张俊辉
- 作品数：23 被引量：26H指数：3
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 鲤鱼外周血白细胞TLR5M全长cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2013年
- 本试验以鲤鱼TLR5M的EST序列为基础进行5'-RACE试验,获得了其cDNA的全长序列。结果表明,该序列共3182 bp,包含38 bp的5'端非编码区,486 bp的3'端非编码区,1个2658 bp的开放阅读框(ORF),共编码885个氨基酸。序列同源性比对结果表明,该序列与麦瑞加拉鲮鱼TLR5基因同源性高达84.46%。
- 孙真贾生美冯祥汝陈义龙翟新新沈雪飞张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：鲤鱼克隆
- 鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6全长cDNA克隆及序列分析
- 2013年
- 本试验以鲤鱼外周血白细胞肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)EST序列为基础,经地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从重组噬菌体中经过两轮筛选获得阳性克隆。序列分析结果显示,该序列包含有5′-非编码区(5′-UTR)25bp;3′-非编码区(3′-UTR)535bp,存在2个mRNA不稳定基序ATTTA;开放阅读框ORF长1632bp,编码543个氨基酸。预测蛋白质等电点为5.88,分子质量大小为61.773ku。序列同源性比对结果表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼TRAF6a基因同源性达99%。蛋白质序列分析结果发现,其具有TRAF家族的典型序列特征。
- 贾生美孙真冯祥汝陈义龙沈雪飞翟新新张俊辉杨振国王文东卢强
- 关键词：鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6克隆
- 维氏气单胞菌脂蛋白Lpp/LppB双基因缺失株的构建与验证
- 2021年
- 在维氏气单胞菌单基因缺失株ΔLpp的基础上,通过同源重组方法获得脂蛋白LppB基因上、下游同源臂连接片段,依次构建重组克隆载体pMD18-T-L-UD1225和重组自杀性载体Pre112-L-UD1225,随后转入WM3064感受态细胞中作为供体菌,与受体菌ΔLpp进行结合转移,构建双基因缺失株ΔLpp/LppB,通过反转录验证并检测其遗传稳定性。结果显示,成功构建了遗传稳定性良好的双基因缺失株ΔLpp/LppB,其生长速率和生物被膜形成能力较野生株WT均下降。结果表明,协同缺失脂蛋白基因Lpp和LppB后,双基因缺失株ΔLpp/LppB的生长和生物被膜变化更显著,这有利于进一步推测脂蛋白基因的功能,为之后研究维氏气单胞菌的致病机制奠定了基础。
- 盛天鸽宋格格张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：维氏气单胞菌基因缺失生物被膜
- 维氏气单胞菌脂蛋白的原核表达及其抗血清的抗菌作用研究
- 2021年
- 为了探究维氏气单胞菌毒力因子脂蛋白的生物学功能,对脂蛋白基因进行原核表达,对表达产物进行鉴定并制备多克隆抗体研究其抗菌效应。通过PCR扩增脂蛋白基因,连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒pET-32a(+)-Lpp。将重组质粒pET-32a(+)-Lpp转化入感受态细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达。利用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化,并采用SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白的表达产物。用纯化后的重组脂蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,多抗经皮下接种小鼠研究其抗菌效应。结果显示,经酶切鉴定和序列测定发现重组质粒pET-32a(+)-Lpp构建成功。通过SDS-PAGE检测发现,重组蛋白LPP在原核表达系统中以可溶性形式表达,分子质量约为69 ku。Western-blot结果显示,纯化后的重组蛋白LPP为单一条带。制备的多克隆抗体的效价为102 400,该多抗可提高荷菌小鼠的生存率,减少脾荷菌量。因此,本实验成功构建了重组质粒pET-32a(+)-Lpp,表达并纯化了重组蛋白LPP,制备的多抗具有抗菌作用,为该蛋白生物学功能的研究及疫苗的制备奠定了基础。
- 宋格格岳涛涛盛天鸽张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：维氏气单胞菌原核表达抗菌作用
- MDV中meq基因对CEF细胞chTERT,chTR表达影响的研究被引量：1
- 2008年
- 利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR方法检测了MDV中meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT)、端粒酶RNA亚基(chTR)表达水平的影响,并用TRAP法测定了端粒酶活性,用流式细胞仪检测了细胞周期的变化.实验结果表明,转染48 h后chTERT表达水平为转染后72 h的16倍,chTR表达水平在转染前后基本不变;转染48 h后CEF细胞的相对端粒酶活性是转染72 h后的12倍;在转染后72 h S期细胞的百分比较未转染细胞显著增加.
