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利用有机溶剂法快速纯化绿色荧光蛋白: 2012年; 介绍非色谱GFP纯化方法——有机溶剂纯化法.该方法在短时间内(30min)即可获得大量较高纯度(91.7%),且荧光光谱特征不改变的GFP蛋白.纯化过程简单,无需昂贵的仪器和设备,适合绝大多数中小实验室使用.; 王盛董洁曾瑾曹慜张虹雒丽娜; 关键词：绿色荧光蛋白两相系统

RNA聚合酶I介导转录的TBSV病毒表达载体研究: 植物RNA病毒载体表达系统是近年发展起来的一类以植物作为反应器的新型表达系统。现有的植物RNA病毒表达载体多采用RNA聚合酶Ⅱ识别的启动子（Ⅱ类启动子）。番茄丛矮病毒（Tomato bushy stunt virus，T...; 曹慜; 关键词：植物病毒 RNA聚合酶生物安全

番茄丛矮病毒的分子生物学研究进展被引量：4: 2013年; 近年来,多种植物RNA病毒载体被广泛地应用于外源基因的表达、植物病毒学和植物病理学基础理论的研究中.番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)是番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)番茄丛矮病毒属(Tombusvirus)的典型成员.TBSV病毒基因组复制、转录和翻译等分子机制的研究取得了巨大的进展,使得利用TBSV构建稳定、高效的表达载体成为可能.; 曹慜李志英牟红珍丁国平王盛; 关键词：番茄丛矮病毒

黄瓜花叶病毒2b蛋白C末端无抑制局部RNA沉默的活性: 2013年; 目的:黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)编码的2b蛋白具有RNA沉默抑制子的功能,其C末端氨基酸序列非常保守。为了明确2b蛋白C末端保守序列在RNA沉默抑制中的作用,构建了CMV Q株系野生型2b及其C末端缺失突变体2bdelC的植物瞬时表达载体。通过农杆菌共渗滤法对野生型2b及其C末端突变体的沉默抑制子活性进行了分析。结果与结论:烟草接种叶片中野生型2b及其C末端突变体的Western blot检测表明,野生型2b蛋白与其C末端突变体在植物中积累水平变化不大,说明2b蛋白C末端氨基酸残基在维持2b蛋白在植物细胞中的稳定性方面无作用。在整株、细胞和分子水平上分别比较了野生型2b及其突变体2bdelC对共表达GFP的表达量影响,结果表明在所有的测定结果中二者均无明显地差异,说明2b蛋白C末端94-111位氨基酸在抑制局部RNA沉默上无生物学活性,讨论推测C末端应不存在与小RNA结合的结构域。; 王盛曹慜董洁穆红珍丁国平张虹; 关键词：黄瓜花叶病毒 RNA沉默抑制子 C末端

7种RNA沉默抑制子对植物病毒载体表达系统表达水平的影响被引量：1: 2012年; 目的探索不同植物病毒RNA沉默抑制子对植物病毒载体表达系统重组蛋白表达水平的作用,为合理高效地利用这一新型的外源基因表达平台奠定基础。方法构建了7种不同的RNA沉默抑制子瞬时表达载体,以农杆菌渗滤法,与马铃薯X病毒表达载体PVXdt-GFP共侵染寄主植物本明烟,通过对报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的荧光观察,并以Western blotting、ELISA和RT-qPCR等测定GFP在烟草中的表达情况,分析不同RNA沉默抑制子对植物中外源基因表达水平的作用和特点。结果 7种病毒RNA沉默抑制子对外源基因GFP在烟草中表达水平的作用效果和持续时间存在差异,其中,番茄丛矮病毒的P19蛋白的增效作用最好,作用时间也最长;非洲木薯花叶病毒的AC2蛋白和水稻黄斑驳病毒的P1蛋白无明显的增效作用。结论 RNA沉默抑制子可以通过抑制病毒诱导的RNA沉默来提高外源基因在植物中的表达水平和表达持续时间,但是不同的植物病毒载体表达系统需要通过筛选获得其最佳的共表达沉默抑制子"伴侣"。; 王盛董洁曹慜穆红珍丁国平张虹; 关键词：RNA沉默抑制子马铃薯X病毒共表达绿色荧光蛋白

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曹慜