李烨
- 作品数：26 被引量：52H指数：4
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目长沙市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学政治法律更多>>
- 城市居民最低生活保障对象的退出机制研究——以益阳市赫山区为例
- 我国城市最低生活保障制度建立十多年来，对保障城市中贫困群体的基本生活起到了重要的作用。然而，相对于城市最低生活保障对象的准入机制而言，退出机制发展比较缓慢，很多地区呈现出“进来容易、出去难”的问题。城市最低生活保障对象的...
- 李烨
- 关键词：政府政策
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒IV型衣壳蛋白缺失突变体原核表达与性质
- 2014年
- 采用PCR技术扩增基因IV型HEV(Hepatitis E Virus,HEV)开放阅读框2(Open Reading Frame 2,ORF2)的缺失突变体(aa384-606),亚克隆到表达载体后,转化到大肠杆菌中进行诱导表达,表达蛋白命名为rP24。SDS-PAGE和免疫印迹实验表明,rP24获得了高效表达,且和单克隆抗体15B2具有强的反应活性。rP24经过包涵体洗涤、溶解复性、离子交换层析和分子筛层析纯化后,免疫印迹实验表明,纯化rP24能与抗HEV ORF2中和单克隆抗体8C11以及HE(Hepatitis E,HE)阳性血清发生很强的免疫反应性,说明rP24上具有构象型中和表位,模拟了HEV衣壳蛋白的空间结构。动态光散色测量结果表明,rP24的平均水化半径为7.48 nm;纯化rP24免疫动物实验表明,rP24具有强的抗原性,小鼠阳转周期短,抗体持续时间长;纯化rP24作为包被抗原检测HE阳性血清和阴性血清,结果显示rP24对HE阳性血清和阴性血清检出率与北京万泰公司的抗HEV-IgG检测试剂盒的检出率一致。这些实验结果说明,具有较好免疫反应性和免疫原性的rP24获得了高效表达,该蛋白模拟了天然病毒衣壳蛋白的中和表位,为进一步研究基因I型和基因IV型HEV感染不同宿主细胞差异的分子机制奠定了基础。
- 邱义兰吴俊文邱果李桑李烨刘胜姿刘如石
- 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达免疫反应性免疫原性
- 丙二醛对体外培养下小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的诱导作用被引量：2
- 2014年
- 为了探索丙二醛对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的诱导作用及其机制,在不同浓度的丙二醛培养体系中孵育MSCs 24 h,用TUNEL法、流式细胞术检测MSC凋亡率,并用实时定量RT-PCR、Western印迹检测Bcl-2、Bax及Caspase-3基因的表达水平。结果发现,MDA能浓度依赖性地增加TUNEL阳性细胞百分率、亚G1峰细胞百分率,同时下调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,上调Bax mRNA和Caspase-3 mRNA及蛋白的表达.这些结果表明:在体外培养条件下,丙二醛可诱导小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡,其作用机制与Bcl-2、Bax和Caspase-3基因表达水平的变化有关。
- 李烨王逸安张君刘如石汪保和
- 关键词：丙二醛间充质干细胞凋亡
- 抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究被引量：1
- 2014年
- 人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。
- 邱果许凤邱义兰廖旻晶李烨刘胜姿李桑刘如石
- 关键词：人巨细胞病毒PP65蛋白杂交瘤细胞单克隆抗体
- 人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备
- 2012年
- 为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105,腹水的抗体效价为1×107;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。
- 吴俊文许凤熊璎珞鲁健邱义兰刘胜姿李烨刘如石
- 关键词：原核表达电洗脱单克隆抗体Β-ACTIN
- 间充质干细胞羰基应激及人参皂苷抗羰基应激作用
- 目的：活性羰基类物质具有广泛的生物毒性，它们在衰老过程中的作用深受研究者们关注。许多研究显示间充质干细胞(MSC)的功能变化参与了衰老过程及相关疾病的发生。然而，羰基类物质对MSC的影响，目前所知甚少。本文研究了活性羰基...
