- 坏死杆菌溶血素基因筛选与序列分析
- 坏死梭杆菌可造成多种坏死病,溶血素是其主要毒力因子之一。为了研究坏死杆菌溶血素分泌的基因基础。本实验从坏死梭杆菌FN (A)型毒力菌株菌体中提取细菌染色体DNA,以总DNA Hind Ⅲ部分酶切的片段为供体、pUC18为...
- 刘艳环苗利光李庆超王志刚李海涛张广雷
- 关键词：坏死梭杆菌溶血素基因文库
- 牛分支杆菌ESAT-6/Ag85B/Mtb8.4基因与牛IL-2基因融合表达被引量：3
- 2010年
- 本研究拟制备牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因的融合蛋白。从患结核病鹿的肺组织中分离牛分支杆菌并提取基因组DNA,PCR扩增牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;提取牛淋巴细胞,经总RNA提取、RT-PCR得到了IL-2基因片段。经测序鉴定后,将4个目的片段重组,构建原核表达载体,并对表达的融合蛋白进行鉴定。克隆出了牛IL-2,以及牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;构建了原核表达载体pME290-SDCZ,并表达出了融合蛋白;Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗牛分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。制备了牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4融合蛋白,本研究为下一步研制重组牛结核亚单位疫苗奠定了基础。
- 李海涛苗利光刘艳环李庆超张广雷孙金霞
- 关键词：牛分支杆菌IL-2基因MTB8.4ESAT-6AG85B牛结核
- 布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及融合表达被引量：2
- 2010年
- 本研究根据已经发表的布氏杆菌基因序列,选择种间序列极为保守的保护性抗原L7/L12、OMP31基因,依此进行PCR扩增,利用引物上设计好的限制性内切酶酶切位点进行基因重组,构建了PME290-SDLOmp高效表达载体,并转化绿脓杆菌(PAK/2pfs),通过培养得到了表达产物,对表达产物进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果符合预期。本项研究为进一步开展布氏杆菌亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 李海涛苗利光张广雷刘艳环孙金霞王松王文昊
- 关键词：布氏杆菌基因重组表达载体构建融合蛋白
- 重组牛分支杆菌ESAT-6基因的表达与鉴定
- 2009年
- 在前期工作的基础上,构建了pGEM-TE-ESAT6重组载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经诱导表达得到了20kD左右大小的重组蛋白,SDS-PAGE/Western Blot显示该重组蛋白是上清表达。为重组ESAT-6抗原的应用奠定了基础。
- 李海涛刘艳环张广雷李庆超王志刚刘慧洋苗利光
- 关键词：牛分支杆菌
- 布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究
- 本研究根据已经发表的布氏杆菌基因序列，选择种间序列极为保守的保护性抗原L7/L12、OMP31基因，依此进行PCR扩增，利用引物上设计好的限制性内切酶酶切位点进行基因重组，克隆到已经构建好的表达载体上，经过PCR检测，限...
- 李海涛苗利光张广雷刘艳环孙金霞
- 关键词：布氏杆菌基因重组表达载体构建融合蛋白
- 牛病毒性腹泻病毒反转录及3'-末端克隆测序方法研究被引量：2
- 2010年
- 牛病毒性腹泻病毒为黄病毒科瘟病毒属代表种,其基因组为单股正链RNA,无Poly(A)尾。传统的3'-末端快速扩增方法不适用于牛病毒性腹泻病毒的3'-末端克隆测序。本研究根据牛病毒性腹泻病毒基因组3'-末端共有特征碱基,设计回文锚定引物CGend。以BVDVJZ05-1毒株为研究对象,进行了反转录及3'-末端克隆测序。结果表明,CGend的反转录效果优于随机引物和一般特异性下游引物,并且扩增得到了JZ05-1的3'-末端完整序列。本研究为瘟病毒属病毒反转录和3'-末端克隆测序提供了新思路。
- 李庆超苗利光李海涛刘艳环张广雷庄风岐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒瘟病毒反转录
- 重组抗菌肽LfcinB/LfampinB基因的克隆及表达载体的构建
- 2010年
- 根据GeneBank中提供的牛乳铁蛋白基因序列,设计并合成了重组LfcinB/LfampinB基因,并通过PGEM-Teasy载体扩增。酶切回收的LfcinB/LfampinB片段与中间载体pP6连接。pP6上的启动子、信号肽和调控序列与LfcinB/LfampinB共同切下,获得具有上游调控元件的PLfc/Lfa基因片段。将PLfc/Lfa与pME290表达载体连接,并转化绿脓杆菌。结果表明,本试验成功构建了重组pPLfc/Lfa表达载体。
- 孙金霞刘艳环李海涛李庆超张广雷苗利光
- 关键词：抗菌肽克隆
- 中国牛病毒性腹泻病毒JZ05-1分离株全基因测序及分析被引量：21
- 2010年
- 牛病毒性腹泻病毒为瘟病毒属成员,呈世界性分布并在乳/肉牛业中造成严重经济损失。本研究利用MD-BK细胞增殖一株分离于我国吉林地区的牛源牛病毒性腹泻病毒JZ05-1毒株,观察发现其具有典型的致细胞病变效应。使用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别扩增覆盖基因组全长的八个片段并测序,拼接获得该病毒的全基因组序列长12285核苷酸(nt),GenBank登录号:GQ888686。该病毒基因组具有编码多聚蛋白的一个11694nt可读框,5'非翻译区(UTR)长387nt,3'非翻译区长204nt。分别分析BVDVJZ05-1的5'-UTR序列和全基因组序列,发现该病毒属于BVDV-2a亚型。BVDV-2型多数毒株之间的相似性约为96%,与JZ05-1全基因组序列相似性最高的加拿大p11Q毒株和中国XJ-04毒株的相似性为90%和91%。因此,JZ05-1全基因组序列与BVDV-2型其他毒株的全基因组序列具有较大差异。
- 李庆超苗利光李海涛刘艳环张广雷肖佳美
- 关键词：BVDV全基因组基因型
- 布鲁氏菌L7/L12、OMP31基因的克隆、测序及免疫原性分析被引量：4
- 2009年
- 为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同源分析L7/L12达97.1%,OMP31达100%,免疫原性分析可作为免疫优势抗原。
- 张广雷苗利光刘艳环李海涛李庆超庄风歧
- 关键词：布鲁氏菌同源性
- 布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及其融合蛋白免疫原性研究
- 布氏菌病(Brucellosis)是由布氏杆菌(Brucella.spp)引起的人畜共患病,布氏杆菌病主要造成波状热和慢性感染,引起流产和不孕不育。目前已经有大约170个国家和地区存在和流行,给群众的健康和养殖业的发展带...
- 张广雷
- 关键词：布氏杆菌基因重组表达载体构建融合蛋白
- 文献传递
