张玉祥
- 作品数：64 被引量：100H指数：5
- 供职机构：首都医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学历史地理更多>>
- Notch3对促进胰腺星形细胞活化的基因表达及信号通路的影响被引量：1
- 2021年
- 目的:分离培养小鼠胰腺星形细胞(PSCs),检测Notch3对促进PSCs活化的基因表达及信号通路的影响。方法:对小鼠PSCs进行分离培养及传代。采用免疫荧光染色检测活化的小鼠PSCs中α-SMA,fibronectin及collagen I的表达;细胞分组为空白对照组(MOCK组),阴性对照组(转染Notch3 siRNA negative control,NC组),Notch3 siRNA组(转染Notch3 siRNA,N3 siRNA组)及Notch3 siRNA-1组(转染Notch3 siRNA-1,N3 siRNA-1组),提取各组总RNA,测定RNA浓度及纯度后,送至安诺优达基因科技(北京)有限公司进行转录组测序。结果:免疫荧光结果显示,在活化的PSCs中α-SMA,fibronectin及collagen I都有明显的表达。测序结果分析表明,与NC组相比较,在N3 siRNA组与N3 siRNA-1组,α-SMA基因,collagen I基因,fibronectin基因及CTGF基因均表达下调,与胶原蛋白代谢过程相关的基因表达上调,正向调节胶原生物合成的基因表达下调,而负向调节胶原生物合成的基因表达上调,PCNA基因表达下调;在N3siRNA组与N3siRNA-1组,调节细胞聚集的基因表达下调;在细胞组分部分,细胞外基质的基因表达下调;抑制PSCs中Notch3的表达可对细胞粘附分子信号通路,MAPK信号通路及TGF-β信号通路的组成成员的基因表达产生影响。结论:抑制Notch3的表达可抑制PSCs的活化,降低细胞增殖能力,降低迁移聚集能力及ECM合成的能力;抑制Notch3的表达可对其他的信号如细胞粘附分子信号通路,MAPK信号通路及TGF-β信号通路产生影响。
- 宋海岩周志新张玉祥
- 关键词：胰腺星形细胞NOTCH3基因表达信号通路
- 稀有密码子影响人RNaseH-Apaf1融合蛋白原核表达被引量：2
- 2015年
- 通过限制性内切酶克隆法构建两个pET-28a-TAT-RNaseH-Apaf1重组质粒,其中一个质粒经过稀有密码子的优化。将两个重组质粒分别转化原核表达宿主菌BL21(DE3)和Transetta(DE3),通过SDS-PAGE观察相应融合蛋白诱导表达的情况,并用His标签抗体和Apaf1抗体通过Western Blotting鉴定诱导蛋白。菌液PCR和测序证明经稀有密码子优化和未经稀有密码子优化的人源RNaseH-Apaf1序列成功重组到pET-28a-TAT载体中;经稀有密码子优化的重组质粒成功地在大肠杆菌宿主菌中表达RNaseH-Apaf1融合蛋白,并用Western Blotting检测到该融合蛋白。结果表明,稀有密码子可影响人RNaseH-Apaf1融合蛋白的原核表达。
- 兰泓孔劭凡李慎涛张玉祥
- 关键词：稀有密码子原核表达
- 利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆长片段基因的研究
- 2015年
- 目的采用不依赖连接反应的克隆法,利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆Notch2长片段基因。方法将难以扩增的Notch2 c DNA的编码序列(7416 bp)人为分成3段,引物设计时对此3个片段和载体骨架的引物进行碱基硫代磷酸化修饰,用这些引物扩增Notch2的3个片段和载体骨架。然后用T7核酸外切酶分别处理PCR产物,产生4个具有3'互补突出末端的片段,并将此4个末端突出的片段退火复性,完成Notch2基因克隆。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示Notch2 3个片段和载体骨架的PCR产物大小与预期大小相符,经退火复性获得的克隆通过PCR、酶切和测序进行克隆鉴定,确定Notch2编码序列已经插入到pc DNA3.0-3*Flag载体中。结论利用T7核酸外切酶和引物的碱基磷酸化修饰进行的不依赖连接反应的克隆方法能够用于长片段基因的克隆。
- 兰泓张玉祥
- Notch家族蛋白质Notch1-4和CSL在胰腺癌细胞基因组结合位点的比较分析
- Notch家族是一类高度保守的蛋白,它在器官的发育、细胞的增殖、分化和凋亡都起到至关重要的作用。在哺乳动物中,Notch家族包含有4种受体(Notch1-4),Notch蛋白没有DNA结合域,需要经过CSL等转录因子发挥...
- 刘浩陈佳周萍李炳秋褚巧云兰泓张玉祥
- 关键词：转录因子CSL转录起始位点
- 文献传递
- c-Src结构域真核表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 通过聚合酶链式反应(PCR),将c-Src的三个结构域SH3、SH2和KD分别定向克隆至C端带有HA蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中.经HindIII和XbaI双酶切分析和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞48 h,蛋白免疫印迹法可以检测到细胞内SH3、SH2和KD的表达,证明重组表达质粒pcDNA3-SH2、pcDNA3-SH3和pcDNA3-KD构建成功,为进一步研究Src激酶在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.