- 潘风光艾永兴卢士英孟宪梅张俊辉周玉
- 关键词：MDVMEQ基因端粒酶活性细胞周期
- 鲤鱼白细胞介素10(IL-10)基因cDNA克隆及序列分析(英文)
- 2012年
- [目的]获取鲤鱼全长IL-10(interleukin 10)cDNA,并对其序列进行分析。[方法]利用DD-RTPCR(differential display RT-PCR)方法获得差异表达IL-10cDNA片段,以地高辛标记做为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,克隆鲤鱼IL-10全长cDNA,并对该序列进行序列分析和同源性比较。[结果]鲤鱼全长IL-10cDNA共1117bp,包含55bp的5’端非编码区,一个540bp的编码179个氨基酸的开放阅读框及522bp的3’端非编码区。其中,3’非编码区包含3个mRNA不稳定基序"ATTTA";该蛋白序列具有IL-10家族的典型序列特征;序列同源性比较表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼IL-10基因同源性为89.1%。[结论]该试验为进一步研究IL-10在体内的表达方式、功能特点、调控机理及其在炎症反应和免疫应答中的作用机制奠定了基础。
- 冯祥汝陈义龙赵晓王文东张俊辉杨振国孙真贾生美卢强
- 关键词：WORDSCARPSEQUENCE
- 维氏气单胞菌脂蛋白Lpp基因缺失株的构建及其部分生物学特性分析被引量：1
- 2020年
- 为了探究维氏气单胞菌毒力因子脂蛋白的致病机制,在全基因测序的基础上,通过同源重组缺失脂蛋白基因。首先扩增脂蛋白基因的上下游同源臂,通过重叠PCR连接后,凝胶回收DNA片段;连接克隆载体pMD18-T,转化DH5α感受态细胞,测序成功后提取质粒进行双酶切,连入相同酶切的Pre112自杀性质粒;依次转化DH5α-λpir、WM3064感受态细胞,作为供体菌;和受体菌野生株进行同源重组,并筛选鉴定。结果显示,成功缺失了维氏气单胞菌脂蛋白基因。生物学特性分析结果发现,缺失株和野生株的生长速度相似,生物膜形成能力降低,鞭毛缺失,游动能力减弱,细菌的毒力降低,溶血活性没有明显变化。因此,成功构建了维氏气单胞菌脂蛋白基因缺失株,并分析了其部分生物学特性,为进一步研究脂蛋白基因的功能奠定了一定的基础。
- 宋格格盛天鸽张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：维氏气单胞菌基因缺失
- 多次小剂量STZ处理建立糖尿病大鼠模型及EGF与Gastrin联合应用对胰岛素分泌的影响被引量：3
- 2013年
- 目的通过多次小剂量STZ处理建立糖尿病大鼠模型,观察EGF/Gastrin联合应用对模型大鼠胰岛功能的影响。方法采用35mg·Kg-1腹腔注射STZ-枸橼酸钠缓冲液,每周1次,连续4周,建立大鼠糖尿病模型。采用生化分析和组织染色的方法观察血糖和胰岛细胞的改变。成模大鼠随机分为三组:Insulin治疗组,EGF/Gastrin联合治疗组及DM对照组。EGF/Gastrin组给予EGF(1μg·Kg-1)/Gastrin(3μg·Kg-1),每日1次皮下注射,连续14日;Insulin组给予长效胰岛素2U/d,连续14日;DM对照组及正常对照组给予枸橼酸钠缓冲液。观察血浆中胰岛素和C肽的改变,评估胰岛细胞功能。结果 35只实验组大鼠中有33只血糖值≥11.1mmol·L-1,占总数的94%。Insulin组大鼠和EGF/Gastrin组大鼠血糖值同DM组相比显著降低。DM组中血清胰岛素及C肽含量显著低于正常对照组(P<0.05),而Insulin组及EGF/Gastrin组均显著高于DM组(P<0.05)。组织学结果观察发现,成模大鼠的胰岛数量明显减少,分布不均匀并出现不同程度的萎缩,出现空泡变性。Insulin免疫组织化学染色结果显示,成模大鼠胰岛内Insulin染色阳性的细胞明显减少;且残存胰岛β细胞Insulin染色强度低于正常对照组,Insulin组及EGF/Gastrin组大鼠胰岛中Insulin表达细胞明显增多,有部分细胞呈强阳性表达。结论 EGF和Gastrin联合应用能够促进糖尿病大鼠胰岛功能的恢复。
- 孟召祥高静张俊辉刘静秋杨丽倪劲松
- 关键词：糖尿病胰岛细胞EGF
- 鲤鱼白细胞介素10基因组DNA克隆及序列分析
- 2013年
- 为获得鲤鱼白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)全长基因组序列,本研究利用鲤鱼IL-10全长cDNA序列(Gen-Bank登录号:JX524550),通过在两端非编码区设计引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组为模板,使用PCR方法成功获得鲤鱼IL-10全长基因组序列。鲤鱼IL-10基因组全长2176bp,GenBank登录号为JX524551。将所获得的序列与其他物种IL-10基因组序列相比,结果发现都含有5个外显子,4个内含子,外显子在进化上相对保守,剪切位点都符合"gt......ag"规则;序列包含540bp的开放阅读框,编码179个氨基酸,有2段典型的IL-10氨基酸信号基序。
- 冯祥汝陈义龙孙真贾生美王文东张俊辉杨振国卢强
- 关键词：鲤鱼白细胞介素10基因组克隆
- 金黄色葡萄球菌融合肠毒素的构建及高效表达被引量：2
- 2008年
- 以食物中毒性金黄色葡萄球菌毒素为研究对象,利用PCR方法分别扩增出金黄色葡萄球菌肠毒素SEB1、SEB2、SED1、SED2、SEE基因片段。将克隆得到的5个毒素基因片段采用柔性的Linker序列(Gly4Ser)3进行串联(SEB1-SEB2-SED1-SED2-SEE),通过重叠延伸PCR法扩增出了融合毒素T,目的基因全长1 835 bp,测序结果同源性达99%。将融合基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌后成功表达了融合蛋白,蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的29.6%。
- 张俊辉周玉任洪林付佳柳增善
- 关键词：金黄色葡萄球菌
