张俊
- 作品数：15 被引量：31H指数：4
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CK-19 mRNA对乳腺癌的微转移诊断价值的Meta分析被引量：2
- 2012年
- 目的：评价CK-19mRNA对乳腺癌的微转移诊断的价值。方法：计算机检索维普、CNKI和万方数据库,收集已公开发表的有关CK-19 mRNA对乳腺癌的微转移诊断的文献,按Meta分析的要求对原始文献的质量进行评估,采用RevMan5.0软件对各研究的原始数据进行统计分析。结果：共纳入7篇中文文献,样本量为777例,其中经病理学诊断为II、I期的乳腺癌患者为258例,III、Ⅳ期的有62例。乳腺癌组与乳腺良性疾病组的Meta分析结果：合并OR=7.30,95%CI=2.48~21.44,P=0.0003;I、Ⅱ期与III、Ⅳ期癌症组的Meta分析结果：合并OR=0.20,95%CI=0.11至0.38,P〈0.00001。结论：CK-19 mRNA可以作为检测乳腺癌患者外周血微转移的分子标志物,对乳腺癌的指导治疗和评估预后具有重要的意义。
- 张俊曾照芳
- 关键词：CK-19MRNA乳腺癌微转移META分析
- 不同转移潜能乳腺癌细胞中EGFR的表达及意义
- 2010年
- 目的研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达,并探讨其在乳腺癌侵袭转移过程中的作用。方法利用人工基质膜侵袭实验获得高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两系细胞周期,transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测EGFR在两系细胞中的表达。结果利用transwell小室成功筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系;它们的体外生长速度、倍增时间、细胞周期和侵袭力具有明显差异;RT-PCR和Western Blot均显示在高转移潜能乳腺癌细胞中EGFR在基因和蛋白水平的表达均显著高于低转移乳腺癌细胞。结论 EGFR的过表达与乳腺癌细胞侵袭能力显著性相关,EGFR在乳腺癌侵袭过程中发挥了重要的作用。
- 张俊李少林郭启帅曹辉张涛汤为学
- 关键词：乳腺癌表皮生长因子受体TRANSWELL
- 上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨上调microRNA-150(miR-150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染)。采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(P<0.01)。CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36%±1.78%)与阴性对照组(5.12%±0.54%)及空白对照组(4.68%±0.35%)相比明显增加(P<0.01)。结论上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因。
- 张俊罗娜王勃李少林朱辉
- 关键词：肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡微RNAS
- 皮质肌动蛋白在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达及意义被引量：1
- 2010年
- 目的筛选不同转移潜能的乳腺癌细胞亚系,并探讨皮质肌动蛋白(cortactin)在乳腺癌细胞增殖和侵袭过程中的作用。方法经过连续人工基质膜侵袭实验后获得高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,通过透射电镜观察比较两系细胞的超微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞增殖能力,流式细胞仪检测两系细胞周期,Transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用免疫细胞化学法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹分析法检测cortactin蛋白在两系细胞中的表达。结果利用人工基质膜侵袭实验筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,并且两系细胞形态上无明显差异。MTT实验显示高转移潜能细胞体外生长速度显著快于低转移潜能细胞(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,高转移潜能细胞亚系与低转移潜能细胞亚系相比,G0/G1期细胞前者比后者少[(52.67±3.69)%vs(64.46±2.79)%],而S期细胞前者比后者多[(30.53±6.19)%vs(24.63±2.04)%]。高转移潜能细胞亚系增殖指数(PI)高于低转移细胞亚系[(47.32±3.69)%vs(35.53±2.80)%,P<0.05],侵袭能力显著强于低转移潜能细胞亚系[(61.46±7.08)vs(25.32±4.87)个/视野,P<0.05]。免疫组化、RT-PCR和蛋白质印迹分析均显示在高转移潜能细胞亚系中cortactin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能细胞亚系(P<0.05)。结论 Cortactin的过表达与乳腺癌的增殖和转移过程密切相关。
