徐立
- 作品数：44 被引量：117H指数：7
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 抗肿瘤相关糖蛋白-72单抗在人乳腺癌中的表达被引量：4
- 2006年
- 目的检测肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)在人乳腺癌细胞系的表达,为利用抗TAG-72单链抗体(singlechainvariablefragment,scFv)诊治乳腺癌提供实验依据。方法将人乳腺癌细胞系MCF-7和Bcap-37通过细胞培养至对数生长期,并固定于载玻片上。用原核表达的抗TAG-72scFv经免疫细胞化学方法检测TAG-72在乳腺癌细胞中的表达。结果TAG-72在乳腺癌细胞系MCF-7中表达为阳性,在Bcap-37中表达为阴性,表明TAG-72在部分人乳腺癌细胞中得以表达。结论TAG-72在人部分乳腺癌中阳性表达,表明TAG-72抗原可作为一个肿瘤标志物在临床中应用,也为抗TAG-72scFv在乳腺癌诊治中应用奠定了实验基础。
- 徐宏勇徐立李开宗高建宏
- 关键词：乳腺癌单链抗体
- TAG-72嵌合锚定T细胞对乳腺癌的抑癌效应观察被引量：1
- 2012年
- 目的制备肿瘤相关糖蛋白-72抗原(TAG-72)嵌合锚定T细胞,通过体外实验检测其对乳腺癌细胞的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞瞬时转染方法,将已制备的重组真核表达载体即抗TAG-72-scFv-CD3ζ-pcDNA 3.0导入PBMC,以获得TAG-72嵌合锚定T细胞,以此为转染组;用转染空载体pcDNA 3.0的PBMC作为对照组。将转染组嵌合锚定T细胞和对照组PBMC细胞分别与乳腺癌细胞系MCF-7及Bcap37共培养,观察两者对乳腺癌细胞G1期的阻滞率。结果转染组对MCF-7细胞系的G1期阻滞率为(82.3±6.9)%,对照组为(43.4±3.9)%,2组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);转染组对Bcap37细胞系的G1期阻滞率为(51.3±4.7)%,对照组为(45.6±2.5)%,2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性地抑制TAG-72+乳腺癌细胞的增殖,此将为乳腺癌的临床诊治提供一种有希望的途径。
- 徐宏勇丁蓉徐立李开宗
- 关键词：乳腺癌外周血单个核细胞
- 黑色素斑-胃肠多发息肉综合征10例临床分析
- 2003年
- 董水霞官玲巧徐立吴开春
- 关键词：胃肠疾病家族性内窥镜检查
- HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立被引量：1
- 2000年
- 目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系，以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系，并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９，用Ｇ４１８进行筛选，用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达，用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１，ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达，这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制，其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１，ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９ ＨＳＰ９０β蛋白表达降低，细胞的生长受到不同程度的抑制。
- 刘宪玲徐立郭建成肖冰俞召才樊代明
- 关键词：基因转染肿瘤细胞
- 胃癌相关抗原MG7-Ag模拟肽表位的筛选及测序分析被引量：14
- 2000年
- 目的 从噬菌体呈现的随机肽库中筛选胃癌单克隆抗体MG7所识别的胃癌相关抗原的短肽模拟表位 ,为进一步研究胃癌相关抗原与单抗结合的结构基序奠定基础。方法 用胃癌单克隆抗体MG7对呈现于噬菌体衣壳蛋白pⅧ上的 2个九肽库分别进行亲和富集和免疫筛选 ;阳性克隆进一步用荧光标记和硝酸纤维素膜斑点印迹法证实其结合活性 ;经随机抽取部分阳性克隆进行DNA序列分析 ,推导出相应噬菌体呈现肽的氨基酸序列 ,通过序列比较分析相对保守的表位信息 ;运用HLA分子结合分析软件预测已测序短肽与HLA分子结合的可能性。结果 经反复多轮筛选和结合活性检测 ,从pⅧ和pⅧ cys 2个噬菌体肽库中分别得到了 12和 30个阳性克隆 ;通过对部分阳性克隆进行测序分析 ,推导相应的随机肽序列和序列比较分析 ,得到具有相对保守性的表位信息如PLX0 2 S、SAVR、XRMX、YARN等。经计算机预测分析 ,发现它们可与HLA多个分子结合。结论 PLX0 2 S、SAVR、XRMX、YARN等有可能为胃癌单克隆抗体MG7所识别的表位基序。
- 徐立乔泰东陈宝军欧阳为明丁杰张庆华周隽吴昕彦金伯泉樊代明
- 关键词：噬菌体单克隆抗体肽类胃肿瘤
- 肿瘤相关糖蛋白-72嵌合锚定T细胞对肝癌的抑癌效应被引量：3
- 2014年
