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利用有机溶剂法快速纯化绿色荧光蛋白: 2012年; 介绍非色谱GFP纯化方法——有机溶剂纯化法.该方法在短时间内(30min)即可获得大量较高纯度(91.7%),且荧光光谱特征不改变的GFP蛋白.纯化过程简单,无需昂贵的仪器和设备,适合绝大多数中小实验室使用.; 王盛董洁曾瑾曹慜张虹雒丽娜; 关键词：绿色荧光蛋白两相系统

黄瓜花叶病毒2b蛋白C末端无抑制局部RNA沉默的活性: 2013年; 目的:黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)编码的2b蛋白具有RNA沉默抑制子的功能,其C末端氨基酸序列非常保守。为了明确2b蛋白C末端保守序列在RNA沉默抑制中的作用,构建了CMV Q株系野生型2b及其C末端缺失突变体2bdelC的植物瞬时表达载体。通过农杆菌共渗滤法对野生型2b及其C末端突变体的沉默抑制子活性进行了分析。结果与结论:烟草接种叶片中野生型2b及其C末端突变体的Western blot检测表明,野生型2b蛋白与其C末端突变体在植物中积累水平变化不大,说明2b蛋白C末端氨基酸残基在维持2b蛋白在植物细胞中的稳定性方面无作用。在整株、细胞和分子水平上分别比较了野生型2b及其突变体2bdelC对共表达GFP的表达量影响,结果表明在所有的测定结果中二者均无明显地差异,说明2b蛋白C末端94-111位氨基酸在抑制局部RNA沉默上无生物学活性,讨论推测C末端应不存在与小RNA结合的结构域。; 王盛曹慜董洁穆红珍丁国平张虹; 关键词：黄瓜花叶病毒 RNA沉默抑制子 C末端

7种RNA沉默抑制子对植物病毒载体表达系统表达水平的影响被引量：1: 2012年; 目的探索不同植物病毒RNA沉默抑制子对植物病毒载体表达系统重组蛋白表达水平的作用,为合理高效地利用这一新型的外源基因表达平台奠定基础。方法构建了7种不同的RNA沉默抑制子瞬时表达载体,以农杆菌渗滤法,与马铃薯X病毒表达载体PVXdt-GFP共侵染寄主植物本明烟,通过对报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的荧光观察,并以Western blotting、ELISA和RT-qPCR等测定GFP在烟草中的表达情况,分析不同RNA沉默抑制子对植物中外源基因表达水平的作用和特点。结果 7种病毒RNA沉默抑制子对外源基因GFP在烟草中表达水平的作用效果和持续时间存在差异,其中,番茄丛矮病毒的P19蛋白的增效作用最好,作用时间也最长;非洲木薯花叶病毒的AC2蛋白和水稻黄斑驳病毒的P1蛋白无明显的增效作用。结论 RNA沉默抑制子可以通过抑制病毒诱导的RNA沉默来提高外源基因在植物中的表达水平和表达持续时间,但是不同的植物病毒载体表达系统需要通过筛选获得其最佳的共表达沉默抑制子"伴侣"。; 王盛董洁曹慜穆红珍丁国平张虹; 关键词：RNA沉默抑制子马铃薯X病毒共表达绿色荧光蛋白

TBSV病毒瞬时表达载体构建及其表达被引量：4: 2011年; 为了深入理解植物RNA病毒载体表达系统,初步建立了利用TBSV病毒表达载体在寄主植物烟草中表达外源蛋白的技术体系.以番茄丛矮病毒（Tomato bushy stunt virus,TBSV）为材料,构建了含报告基因sGFP的WY1,WY2等2个重组病毒表达载体,并将载体导入农杆菌GV3101用于侵染烟草植株叶片;利用农杆菌渗滤接种技术,使构建的载体在烟草本氏烟（Nicotiana benthamiana）中进行瞬时表达.结果表明,接种WY1的烟草,于接种后第2 d就可以检测到荧光信号,10~12 d时表达量达到最高.纯化后的sGFP与标准GFP相对分子质量相同且其荧光光谱也与文献报道的一致.对于感兴趣基因（Gene of interested,GOI）的表达和研究提供了一种新的途径.; 王盛王杨李志英张虹雒丽娜董洁王玉炯; 关键词：植物病毒番茄丛矮病毒烟草

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董洁