窦鸿 作品数:16 被引量:34 H指数:3 供职机构: 第二军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 更多>>
重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化 被引量:2 1998年 重组人降钙素在大肠杆菌的表达和纯化王官将毛积芳窦鸿蔡在龙邹鲁峰人降钙素(Humancalcitonin,hCT)是甲状腺滤泡旁细胞分泌的多肽激素,在体内参与钙、磷代谢的调节。临床上降钙素用于治疗各种疾病,如高血钙症、骨质疏松症和骨瘤病等,具有副作用小... 王官将 毛积芳 窦鸿 蔡在龙 邹鲁峰关键词:大肠杆菌 基因表达 纯化 高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1 被引量:8 2002年 目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 E.coli BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。 结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P- 张志珍 毛积芳 杨生生 窦鸿关键词:基因表达 融合蛋白质类 大肠杆菌 人降钙素cDNA的化学合成与克隆 被引量:3 1996年 目的:克隆人降钙素cDNA。方法和结果:应用ABI391DNA合成仪,将人降钙素cDNA分成6个片段合成。退火、磷酸化、连接,最终将人降钙素cDNA克隆于载体pGEM7z(+),经DNA双链测序,证明克隆到的人降钙素cDNA序列与设计的完全一致。结论:本研究为寡肽cDNA(或基因)的化学合成与克隆提供了简捷、可靠的方法;为人的降钙素cDNA的高效表达奠定了基础。 蔡在龙 窦鸿 毛积芳 邹鲁峰 伍军 王官将关键词:降钙素 CDNA 化学合成 克隆 基因重组降钙素或降钙素类似物的制备工艺 本发明涉及基因重组降钙素或降钙素类似物的制备工艺。先化学法合成降钙素或降钙素类似物前体基因片段,再拼接成全长基因,其C末端是丙氨酸或亮氨酸或其它可以被羧基肽酶-Y水解的氨基酸密码,以便用羧基肽酶-Y对其表达产物进行C末端... 毛积芳 窦鸿文献传递 遗传性椭圆形红细胞增多症红细胞膜蛋白和糖的变化 1994年 对1例遗传性椭圆形红细胞增多症(HE)患者的红细胞膜进行了膜蛋白电泳、糖基和酶活力分析。发现:(1)红细胞膜蛋白SDS-PAG电泳,在带4.5区(带4.2~4.9间)有两条带染色强度异常及在带8以下出现一分子量约为21000的新蛋白带;(2)红细胞膜唾液酸和中性糖含量均显著减少。表胚凝集素-生物素-亲合素-胶体金标记红细胞膜在透射电镜下观察到椭圆形红细胞膜表面胶金颗粒结合稀少;(3)红细胞膜Na+-K+-ATP酶及Ca(2+)-Mg(2+)-ATP酶活力均降低。结果提示:HE的红细胞膜蛋白异常和糖基(特别是唾液酸)减少可能与红细胞的不稳定性、形态异常及寿命缩短有关。 何丽娅 冯伟华 赵麟 窦鸿 魏尧梅关键词:遗传性 红细胞增多症 红细胞膜 蛋白质 大鼠烫伤早期肾皮质细胞膜系统结构和功能的研究(肾皮质生物膜系统ATP依赖性酶活力和细胞化学的研究) 窦鸿S—磺酸化鲑鱼降钙素溶液结构的NMR研究 <正>降钙素(CT)是由甲状腺前滤泡细胞合成和储藏的一种单链肽类激素.它的主要作用是通过抑制破骨细胞的活性来减缓骨质的吸收,从而有利于骨的形成。临床上用来治疗高钙血症、骨质疏松症、骨痛症等多种疾病。 王跃丰 吴厚铭 窦鸿 毛积芳文献传递 基因工程制备重组人降钙素类似物 被引量:3 2000年 构建融合表达人降钙素类似物的工程菌 ,然后纯化 GST- h CTa- Leu融合蛋白 ,凝血酶酶切后 ,再经离子交换层析、脱盐 ,获得纯度大于 90 %的 h CTa前体 .对 h CTa前体的 C末端进行修饰 ,得线形 h CTa- NH2 ,再通过复性 ,获得了具有与天然人降钙素活性相当的 h CTa. 窦鸿 毛积芳 李德岩 王官将 蔡在龙 邹鲁峰 李杰 彭兴盛关键词:基因工程 酰胺化反应 一种新型克隆载体的构建 被引量:1 1996年 一种新型克隆载体的构建邹鲁峰,毛积芳,窦鸿,蔡在龙,伍军,王官将基因工程中寡肽基因的表达通常具有重组产物难以纯化和易受工程菌自身消化等障碍,为了克服这些困难,人们采用寡肽基因为单体的多聚基因或融合基因表达的方式,以期获得重组寡肽产物[1.2].近来,... 邹鲁峰 毛积芳 窦鸿 蔡在龙 伍军 王官将关键词:基因表达 克隆载体 人降钙素基因克隆表达和重组产物的纯化 1997年 人降钙素(hCT)在治疗骨质疏松、高血钙和骨肿瘤等方面具有广泛的用途。但是,目前临床使用的制剂,主要依赖国外肽合成方法制备。 本文介绍基因工程技术制备和纯化重组人降钙素的过程。首先用亚磷酸酰胺法将hCTcDNA分成6个寡聚核苷酸片段化学合成,经磷酸化、连接反应,克隆于pGEM7z载体。DNA序列测定证明,hCT DNA结构与预期的一致。 毛积芳 窦鸿 蔡在龙 邹鲁峰 王官将关键词:基因克隆表达 生物化学 DNA序列测定 骨肿瘤 寡聚核苷酸 基因工程技术