张志珍
- 作品数：16 被引量：96H指数：7
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 流感病毒ns1基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量：3
- 2004年
- 为了解H5N1亚型流感病毒株的ns1基因特性及其规模制备NS1蛋白,首先将病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增流感病毒全长ns基因。测序显示H5N1亚型流感病毒NS1cDNA全长678bp,编码225个氨基酸。BLAST分析表明,Qa/ST/852/01(H5N1)病毒株ns1基因与近年来从华南地区分离的禽H5N1毒株的ns1基因有很高的同源性。之后采用PCR方法扩增ns1基因的cDNA片段,将其克隆到pGEX-4T-3载体中,与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)基因融合,构建重组质粒pGEX-4T-3/NS1cDNA,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达。SDS-PAGE和凝胶扫描分析,GST-NS1融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,并且以可溶形式存在,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的28.5%,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达96%以上。经免疫印记证实重组融合蛋白可以被GST特异性抗体所识别。该表达载体的构建为获得大量NS1蛋白进行功能研究及抗体制备提供了基础。
- 张志珍洪文珊李康生
- 关键词：流感病毒
- 红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定被引量：25
- 2003年
- 目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析。结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型。RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大。结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据。
- 郭美丽姜伟张志珍张戈毛积芳殷明苏中武
- 关键词：随机扩增多态性DNA分子鉴定
- 华南流感病毒NS1基因特性研究被引量：12
- 2004年
- 为了解H9N2和H5N1亚型流行性感冒病毒株的NS1基因特性 ,采用RT PCR方法测定了 12株 2 0 0 0～2 0 0 3年间在华南地区分离的禽流感病毒株的NS1基因核苷酸序列 .测序显示 6株H9N2亚型流感病毒NS1基因开放阅读框 (ORF)长 6 5 4bp ,编码 2 17个氨基酸 .6株H5N1亚型毒株NS1基因ORF长 6 78bp ,编码 2 2 5个氨基酸 .核苷酸和氨基酸同源性分析表明 ,同一亚型分离株之间有很高的同源性 ,而不同亚型的H9N2和H5N1毒株之间存在较大差异 .BLAST分析表明 ,H5N1和H9N2亚型流感病毒分离株的NS1基因分别与近两年从香港特区和华南地区的鸭中分离的毒株A/Duck/HongKong/ 6 4 6 3/ 0 1(H5N1)、A/Duck/Shantou/ 2 14 3/ 0 1(H9N2 )有很高的亲缘关系 .该研究结果为进一步进行NS1功能研究奠定了基础 .
- 张志珍段炼李康生
- 关键词：流行性感冒病毒生物信息学
- 高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1被引量：9
- 2002年
- 目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 E.coli BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。 结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P-
- 张志珍毛积芳杨生生窦鸿
- 关键词：基因表达融合蛋白质类大肠杆菌
- 胰高血糖素样肽-1及其类似物与Ⅱ型糖尿病治疗被引量：4
- 2005年
- 胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是人体内强有力的促胰岛素分泌的肽类激素,对Ⅱ型糖尿病有潜在的治疗作用。但是GLP-1在体内很快被二肽酰基肽酶Ⅳ降解,血浆半寿期很短,因而限制了其临床应用。目前人们已开发了多种GLP-1的衍生物,希望能将其用于临床对Ⅱ型糖尿病进行治疗。
- 贾秀丽张志珍
- 关键词：胰高血糖素样肽-1GLP-1类似物糖尿病
- H5N1亚型禽流感病毒ns1基因修饰被引量：3
- 2005年
- 目的:对H5N1亚型禽流感病毒株(A Qa ST85201)的ns1基因进行修饰并构建ns1基因的真核表达载体。方法:用RT PCR方法扩增A Qa ST85201的ns1基因,之后以扩增产物为模板,采用多重PCR技术对ns1基因进行修饰,将缺失的15个核苷酸片段插入ns1基因中,并将其克隆到真核表达载体,构建pcDNA3.1ns1重组质粒。结果:RT PCR产物测序显示,A Qa ST85201ns1基因开放阅读框全长678bp,编码225个氨基酸。构建的重组质粒经酶切鉴定和序列测定与预期相一致。结论:成功将缺失的15个核苷酸片段引入A Qa ST85201的ns1基因中,重组质粒的构建为NS1蛋白功能研究奠定了基础。
- 张志珍赵丽纯李康生
- 关键词：禽流感病毒基因修饰NS1基因PCDNA3流感病毒株酶切鉴定
- 人胰高血糖素样肽-1突变体基因的克隆及表达被引量：9
- 2004年
- 目的 :克隆人胰高血糖素样肽 - 1突变体 (2 Gly -hGLP - 1)基因 ,高效表达GST - 2 Gly -hGLP - 1融合蛋白。方法 :在获得重组hGLP - 1基因工程菌基础上 ,利用定点突变技术改造其第 2位丙氨酸为甘氨酸 ,经酶切克隆于pGEM - 7z(+)载体中 ,构建pGEM - 7z(+) / 2 Gly -hGLP - 1克隆载体 ,双酶切鉴定后把2 Gly-hGLP - 1基因定向插入pGEX - 4T - 3多克隆位点 ,构建pGEX- 4T - 3/ 2 Gly-hGLP - 1融合表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)并进行诱导表达。结果 :经双酶切鉴定和测序分析 ,证明2 Gly-hGLP - 1基因已克隆到pGEX - 4T - 3载体中。SDS -PAGE和凝胶扫描分析 ,融合蛋白以可溶形式存在 ,其表达量占菌体总蛋白的 2 9.7%。表达产物经亲和层析纯化后纯度在 95 %以上 ,免疫印迹证实 ,该融合蛋白可被特异性hGLP - 1(7- 37)抗体所识别。结论 :为产业化规模制备hGLP -
- 张志珍刘智慧
- 关键词：突变体基因克隆融合蛋白SDS-PAGE纯化
- 重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性被引量：15
- 2002年
- 为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)获得表达菌株 .高密度发酵培养的菌体超声破碎后 ,裂解液用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST融合蛋白 .经CNBr裂解、QAE SepharoseFF柱层析和脱盐 ,得到纯度大于 90 %的rhGLP 1,质谱测定分子量结果与理论值一致 .生物学活性分析表明 ,rhGLP 1具有明显的降血糖活性 .