- 李烨
- 关键词：羰基应激间充质干细胞人参皂苷药理活性
- 高住低练对大鼠不同类型肌纤维HSP70和VEGF表达的影响
- 2014年
- 目的:研究模拟不同海拔高度高住低练对大鼠Ⅰ型肌纤维(比目鱼肌)和Ⅱ型肌纤维(腓肠肌)热休克蛋白70(HSP70)和血管生长因子(VEGF)表达的影响。方法:适应性喂养1周后,将48只SD大鼠按体重随机分为6组:常氧对照组(C组)、14.5%O2低氧暴露组(14.5%O2LH组)、12.7%O2低氧暴露组(12.7%O2LH组)、常氧训练组(TL组)、14.5%O2高住低练组(14.5%O2HiLo组)、12.7%O2高住低练组(12.7%O2HiLo组),每组8只。分别采用20.9%、14.5%和12.7%氧浓度的模拟高住低练模型,运动强度逐渐递增,实验共4周。采用免疫组织化学技术检测大鼠腓肠肌和比目鱼肌HSP70和VEGF的定位和半定量表达。结果:(1)与14.5%O2LH组相比,12.7%O2LH组腓肠肌和比目鱼肌HSP70阳性物质表达显著下降(Ρ<0.05,Ρ<0.01),而14.5%O2HiLo组和12.7%O2HiLo两组腓肠肌和比目鱼肌HSP70阳性物质表达与相应的两LH组变化相反;14.5%O2HiLo组腓肠肌HSP70表达显著低于14.5%O2LH组(Ρ<0.05),12.7%O2HiLo组却高于12.7%O2LH组(Ρ<0.05),两个LH组比目鱼肌HSP70表达分别显著高于两个HiLo组(Ρ<0.01)。(2)12.7%O2LH组腓肠肌VEGF阳性物质表达高于14.5%O2LH组(Ρ<0.05),14.5%O2HiLo组和12.7%O2HiLo组两组变化相似,但两HiLo组腓肠肌VEGF表达高于两LH组,氧浓度降低则VEGF表达增加更显著(Ρ<0.01);与C组相比,12.7%O2LH组、TL组和两HiLo组比目鱼肌VEGF阳性物质表达显著增加(Ρ<0.05),比目鱼肌VEGF表达整体趋势类似于腓肠肌。结论:单纯低氧暴露、运动或低氧运动应激/刺激原诱导HSP70和VEGF的表达具有肌纤维类型特异性,单纯低氧暴露比高住低练对HSP70表达的影响明显,而高住低练比单纯低氧暴露、运动对VEGF表达的影响大,Ⅰ型肌纤维(比目鱼肌)中HSP70和VEGF的表达显著高于Ⅱ型肌纤维(白腓肠肌);在Ⅱ型肌纤维中HSP70和VEGF之间存在协同效应,而在Ⅰ型肌纤维中未见。
- 刘文锋李烨瞿树林印大中汤长发王芝琴龚晓明
- 关键词：高住低练热休克蛋白70血管生长因子
- 丙二醛通过激活p38和JNK通路抑制间充质干细胞成骨分化被引量：2
- 2012年
- 为了探索丙二醛(malonaldehyde,MDA)抑制间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的作用机制,用不同浓度的丙二醛孵育MSCs,进行成骨诱导培养,检测碱性磷酸酶活性和钙结节形成;并检测p38和JNK表达水平和磷酸化程度,用这两种信号分子的特异性阻断剂进行验证.结果发现,丙二醛浓度依赖性地降低MSCs碱性磷酸酶的活性,抑制钙结节的形成;并引起p38和JNK的表达上调和磷酸化增强,诱导JNK由胞浆向胞核转位;p38和JNK阻断剂对丙二醛的上述效应有拮抗作用.结果表明,丙二醛可抑制MSCs的成骨诱导分化,其作用机制涉及p38和JNK信号通路的参与.
- 李烨刘文锋刘如石印大中
- 关键词：丙二醛间充质干细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路成骨分化
- 丙二醛对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响被引量：2
- 2012年
- 为了探索氧化应激活性中间产物丙二醛对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及机制,体外培养的间充质干细胞经丙二醛处理后,在第4、7、14、21 d分别提取等份细胞进行碱性磷酸酶活性检测,第7 d时提取RNA通过实时定量RT-PCR测定ALP和Runx2/Cbfal mRNA表达,并在第21 d进行von Kossa染色,茜素红染色.研究发现:丙二醛通过降低碱性磷酸酶活性及ALP和Runx2/Cbfal mRNA的表达,抑制矿化骨节形成.这些结果表明:丙二醛可通过抑制ALP和Runx2/Cbfal通路,抑制小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化.
- 李烨杨沐思刘文锋杨慧刘如石汪保和印大中
- 关键词：丙二醛骨髓间充质干细胞成骨分化RUNX2CBFAL
- 贴壁培养细胞台盼蓝拒染试验的方法学探讨被引量：14
- 2011年
- 本工作旨在探讨贴壁培养细胞台盼蓝拒染试验的方法,为其合理应用提出建议。用正常培养及NaN_3作致死处理的人视网膜色素上皮细胞株-19,进行原位贴壁细胞和培养体系上悬液中细胞的台盼蓝拒染实验,并比较其原位法与计数板法所测活细胞率。与计数板法相似,随染液浓度增高或染色时间延长,原位台盼蓝拒染实验的活细胞率检测值逐渐增加。培养体系上悬液中脱落细胞的存活率显著低于贴壁的细胞,NaN_3处理使脱落细胞增加。因此,对于贴壁牢固的培养细胞,原位台盼蓝染色是检测活细胞率的实用方法。根据细胞从培养表面上消化下来的难易程度和脱落到培养上悬液中的数目多少,可选用原位染色法或/和计数板法台盼蓝拒染试验,从而检测贴壁培养细胞的总存活率。
- 彭彬吴晶晶李烨徐倩唐琳汪保和
- 关键词：细胞计数