- 目的制备肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,体内外实验检测其对肝癌的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞转染,将已制备的重组真核表达载体抗TAG-72 scFv-CD3ζ-pcDNA3.0导入PBMC,获得肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)嵌合锚定T细胞,以此为实验组治疗细胞;用SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞中抗TAG-72 scFv-CD3ζ嵌合分子的表达,并用Western blotting证实。用转染空载体pcDNA3.0的PBMC作为对照组治疗细胞。将实验组及对照组的治疗细胞分别经尾静脉注射治疗荷TAG-72+肝癌细胞HepG2、荷TAG-72-肝癌细胞BEL7402裸鼠动物模型,观察对裸鼠的抑癌效应。结果 SDS-PAGE检测TAG-72嵌合锚定T细胞嵌合分子抗TAG-72 scFv-CD3ζ的表达,显示大小为47 kDa的融合蛋白片段,与抗TAG-72 scFv-CD3ζ的理论值相符;Western blotting证实该片段CD3呈阳性表达。TAG-72嵌合锚定T细胞与肝癌细胞HepG2共培养后可对后者产生G1期阻滞。用TAG-72嵌合锚定T细胞经尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠,发现实验组细胞对荷HepG2细胞裸鼠存活时间、体质量、肿瘤包块大小等方面疗效优于荷BEL7402细胞裸鼠的疗效,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性抑制荷TAG-72+肝癌细胞裸鼠的肝癌细胞生长;该治疗策略将为肝癌的临床诊治提供一种有希望的途径。
- 徐宏勇徐立李开宗
- 关键词：肝癌T细胞
- 胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型ScFv的制备被引量：4
- 2001年
- 目的制备胃癌单抗 MGd1的单链可变区片段 (single chain variable fragm ent,Sc Fv) ,为胃癌体内诊疗研究提供候选靶向载体分子。方法从 MGd1杂交瘤分离 m RNA,RT- PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因 (VH和 VL DNA) ,二者经 linker DNA连接形成 Sc Fv DNA。将 Sc Fv DNA与载体 p CANTAB5 E的连接产物转化于大肠杆菌 TG1,经 M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体抗体 Sc Fv。以高表达 MGd1结合抗原的细胞株 KATO 对重组噬菌体抗体 Sc Fv进行两轮筛选后 ,随机挑取克隆经 EL ISA筛选 MGd1Sc Fv单克隆 ,并对其结合抗原的能力进行鉴定。结果 VH、VL 和 Sc Fv DNA分别约为 340、32 0和 75 0 bp。经两轮亲和筛选后 ,在随机筛检的 30个克隆中得到 12个噬菌体呈现型 MGd1Sc Fv单克隆 ,其中结合抗原能力强的克隆有 5个。结论用噬菌体呈现技术成功地获得了单抗 MGd1的 Sc Fv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。
- 何凤田聂勇战陈宝军徐立韩者艺乔太东安华章樊代明
- 关键词：胃癌噬菌体呈现SCFV
- 胃癌疫苗模拟肽表位的研究
- 2002年
- 徐立金伯泉等
- 关键词：胃癌疫苗
- 用随机肽库筛选胃癌相关抗原MGb2-Ag模拟肽表位被引量：2
- 1999年
- 的 运用肽库筛选技术寻找胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２ 所识别的胃癌相关抗原的短肽模拟表位。方法 以胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２ 作为筛选配基，对呈现于噬菌体衣壳蛋白ｐⅧ上的两个九肽库进行了亲和富集和免疫筛选；阳性克隆用荧光标记和硝酸纤维素膜斑点印迹证实结合活性；随机抽取部分阳性克隆进行了ＤＮＡ 测序分析。结果 经ＤＮＡ 测序分析推导出相应的氨基酸序列并加以比较分析，得到具有保守性的表位信息。结论 具有相对保守性的ＶＣＸＸＤＧＶ 可能为胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２所识别的表位基序。
- 徐立陈宝军乔泰东欧阳为明何凤田张庆华周隽吴昕彦金伯泉樊代明
- 关键词：胃肿瘤噬菌体呈现单克隆抗体
- 抗TAG-72抗原单链抗体的原核表达及对人肝癌的检测被引量：2
- 2010年
- 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)单链抗体的原核表达及与4种肝癌细胞系和肝癌组织的特异性亲和力。方法将抗TAG-72单链抗体的cDNA片段插入噬菌粒载体pCANTAB5E,获得噬菌粒载体TAG-72-scFv-pCANTAB5E。将后者转化入E.coliHB2151,经β,D异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得抗TAG-72单链抗体蛋白。采用细胞培养及免疫细胞/组织化学方法 ,检测4种肝癌细胞系及石蜡包埋的肝癌组织中TAG-72抗原的表达。结果 SDS-PAGE及Western blot法证实,抗TAG-72单链抗体蛋白分子得以正确表达。抗TAG-72单链抗体可与肝癌细胞系SMMC7721、HepG2和HHCC结合,表明这3种细胞表达了特异性肿瘤抗原;抗TAG-72单链抗体不能结合BEL7402细胞。40例肝癌组织中TAG-72抗原表达阳性率Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期分别为23.08%(3/13)和62.96%(17/27),在正常肝组织标本中无TAG-72抗原表达,TAG-72抗原在正常肝组织及肝癌组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72抗原在肝癌细胞或肝癌组织中有特异性表达,有可能成为判断肝癌的标志物。
- 徐宏勇徐立李开宗窦科峰
- 关键词：肝细胞癌单链抗体原核表达