- 张志珍杨生生毛积芳
- 关键词：融合蛋白纯化生物学活性
- 核转录因子κB RNA适体重组腺病毒载体的构建
- 2003年
- 目的 :构建核转录因子 κB(NF- κB) RNA适体 (aptamer)重组腺病毒载体 p Adeasy- aptamer,制备重组腺病毒 Ad- ap-tam er并测定其活性。方法 :采用亚磷酸二酯法合成 aptamer c DNA的 6个寡核苷酸片段并拼接完整 ,克隆至 p GEM- 7Z载体中 ,经酶切鉴定和测序后把 aptam er c DNA定向插入穿梭质粒 p Shuttle- CMV的多克隆位点上 ,再将重组质粒 p Shuttle- CMV-aptamer与腺病毒载体 p Adeasy在大肠杆菌 BJ5 183中同源重组产生重组腺病毒载体 p Adeasy- aptam er。用脂质体转染p Adeasy- aptam er至 HEK2 93细胞 ,产生有感染能力的重组腺病毒 Ad- aptam er,RT- PCR检测重组腺病毒在感染细胞中的表达 ,并测定其对体外抑制炎症细胞系释放炎症介质 IL- 1β和 IL- 6的影响。 结果 :感染重组腺病毒的细胞具有 aptamer c DNA的表达 ,重组腺病毒能抑制感染细胞炎症介质的释放 ,具有预期的生物学活性。结论 :产生具有生物学活性的重组腺病毒 Ad-aptamer,为下一步基因治疗因 NF-
- 游兴姬杨生生蔡在龙张志珍焦炳华毛积芳
- 关键词：核转录因子ΚB重组腺病毒载体基因治疗
- 重组人胰高血糖素样肽-1对实验性糖尿病大鼠血糖的影响被引量：6
- 2004年
- 目的观察重组人胰高血糖素样肽 1[rhGLP 1(7 36 )NH2 和rhGLP 1(7 37) ]对实验性糖尿病大鼠模型血糖和血浆胰岛素水平的影响。方法正常SD大鼠按 3.2 4g/kg腹腔注射 5 0 %葡萄糖 ,诱发暂时性高血糖动物模型。腹腔注射不同剂量 (2 0、4 0、80 μg/kg)rhGLP 1(7 36 )NH2 和rhGLP 1(7 37) ,间隔取血测定血糖与血浆胰岛素水平。正常SD大鼠按 6 0mg/kg腹腔注射链脲佐菌素 ,建立实验性 1型糖尿病大鼠模型。静脉输注rhGLP 1(7 36 )NH2 [4.0ng/(kg·min) ]12 0min并观察血糖变化。结果腹腔注射 4 0、80 μg/kgrhGLP 1(7 36 )NH2 和rhGLP 1(7 37)处理组大鼠的血糖、血浆胰岛素水平与对照组之间的差别具有非常显著性意义 (P <0 .0 0 1) ,且呈现一定的量效关系。二者之间促胰岛素分泌和降血糖活性差异无显著性。静脉输注rhGLP 1(7 36 )NH2 6 0min后 ,血糖水平 (17.0 4± 1.31)mmol/L(P <0 .0 5 ) ,12 0min后血糖水平 (11.98± 1.0 5 )mmol/L(P <0 .0 0 1)。结论rhGLP 1能显著改善实验性糖尿病大鼠的血糖水平 ,这与其促胰岛素分泌活性有关。
- 张志珍毛积芳杨生生
- 关键词：糖尿病模型血糖血浆胰岛素
