李臣
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：昆明医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：云南省社会发展科技计划国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 上皮钙黏素1基因启动子甲基化对结肠癌上皮钙黏素和β-连接素表达的影响被引量：6
- 2011年
- 目的探讨上皮钙黏素基因（CDH1）启动子甲基化与结肠癌上皮钙黏素（E—cadherin）及β-连接素（β-catenin）的表达及临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR技术检测68例结肠腺癌组织、癌旁组织及正常黏膜组织中CDH1基因启动子甲基化的状况。采用免疫组织化学法检测E-cadherin及β—catenin蛋白的表达．结果癌旁组织及癌组织中CDH1启动子甲基化的阳性表达分别为32．4％（22／68）、57．4％（39／68），正常组织均为阴性表达（P〈0．05）。E—cadherin在正常组织、癌旁组织及腺癌组织中阳性表达率分别为92．6％、66．2％和44．1％。正常组织中β—catenin均表达于细胞膜上，无胞质和（或）胞核表达。而β—catenin在癌旁组织及癌组织中胞质和（或）胞核表达分别为29．4％和50．0％。CDH1基因启动子甲基化阳性率与E-cadheftn表达则呈负相关（r=-0．312，P=0．01），与β-catenin胞质和（或）胞核表达呈正相关（r=0．309，P=0．018）。CDH1基因启动子甲基化及E-cadherin、β-catenin的异常表达均与结肠癌分化程度及转移密切相关（P〈0．05）。结论CDH1基因启动子甲基化可能是导致结肠癌E-cadheftn与β-catenin异常表达及肿瘤侵袭性增强的重要原因。
- 李臣董坚陈明清李文亮任俊宇陈圣雄李秋恬耿计伟缪延栋杨静
- 关键词：上皮钙黏素Β-连接素结肠肿瘤甲基化
- 乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应被引量：2
- 2011年
- 目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。
- 耿计伟董坚刘为青高嫦娥熊秋霞缪延栋周华华李秋恬李臣
- 关键词：MDA-MB-231细胞靶向性
- 表观遗传学与结直肠癌的关系研究进展被引量：4
- 2010年
- 李臣陈明清董坚
- 关键词：表观遗传学结直肠癌
- 人乳腺癌细胞特异性多肽跨膜转导机制初步研究
- 2011年
- 目的:初步探讨人乳腺癌细胞MDA-MB-231特异性多肽PI的跨膜转导机制。方法:合成PI肽链,并在其N端进行FITC标记;探讨FITC-PI的跨膜转导与MHC-Ⅰ表达的关系,利用MHC-Ⅰ抗体阻断MDA-MB-231细胞和Calu-1细胞表面MHC-Ⅰ抗原,聚合酶链反应-序列特异性引物法进行基因分析;探讨FITC-PI的跨膜转导是否与小窝蛋白介导的内吞有关,抑制剂制霉菌素与MDA-MB-231细胞共培养,荧光显微镜观察以及流式细胞仪检测细胞内FITC-PI分布情况;探讨FITC-PI跨膜转导是否与2株细胞表面相同的膜蛋白有关系,膜蛋白提取试剂盒分别提取2株细胞膜蛋白,双向电泳对其进行差异性分析。结果:MHC-Ⅰ抗体阻断后,2株细胞内仍可见FITC-PI分布,基因位点分析显示2株细胞HLA-A、B位点等位基因不同;加入制霉菌素后,镜下观察及流式细胞仪检测均显示FITC-PI分布减少;双向电泳初步分析2株细胞膜蛋白图谱共有11个相同的蛋白点。结论:PI的跨膜转导机制不单一,其一,部分由小窝蛋白介导的内吞机制,其二,可能与2株细胞表面相同的膜蛋白有关系,此研究为将来继续探讨其跨膜转导机制奠定了实验基础和理论依据。
- 缪延栋陈青高嫦娥刘为青熊秋霞耿计伟李秋恬李臣董坚
- 关键词：细胞穿透肽乳腺癌跨膜转导
- 天然药物IHA-01筛选敏感肿瘤细胞株及其对结肠癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2011年
