张慧娟
- 作品数：25 被引量：73H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项海南省自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 粗提抗原检测炭疽血清抗体ELISA方法的初步评价被引量：1
- 2008年
- 目的对使用粗提抗原检测炭疽血清抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行初步评价。方法用间接ELISA方法检测人群血清（健康人血清42份、炭疽病人血清42份）特异性抗体，用阳性血清对照绘制标准曲线．按照标准曲线计算出每份血清标本的抗体相对含量，所得结果与重组致死因子（rLF）方法的检测结果进行比较。结果病人组血清抗体相对含量中位数为1．19，健康人组血清抗体相对含量中位数为0．24，两组比较差异有统计学意义（uc=7．643，P〈0．05）。粗提抗原检测与rLF检测结果并不完全对应，但两种方法显示出较高的一致性。结论粗提抗原检测炭疽血清抗体的方法能区分大部分的病人和健康人，有一定的应用潜力．可用在炭疽疾病监测工作中。
- 魏建春张慧娟马凤琴张恩民俞东征
- 关键词：芽孢杆菌炭疽酶联免疫吸附测定抗体
- 蜡样芽胞杆菌脉冲场凝胶电泳影响因素的研究被引量：3
- 2016年
- 目的通过比较蜡样芽胞杆菌(以下简称蜡样杆菌)脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术方法的影响因素,优化蜡样杆菌PFGE分型方法。方法在细菌收集、细胞裂解、胶块制备和电泳参数等环节设立对照,选取3株蜡样杆菌比较不同实验方案的电泳图谱结果。细菌收集设立LB固体培养基和液体培养基集菌法;细胞裂解设立灌制胶块前溶菌酶孵育组与未孵育组,设立单独溶菌酶裂解组和溶菌酶与溶葡萄球菌酶联合裂解组;细菌的胶块内裂解设立溶菌酶不同浓度和不同作用时间(2、4和16h)实验组;选取22株蜡样杆菌对3组电泳参数进行分析评价。结果 LB固体培养基集菌法与液体集菌法相比,获得了同样清晰或更清晰的条带。灌制胶块前溶菌酶与菌悬液进行一定时间的孵育可明显改善条带的清晰度。溶菌酶对胶块内细菌的裂解,4h为最佳裂解时间。溶葡萄球菌酶与溶菌酶联合使用未见对细菌裂解有改善作用。3组电泳参数(EP)的图谱差异有统计学意义(P<0.05),EP-a的相似性系数最小,为最佳电泳参数。结论试验确定了最佳蜡样杆菌PFGE实验方案,简化和优化了目前已有的蜡样杆菌PFGE实验方法,可应用于蜡样杆菌引起的暴发疫情分析及食源性病原菌的实验室分子分型研究。
- 张慧娟潘琢张恩民梁旭东李伟魏建春
- 关键词：蜡样芽胞杆菌脉冲场凝胶电泳影响因素
- 利用插入序列IS285对云南玉龙鼠疫耶尔森菌进行初步分析
- 2008年
- 目的了解新发现的玉龙鼠疫菌的遗传特征,分析其与中国各型鼠疫菌的亲缘关系。方法根据鼠疫菌CO92株基因组DNA中的6个IS285位点设计引物,利用聚合酶链反应(PCR)对玉龙鼠疫菌及我国其他各型鼠疫菌进行分析,通过SPSS软件对结果进行聚类。结果与CO92相比,我国鼠疫菌的某些IS285位点存在变异。5株玉龙鼠疫菌中有4株结果一致,另1株的一个位点发生变异。通过6个位点的PCR,可以将我国鼠疫菌聚为8类。所研究的5株玉龙鼠疫菌分别属于2种聚类,其中4株与滇西纵谷型、滇闽居民型及大部分灰旱獭菌株、全部喜马拉雅旱獭菌株聚为一类。结论对玉龙鼠疫菌的遗传特征获得初步了解,提示玉龙菌株在我国鼠疫菌传播演化过程中可能具有较重要地位。
- 朱晓宇海荣宋志忠魏建春夏连续郭英张慧娟俞东征
- 关键词：鼠疫耶尔森菌聚类
- 一次不明原因发热疫情中病人血清的Q热抗体检测被引量：8
- 2008年
- 目的:从不明原因发热病人血清中筛查Q热抗体。方法:用间接免疫荧光法对一次不明原因发热疫情中的9位病人共15份血清进行Q热IgG检测。结果:9例患者的血清中共检出6例Q热抗体阳性,阳性率达66.7%。结论:Q热在过去的疫区可能仍有较频繁的发生,各地相关部门应加强对Q热的调查和应急储备。
- 朱晓宇魏建春张慧娟俞东征
- 关键词：不明原因发热Q热
- 宿主DNA对埃立克体病PCR诊断的抑制作用研究
- 2008年
- 目的：优化埃立克体病的PCR诊断方法。方法：构建含有查菲埃立克体16S rRNA基因片段的重组载体。比较巢式PCR和普通一步法PCR的灵敏度差异。用RAW 264.7细胞DNA模拟实验室诊断时的宿主细胞DNA，评估宿主细胞DNA对巢式PCR效率的影响。添加BSA作为优化剂，探讨BSA是否能降低宿主DNA的干扰。结果：巢式PCR可以扩增出特异性产物的最低模板量为10^3拷贝，一步法PCR是10^5拷贝。50-100 ng的宿主细胞DNA能够降低巢式PCR的效率。BSA可以降低宿主细胞DNA对PCR的抑制作用。结论：巢式PCR的灵敏度明显高于一步法PCR；BSA可以降低宿主细胞DNA干扰，提高PCR的效率。建议埃立克体病的诊断应尽量选择巢式PCR，必要时可加入适量的BSA以提高灵敏度。
- 朱晓宇张慧娟张建华俞东征
