分泌抗AMX mAb的杂交瘤细胞,体内诱生法制备腹水,辛酸-硫酸胺法从腹水中纯化mAb,ELISA法测定mAb亚类。结果:紫外光谱显示偶联物表现出小分子与蛋白载体叠加的特征,具有良好的免疫原性和反应原性。获得了5株可稳定分泌特异性抗AMX mAb的杂交瘤细胞株,亚类鉴定均为IgG1。mAb对AMX最小检测极限(limit of detection,LOD)为0.25 ng/mL,但与同属β-内酰胺类抗生素的氨苄青霉素有一定程度的交叉反应。结论:该细胞株可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求。
- 薛添宋凯薛小平
- 关键词：阿莫西林单克隆抗体小鼠
- 失重或模拟失重对微生物的生物学效应研究进展
- 2010年
- 目的 综述国内外关于失重或模拟失重对微生物生物学效应方面的研究进展.资料来源与选择国内外该领域公开发表的相关论著及综述.资料引用引用文献资料38篇.资料综合空间失重环境可诱导微生物生理生化和遗传性状发生变异,一些原本对人体和环境无害的微生物种群会在毒力、致病性、抗生素敏感性等方面发生改变.结论 利用微生物开展空间失重生物学效应的研究对于阐明失重环境下微生物生存和变异的机制、未来空间受控生态生保系统的建立、空间微生物安全监控及空间失重资源的合理利用等都有重要的理论和实际意义.
- 杨慧薛小平谢琼王伟宋凯呼延霆汪桦
- 关键词：失重失重模拟环境微生物学生物学效应
- 汉坦病毒包膜糖蛋白重组表达研究进展被引量：1
- 2009年
- 汉坦病毒（Hantaan virus．HTNV）属于布尼亚病毒科，主要引起人类肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）。Lee等1978年首次在田鼠的肺组织中分离出HTNV，并鉴定其为引起HFRS的病原。HFRS是一种以发烧、出血和肾功能损害为特征的全球性急性病毒传染病．病死率介于40％～60％，目前尚无特异有效的治疗药物。
- 呼延霆薛小平宋凯汪桦
- 关键词：汉坦病毒包膜糖蛋白HFRS布尼亚病毒FEVERRENAL
- 人类天冬胺酰基β-羟化酶的表达及其单克隆抗体的制备
- 2011年
- 旨在深入研究人类天冬胺酰基β-羟化酶(HAAH)在肿瘤早期诊断中的作用机制。应用RT-PCR方法从肝癌组织中获得人类天冬胺酰基β-羟化酶HAAH编码基因,并在原核表达载体pBV-IL1中进行融合表达,将Ni柱纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,获得了3株稳定的阳性单克隆细胞株(H3/E10、E4/F12、G4/D8),间接ELISA和Western blotting鉴定单抗的特异性和灵敏度,以单抗H3/E10介导的间接免疫荧光检测HAAH在各种肿瘤细胞系中的表达,可见特异的荧光。试验中成功构建了可表达HAAH基因的原核表达载体pBV-IL1-HAAH,并制备了3株抗HAAH的单克隆抗体,为HAAH的结构和功能的研究奠定了基础,同时也为进一步将该抗体应用于肿瘤的早期诊断以及研究HAAH在肿瘤发生转移中的机理提供了重要工具。
- 呼延霆尹大川王伟宋凯王燕卢慧甍杨慧薛小平
- 关键词：原核表达单克隆抗体