- 目的筛选出对天然药物IHA-01的敏感肿瘤细胞,并对其抗瘤机制进行初步研究。方法体外培养12种人肿瘤细胞株,经3.125、6.25、12.5、25和50μg/ml 5个浓度IHA-01作用48 h后光镜下观察细胞株形态变化,采用CCK-8法计算IC50值(半数抑制浓度),确认敏感细胞株及最佳作用浓度。流式细胞仪检测IHA-01最佳作用浓度下敏感细胞株细胞凋亡情况及端粒酶活性。结果 5个浓度IHA-01均能抑制12种癌细胞增殖,确定结肠癌HCT-8细胞为敏感细胞(IC50值最低),最佳作用浓度为1.29μg/ml;鼻咽癌CNE-2细胞为不敏感细胞(IC50值最高)。1.29μg/ml的IHA-01作用后HCT-8细胞凋亡率明显高于、端粒酶活性明显低于CNE-2细胞(P均<0.01)。结论 IHA-01对HCT-8细胞有较强的抑制作用;其机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡及抑制细胞端粒酶活性。
- 李秋恬洪敏陈晓李少遊缪延栋耿计伟李臣尹燕鹰董坚
- 关键词：结肠癌细胞端粒酶活性
- 干扰Livin基因对人胆管癌QBC939细胞增殖影响的研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究转染Livin反义寡核苷酸（antisense 01igodeoxynucleotide，ASODN）对人胆管癌细胞株QBC939细胞LivinmRNA及Livin蛋白表达以及细胞增殖的影响。方法设计合成全硫代磷酸化修饰并5’端FITC荧光标记的LivinASODN。用脂质体介导Livin ASODN转染QBC939细胞，荧光显微镜观察24 h Livin ASODN转染入细胞的情况，并计算转染率。MTT法检测I Lvin反义寡核苷酸对QBC939细胞增殖的抑制作用。RT-PCR和细胞免疫荧光化学分别检测转染后48 h Livin mRNA表达及Livin蛋白的变化。结果500mol／LASODN转染后24h可达到最佳的转染效果；转染后60h，能明显抑制胆管癌细胞的增殖。转染60h后，RT—PCR及细胞免疫荧光化学检测分别显示Livin mRNA及Livin蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论脂质体介导转染Livin ASODN能特异性地抑制QBC939细胞中的Livin基因及Livin蛋白表达，抑制胆管癌QBC939细胞的增殖，降低癌细胞活力。
- 陈圣雄崔平李臣洪敏李少遊段乐乐
- 关键词：LIVIN基因干扰胆管癌细胞增殖
- 结肠癌细胞CDH1基因启动子甲基化对E-上皮钙黏素和β-连接素表达的调控作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察结肠癌细胞中上皮钙黏素基因（CDH1）启动子甲基化对上皮钙黏素（E—cadherin）和β-连接素（β—catenin）表达的影响。方法通过甲基化特异性PCR（MSP）、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DNA甲基化抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）干预前后人结肠癌HT-29细胞株CDH1基因启动子甲基化状态及E—cadherin mRNA的改变，并运用免疫荧光标记及激光共聚焦观察E—cadherin和β-catenin在细胞内的表达及分布。结果（1）HT-29细胞在用药前CDH1基因启动子甲基化扩增阳性，非甲基化扩增阴性，用5-Aza-CdR处理后CDH1基因启动子甲基化扩增阴性，非甲基化扩增阳性；（2）5-Aza—CdR处理前细胞RT—PCR不能扩增出E—cadherin mRNA特异性条带，5-Aza—CdR处理后则可检测到E—cadherinmRNA转录，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关，平均灰度比值1μmol／L时为0．491±0．011，2μmol／L时为0．568±0．013（P〈0．05：（3）5-Aza-CdR处理前细胞未见E-cadherin表达，13-catenin主要表达于细胞质及细胞核中，5-Aza—CdR处理后在细胞膜可见E—cadherin及-catenin表达。且随着5-Aza—CdR诱导E-cadherin的表达，β-catenin在细胞膜的分布增加，而在细胞质及细胞核的分布明显减少。免疫荧光双重染色显示β-catenin胞膜分布与E—cadherin一致。结论CDH1基因启动子甲基化可能是导致结肠癌细胞E—cadherin表达缺失及β—catenin异位分布的重要因素。
- 李臣任俊宇洪敏李少遂刘为青高嫦娥陈圣雄周华华陈明清董坚
- 关键词：上皮钙黏素Β-连接素结肠癌甲基化
