李男礼
- 作品数：18 被引量：24H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院动物医学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省青年科研基金吉林省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 牛源犬新孢子虫NcAMA1基因酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定被引量：2
- 2016年
- 为筛选牛源犬新孢子虫AMA1与虫体互作的靶蛋白,构建NcAMA1基因酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-AMA1。本试验应用RT-PCR技术从虫体总RNA中扩增了去除跨膜螺旋的AMA1基因,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酵母Y2H,并验证其在酵母细胞中毒性作用和有无自激活现象。结果显示:本试验成功构建了诱饵载体pGBKT7-AMA1,并证明其对酵母细胞无毒性,且对报告基因无自激活。结果表明:诱饵载体pGBKT7-AMA1可用于酵母双杂交系统筛选与虫体互作的宿主蛋白。
- 李积旭张守发李男礼贾立军
- 关键词：犬新孢子虫酵母双杂交诱饵载体
- 犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及其真核表达被引量：2
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,PCR扩增了NcAMA1基因,以此构建了pMD18T-NcAMA1重组克隆质粒;对该重组克隆质粒进行双酶切鉴定后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pCR259中。应用脂质体介导转染法将经PCR鉴定和酶切鉴定正确的pCR259-NcAMA1重组穿梭质粒转染293细胞,应用IFAT和Western-blot技术检测了AMA1基因在293细胞中的表达情况。结果显示,扩增的NcAMA1基因长度为1 695bp,构建的重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcAMA1能在293细胞中获得瞬时表达,表达蛋白的分子质量约为68ku。
- 郭焕平贾立军于龙政薛书江高洋李男礼张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 吉林省白山地区牛新孢子虫病流行病学调查被引量：5
- 2015年
- 为了解吉林省白山地区牛新孢子虫病的流行情况,本研究应用间接ELISA方法对采自吉林省白山地区5个县区193份牛血清样品进行了检测,并对不同地区、不同养殖方式、不同品种及不同年龄段牛新孢子虫病感染情况进行了比较分析。结果显示,检测样本的总体阳性率为35.8%(69/193);经统计学分析,不同地区、不同养殖方式及不同年龄段牛新孢子虫感染率差异显著(P<0.05);而不同品种牛新孢子虫感染率差异不显著(P>0.05)。调查表明,吉林省白山地区是牛新孢子虫病的流行区域,此次调查为该地区牛新孢子虫病的防控提供了科学的理论依据。
- 李男礼张守发李积旭张蕾贾立军
- 关键词：新孢子虫病流行病学
- 牛源犬新孢子虫NcGRA7基因的克隆及原核表达分析
- 为了解牛源犬新孢子虫NcGRA7基因的生物学特性.本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫NcG-RA7基因,将PCR产物连接到pMD：18T Simple Vector载体,构建pMD 18：NcGRA7克隆质粒,经PC...
- 李男礼贾立军张守发
- 关键词：犬新孢子虫原核表达
- 犬新孢子虫AMA1基因的生物信息学分析及原核表达载体构建
- 2015年
- 为了解新孢子虫AMA1基因的生物信息学特性,并构建重组原核表达质粒p GEX-4T-1-Nc AMA1。本试验对牛源犬新孢子虫吉林株AMA1基因进行分子克隆,利用生物信息学软件对该基因进行编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析,并将该基因片段亚克隆至原核表达载体p GEX-4T-1,构建了重组表达质粒p GEX-4T-1-Nc AMA1。结果显示,克隆的Nc AMA1基因片段长1 695 bp,与GenBank(AB265823.1)上发表的基因序列同源性99.9%;Nc AMA1基因编码蛋白等电点为5.43,在其N端及C端分别存在一个跨膜区,为不溶性蛋白,且Nc AMA1蛋白抗原指数较高,有潜在疫苗研究价值。
- 李男礼贾立军郭焕平李积旭张守发
- 关键词：犬新孢子虫NC原核表达载体
- 牛源犬新孢子虫AMA1基因亚单位疫苗的制备及免疫原性分析
- 引言新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫（Neospora caninum）寄生于犬、牛、羊等多种哺乳动物细胞内而引起的一种原虫病[1]。全球范围内30多个国家都有发生[2],大多数牛场每年损失达2%5%...
- 郭焕平张守发李积旭李男礼贾立军
- 牛源犬新孢子虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：2
- 2016年
- 旨在构建酵母双杂交牛源犬新孢子虫cDNA表达文库,进而为研究新孢子虫功能结构以及为其入侵宿主致病机理研究提供良好的试验体系。体外培养牛源犬新孢子虫延边株,纯化并提取虫体总RNA,应用SMART技术合成双链cDNA（ds cDNA）。利用CHROMA SPINT＋TE-400Columns纯化柱纯化ds cDNA,并与线性化的p GADT7-Rec共转化酵母菌菌株Y187,以同源重组的方式在酵母细胞内构建牛源犬新孢子虫酵母双杂交cDNA表达文库。结果显示,文库容量为5.78×108cfu/m L,随机挑取23个单克隆进行菌落PCR检测,插入的双链c DNA片段大小为400~4 000 bp,平均长度在2 000 bp左右,文库重组率为100%,此文库可用于酵母双杂交筛选。试验为筛选新孢子虫与宿主之间相互作用蛋白研究奠定了基础。
- 李积旭张守发李男礼海旭南贾立军
- 关键词：犬新孢子虫酵母双杂交CDNA文库
- 牛源犬新孢子虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
- [目的]本研究旨在构建酵母双杂交牛源犬新孢子虫cDNA表达文库,进而为研究新孢子虫功能结构以及为其入侵宿主致病机理研究提供良好的试验体系.[方法]体外培养牛源犬新孢子虫延边株,纯化并提取虫体总RNA,应用SMART技术合...
- 李积旭张守发贾立军李男礼于龙政薛书江赵鹏海旭南
- 关键词：犬新孢子虫酵母双杂交CDNA文库
- 牛源犬新孢子虫对孕鼠胎盘的损伤作用研究
- 犬新孢子虫（Neospora caninum）是寄生于牛、羊、犬等多种哺乳动物细胞内的一种原虫。犬新孢子虫主要引起母畜流产、死胎或新生儿运动障碍和神经系统疾病。新孢子虫病可垂直传播，对牛的危害极为严重，已成为危害养牛业健...
- 李男礼
- 关键词：犬新孢子虫病理学观察胎盘组织
- 文献传递
- 犬新孢子虫SRS9基因真核重组质粒的构建及在Vero细胞中表达被引量：1
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫NcSRS9基因真核表达重组质粒,了解NcSRS9表面蛋白基因的生物学特性及其体外表达情况。本试验应用PCR技术获得目片段,构建克隆质粒pMD18-NcSRS9,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后构建真核表达重组质粒pVAX1-NcSRS9,利用脂质体介导法转染至Vero细胞,以间接免疫荧光方法(IFAT)检测NcSRS9基因在Vero细胞中的表达。结果显示,犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS9基因长度为1 191bp,与GenBank中(EF440644.1)发表的基因核苷酸序列同源性为99%,IFAT检测NcSRS9基因在Vero细胞中获得瞬时表达,为核酸疫苗研究奠定了基础。
- 李强贾立军郭焕平李男礼张守发
- 关键词：犬新孢子虫真核表达