- 张瑶楠石冲马永超王泽生张玉祥
- 关键词：SRCSH2KD真核表达载体
- 宫颈上皮内瘤变与正常宫颈组织差异表达蛋白分析被引量：2
- 2012年
- 目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科收治的正常子宫颈组织因子宫肌瘤手术行全子宫切除术患者9例为对照组、CIN组织23例(其中CINⅠ7例、CINⅡ8例、CINⅢ8例)。应用二维荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2-DDIGE)及DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分析差异蛋白质点,数据库搜索鉴定差异表达最明显的S100蛋白家族A9(S100 calcium-binding protein A9,S100A9),真核延长因子1α1(eukaryoticelongation factor 1-alpha-1,eEF1A1)及丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)3种蛋白质;应用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)(其中正常宫颈组织10例、CINⅠ10例、CINⅡ10例、CINⅢ10例)及蛋白印记法(Western blotting)(其中正常宫颈组织12例,CINⅠ～Ⅱ12例,CINⅢ12例)进一步验证上述3种蛋白在CIN组织和正常宫颈组织的表达差异。结果获得CIN组织与正常宫颈组织2-D DIGE图,成功鉴定25个蛋白;免疫组化及蛋白印迹验证结果提示:S100A9蛋白表达于细胞质中,在CIN中表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P=0.010);eEF1A1蛋白表达于细胞质中、PKM2蛋白表达于细胞核中,2者在CIN中表达水平均低于正常组,差异有统计学意义(P分别为0.352,0.000)。结论在正常宫颈组织与CIN组织之间存在差异蛋白质表达,S100A9蛋白可能成为辅助诊断CIN的相关标志物,PKM2蛋白可能成为抑制CIN发生的蛋白质,并可根据2种差异蛋白表达预测CIN的发生发展。
- 何玥吴玉梅赵群王晓丽陈硕钱小红张玉祥
- 关键词：蛋白质组学宫颈上皮内瘤变
- 一种高效扩增小片段DNA方法的建立
- 2011年
- 目的建立一种高效扩增小片段DNA的方法。方法 本方法利用单链DNA连接酶(single strand DNA ligase,ssDNA ligase)可以连接单链DNA的性质将小片段DNA自连成环,随后利用phi29DNA聚合酶进行恒温的滚环复制,将扩增产物进行酶切,得到了扩增后的小片段DNA。结果 单链DNA连接酶可以有效的将30bp的小片段DNA自连成环,phi29DNA聚合酶可以扩增出大于10kb的DNA片段,扩增产物经酶切后又可进行第二轮扩增,并且证明了其成环方式为自成环。结论 通过单链成环后滚环复制的这种方法可以有效的将小片段DNA进行扩增,解决了PCR无法扩增小片段DNA的问题,并有着广阔的应用前景。
- 李岩李珊珊张玉祥
- 程序性细胞死亡因子4在喉鳞状细胞癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨喉鳞状细胞癌中程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系及其临床意义。方法:采用免疫组织化学技术检测60例喉鳞状细胞癌组织及21例正常喉黏膜上皮组织中PDCD4和Ki-67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,以细胞增殖指数(PI)和细胞凋亡指数(AI)表示增殖与凋亡。结果:喉鳞状细胞癌组织中PDCD4蛋白阳性表达率低于癌旁正常喉黏膜组织(P<0.01),喉鳞状细胞癌组织中PDCD4蛋白阳性表达和喉鳞状细胞癌临床分型(肿瘤部位)、TNM分期无关,与病理分级、淋巴结转移有关(P<0.05);喉鳞状细胞癌组织细胞PI明显高于癌旁正常喉黏膜组织(P<0.01),细胞PI与喉鳞状细胞癌临床分型(肿瘤部位)、病理分级、淋巴结转移无关,与TNM分期有关(P<0.05);喉鳞状细胞癌组织细胞AI明显高于癌旁正常喉黏膜组织(P<0.01),细胞AI与喉鳞状细胞癌临床分型(肿瘤部位)、TNM分期、淋巴结转移无关,与病理分级有关(P<0.01);喉鳞状细胞癌PDCD4阳性表达的细胞PI低于阴性组(P<0.05),细胞AI高于阴性组(P<0.05)。结论:PDCD4在喉鳞状细胞癌中低表达,可能与喉鳞状细胞癌细胞的增殖和凋亡均有一定的关联。
- 王建亭张玉祥
- 关键词：喉肿瘤鳞状细胞癌凋亡
- 程序性细胞死亡因子4蛋白表达与喉鳞状细胞癌相关性研究被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)与喉鳞状细胞癌发生和发展的关系。方法:免疫组织化学方法和Western印迹法检测喉鳞状细胞癌组织及癌旁正常喉黏膜组织中PDCD4蛋白表达。结果:免疫组织化学染色显示喉鳞状细胞癌组织中PDCD4蛋白阳性表达率低于癌旁正常喉黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01)。喉鳞状细胞癌组织中PDCD4蛋白阳性表达和患者的年龄、性别、临床分型(肿瘤部位)、TNM分期无相关性,与病理分级、淋巴结转移有显著相关性。免疫印迹结果亦显示喉鳞状细胞癌组织中PDCD4蛋白表达低于癌旁正常喉黏膜组织(P<0.01)。结论:PDCD4蛋白低表达与喉鳞状细胞癌的发生和发展有关,PDCD4可能成为预测喉鳞状细胞癌转移和预后的生物学指标。
- 王建亭张玉祥
- 关键词：喉肿瘤程序性细胞死亡因子4免疫组织化学
- 一种基于抗体DNA标记和高通量测序技术的蛋白质或其它分子的检测方法
- 一种基于抗体DNA标记和高通量测序技术的蛋白质或其它分子的检测方法。把针对待测抗原的抗体用特定序列的DNA进行标记，免疫反应后用高通量手段测定DNA标签的个数，对实验结果进行数据分析，可以得出待测抗原的浓度。对样品进行梯...
- 张玉祥王雅梅
- 文献传递