- 关键词：埃立克体病PCR诊断BSA
- 海口市5类食品中蜡样芽胞杆菌药敏和毒力基因检测及分子分型研究被引量：6
- 2020年
- 目的了解海口市5类食品中蜡样芽胞杆菌污染状况、毒力基因携带类型、药物敏感特点和分子分型特征。方法参照GB 4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》对海南粉、海南粉配料、奶粉类、快餐类和糕点类5类食品进行分离鉴定蜡样芽胞杆菌,并应用普通聚合酶链式反应(PCR)方法进行菌群特异性基因groEL和10种毒力基因检测;采用微量肉汤稀释(MIC)法检测菌株对抗生素的敏感性;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对菌株进行分子分型。结果 626份不同食品样品中有197份检出蜡样芽胞杆菌,检出率为31.5%,其中海南粉检出率最高,为63.1%(140/222)。所有菌株均至少携带1种毒力基因,entFM基因携带率最高,为99.0%(195/197),ces基因携带率最低,为2.5%(5/197);同时携带nheA、nheB和nheC基因的菌株占88.8%(175/197),同时携带hblA、hblC和hblD基因的菌株占13.7%(27/197)。所有菌株对庆大霉素和氯霉素的敏感率均为100.0%(197/197),对万古霉素和环丙沙星敏感率分别为99.5%(196/197)和92.9%(183/197),对青霉素和复方新诺明的耐药率分别为100.0%(197/197)和90.9%(179/197)。PFGE分型结果显示,所有菌株可分为30个簇,117种带型。结论海口市5类食品均存在蜡样芽胞杆菌污染,其中海南粉污染较重,对食品安全构成潜在的威胁;可依据菌株的毒力基因、分子分型和抗生素敏感性特点进行针对性防控和重点监管。
- 王艳燕张慧娟冯桃陈聪庞燕
- 关键词：蜡样芽胞杆菌毒力基因药物敏感脉冲场凝胶电泳分子分型
- 三种方法转染绿色荧光蛋白质粒的效果评价被引量：5
- 2010年
- 目的比较常见的真核细胞转染技术,评价采用绿色荧光蛋白为报告基因来观察细胞转染效率高低的方法。方法分别采用磷酸钙法、电穿孔法和脂质体法将pEGFP-C1质粒转染COS-7细胞,对每种方法的转染效率及对细胞的毒性进行评价。结果脂质体法的转染率为67%,电穿孔的转染率为43%,磷酸钙法的转染率为28%。脂质体法转染对细胞的毒性最小。结论采用绿色荧光蛋白为报告基因的真核细胞转染技术中,脂质体法是效率高、安全性大的方法。
- 孙丽娜魏建春张慧娟张恩民俞东征海荣
- 关键词：绿色荧光蛋白转染脂质体
- 中国蜡样芽胞杆菌脉冲场凝胶电泳标准化技术的建立与应用被引量：8
- 2015年
- 目的本研究旨在选择不同的内切酶和电泳条件对蜡样芽胞杆菌(蜡样杆菌)脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行评价,建立中国蜡样杆菌标准PFGE方法。方法蜡样ATCC国际标准菌株及分离自我国不同地区和来源的蜡样杆菌,制备胶块用溶菌酶和蛋白酶K分别裂解后,选用不同的内切酶对胶块内DNA进行酶切,比较PFGE电泳结果的分离度,评价获得最佳操作方案,选取51株蜡样杆菌菌株进行PFGE实验,对此实验方法进行评价分析。结果确立的蜡样杆菌PFGE分型方法的标准操作程序,可以较好地对蜡样杆菌进行分子分型研究,初步描述了51株蜡样杆菌菌株PFGE型别特征。结论实验确定的蜡样杆菌PFGE方法,可以为蜡样杆菌引起的食源性疾病及医院感染的溯源控制提供技术手段。
- 张慧娟潘琢魏建春张恩民梁旭东杜小莉崔志刚李伟
- 关键词：蜡样芽胞杆菌脉冲场凝胶电泳食物中毒
- 蜡样芽胞杆菌群分类学研究进展
- 2024年
- 蜡样芽胞杆菌群由蜡样芽胞杆菌及其近缘菌组成,该群内菌种由于在表型特征和基因特征上高度相似,使该群菌分类和鉴定复杂且难以统一。随着分子生物学和基因组学的发展,该群分类学研究发展迅速,目前已形成了表型、基因组以及将表型和基因组特征相结合的基因种/亚种/生物变种方法等几种分类框架。本研究就近年来蜡样芽胞杆菌群分类学研究进展进行综述。
- 张慧娟李伟魏建春
- 关键词：分类学
- 炭疽芽胞杆菌致死因子在大肠埃希菌中的表达与纯化
- 2012年
- 目的在大肠埃希菌中表达炭疽致死因子,获得纯化蛋白,用于炭疽快速诊断方法以及炭疽致病机制研究。方法 PCR方法扩增炭疽致死因子,构建表达质粒pETLF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,通过Ni离子金属螯合树脂进行纯化,Western blot(WB)试验检查免疫原性,MTT方法检查生物学活性。结果获得重组炭疽致死因子,WB结果显示重组蛋白具有良好的免疫反应性,MTT方法进行的生物学活性测定表明致死因子与保护性抗原联合,细胞毒性与文献报道相比有明显降低。结论所获得的重组炭疽致死因子,对于发展炭疽快速诊断方法,以及研究炭疽毒素的作用机制具有一定的促进作用。
- 魏建春张恩民张慧娟张建华
- 关键词：炭疽芽胞杆菌克隆表达
