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内含特定RNA的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的研究: 本文对内含特定RNA的耐核糖核酸酶病毒样颗粒进行了研究。文章成功构建了新的表达载体pNCCL1-Ru、pNCCL1-AFP以及pNCCL1-PSA，经原核表达分别得到包含风疹病毒部分RNA序列、包含人甲胎蛋白mRNA部分...; 彭建明; 关键词：风疹病毒甲胎蛋白病毒样颗粒噬菌体; 文献传递

含人甲胎蛋白mRNA部分序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：5: 2005年; 原发性肝癌为一种严重威胁人们健康的恶性肿瘤.甲胎蛋白(AFP)mRNA在监测原发性肝癌的肝外转移以及术后复发方面是一个很好的标志物,也可用于肝癌治疗效果的评价.通常AFP mRNA的检测方法为逆转录巢式聚合酶链反应(RT-PCR)法进行定性检测,或利用凝胶电泳扫描的方法进行半定量检测.近来随着实时荧光PCR技术的发展使得准确定量检测AFP mRNA成为可能.; 彭建明李金明徐克前王忠芳王露楠邓巍; 关键词：甲胎蛋白 MRNA 病毒样颗粒细菌噬菌体原发性肝癌

内含人前列腺特异性抗原 mRNA 的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：1: 2006年; 目的构建原核表达系统,表达内含人前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)mRNA 部分序列的病毒样颗粒,该病毒样颗粒因噬菌体蛋白包被重组 RNA 而使其包裹的RNA 具有耐核糖核酸酶(RNase)的特性。方法采用聚合酶链反应扩增人前列腺特异性抗原cDNA 的部分保守区域,进行 TA 克隆后用限制性内切酶 Hind Ⅲ酶切获得所需要的目的片段,与用Hind Ⅲ酶切的表达载体 pNCCL1相连接.构建一新的表达载体 pNCCL1-PSA,再转化 E.Coli BL21-DE3,用 IPTG 诱导表达噬菌体 MS2包膜蛋白,包膜蛋白可进行自我组装成病毒样颗粒并将 PSAmRNA 部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果成功构建得到了新的表达载体 pNCCL1-PSA,经原核表达得到耐 RNase 的内含 PSA mRNA 部分 RNA 序列的病毒样颗粒。结论本研究得到的表达载体 pNCCL1-PSA 及原核表达系统.可以作为以后构建和制备耐 RNase 的 PSA mRNA 标准品和质控品的的平台,为实验室 PSA mRNA 的检测提供新的标准品及质控品。; 王露楠吴健民彭建明李金明王忠芳邓巍; 关键词：前列腺特异性抗原病毒粒子噬菌体

含风疹病毒部分核酸序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：7: 2005年; 目的　构建原核表达系统,表达内含风疹病毒部分核酸序列的由噬菌体包膜蛋白构成的病毒样颗粒,并包被重组RNA,使其具耐核糖核酸酶 (RNase)的特性。方法　用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)扩增风疹减毒活疫苗中风疹病毒糖蛋白E1的部分保守区域,进行TA克隆后,用限制性内切酶HindⅢ酶切,获得所需要的目的片段,并与用HindⅢ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1 Ru。再转化E ColiBL21 DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白后,再自我组装成病毒样颗粒,并将风疹病毒部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果　成功构建了新的表达载体pNCCL1 Ru,其原核表达产物病毒样颗粒中所包裹的风疹病毒RNA序列与风疹BRDⅡ株同源性高达98%,所包裹的RNA具有耐RNase消化的特性以及良好的稳定性。结论　我们构建的表达载体pNCCL1 Ru及原核表达系统,可作为构建和制备耐RNase的风疹病毒核酸标准品和质控品的平台,可为实验室进行风疹病毒核酸的检测提供稳定的无传染性的标准品和质控品。; 彭建明李金明徐克前王忠芳王露楠邓巍; 关键词：风疹病毒病毒样颗粒包膜蛋白核糖核酸酶核酸序列 IPTG

定量PCR测定数据处理数学模型研究进展被引量：6: 2005年; 定量PCR的临床应用越来越广,采用不同的数学模型来处理所得到的数据,对于结果的准确性有着不同的影响。现主要概括采用外标法及内标法进行定量PCR时的数据处理模式,并简要描述最新动力学方法。; 彭建明李金明; 关键词：定量PCR 数据处理数学模型内标

内含RNA病毒核酸的病毒样颗粒及其制备方法与应用: 本发明属于病毒基因工程领域，具体是一种内含RNA病毒核酸的病毒样颗粒及其制备方法与应用。该病毒样颗粒耐RNase，含有外壳蛋白以及包含在内的重组基因序列：MS<Sub>2</Sub>噬菌体的部分序列、RNA病毒核酸序列；...; 李金明王忠芳王露楠彭建明邓巍; 文献传递

T载体克隆在病毒样颗粒表达载体构建中的应用被引量：13: 2004年; 目的提高带某些限制酶切位点聚合酶链反应(PCR)扩增产物克隆入表达载体的效率。方法将带HindⅢ酶切位点的PCR扩增产物与T载体连接,转化BL21DE3EColi,提取质粒后,用HindⅢ酶切,电泳分离并提取纯化的目的片段。然后,与经过相同的限制性酶酶切的表达载体pNCCL1连接。结果经T载体克隆酶切构建的内含严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核酸的病毒样颗粒表达载体,方法简单快速,每次均可获得成功。而采用直接酶切扩增产物的构建方法,未获得成功构建的表达载体。结论T载体克隆可用于对直接酶切效果不好(如HindⅢ)的PCR扩增片段的表达载体的连接构建,方法简便高效。; 李金明王忠芳王露楠彭建明邓巍; 关键词：病毒样颗粒冠状病毒

基于日常检测结果的核酸扩增检测假阳性统计室内质量控制方法被引量：5: 2006年; 目的建立一种利用核酸扩增检验实验室日常检测数据进行定性测定假阳性监测的实验室室内质量控制方法。方法以实验室日常不少于20次检测的阳性率比值为基础,计算阳性率比值的均值(x)和标准差(s),绘制质控图,以1+2S为“告警”规则,1+3S和3+2S为失控规则。结果对实验室212次HBVDNA聚合酶链反应(PCR)实测数据分析,x和s分别为0.527和0.078,与前20次测定的x(0.532)和s(0.09)相近。212次测定中,出现5次超出x±2s,按照所定的质控规则有两次失控。符合统计上的正态分布。结论为核酸扩增常规检测提供了一种具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。; 李金明林尊慧王露楠靳海英彭建明王忠芳邓巍; 关键词：核酸扩增技术假阳性反应

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彭建明