- 张俊曹辉郭启帅张涛汤为学李少林
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞增殖
- 基于滚环扩增技术的蛋白质高灵敏检测被引量：1
- 2012年
- 目的:基于滚环扩增技术(rolling circle amplification,RCA)结合免疫反应建立一种蛋白质的高灵敏检测方法。方法:根据双抗体夹心法原理,以链酶亲和素为桥梁,生物素修饰的单链寡核苷酸引物可以高亲和力地链接到生物素标记的免疫复合物上,建立蛋白质的滚环扩增技术检测平台,并将其用于血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的检测。结果:在优化实验条件下,对VEGF检测的灵敏度达到10fM。结论:与常规的酶标二抗体系ELISA法相比,本方法具有更高的灵敏度,适于低丰度蛋白质的检测,此方法的进一步完善将为疾病新的蛋白标志物的筛选以及临床诊断提供有力的工具。
- 张俊曾照芳鲁卫平
- 关键词：滚环扩增VEGF高灵敏度蛋白质检测
- 维持静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化和原代培养
- 2012年
- 目的建立维持正常肝细胞静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化及原代培养方法。方法对传统小鼠肝细胞分离纯化的原位两步胶原酶灌流法进行改良,台盼蓝染色法计数细胞总数并鉴定肝细胞活率;用改良的WME培养基对C57BL/6小鼠肝细胞进行原代培养,经过碘酸雪夫氏染色(Periodic acid-Schiff stain,PAS)和全自动生化分析仪鉴定肝细胞的生物学特性及功能;Western blot法检测分离纯化后的小鼠肝细胞及原代培养24、48、72、96 h小鼠肝细胞的细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平。结果分离纯化后可从每只小鼠肝脏稳定获取(3～5)×107个肝细胞,细胞活率达(86.68±2.46)%;原代培养96 h内的小鼠肝细胞能保持合成糖原、白蛋白、尿素的功能;原代培养小鼠肝细胞中,细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平与分离纯化的小鼠肝细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05),表明原代培养96 h内的小鼠肝细胞均能维持静息细胞周期状态。结论改良的分离纯化方法能稳定获得高产量、高活率的小鼠肝细胞;改良后的原代培养方法可使肝细胞维持其特异性功能、分化特性及静息细胞周期状态。
- 罗娜蔡园张俊汤为学吴小翎何松
- 关键词：肝细胞提纯原代培养细胞周期
- 靶向PeroxiredoxinⅠ基因的shRNA真核表达载体的构建及生物学功能鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的构建针对PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,观察下调PrxⅠ基因表达后对乳腺癌MCF-7细胞生物学功能的影响。方法构建针对PrxⅠ基因的shRNA真核表达载体,经酶切和测序鉴定正确后,转染入乳腺癌MCF-7细胞。流式细胞术检测细胞转染效率,RT-PCR及Western blot分别检测干扰前后PrxⅠmRNA和蛋白表达,MTT法及流式细胞术检测干扰前后乳腺癌MCF-7细胞体外的增殖情况及细胞周期和细胞凋亡。结果成功构建真核表达载体pGPU6-HK、pGPU6-Prx1、pGPU6-Prx2、pGPU6-Prx3、pGPU6-Prx4,并转染入乳腺癌MCF-7细胞中,转染率为80%左右,RT-PCR及Westernblot分析表明转染pGPU6-Prx1、pGPU6-Prx2、pGPU6-Prx3、pG-PU6-Prx4后的细胞EGFR mRNA和蛋白表达均不同程度地受抑,以pGPU6-Prx3为甚,其mRNA和蛋白表达抑制率分别为82.6%和80.5%。与未转染组和pGPU6-HK组相比,pGPU6-Prx3组的细胞生长明显延迟(P<0.05),细胞凋亡率显著增加,G1期细胞明显增多,而S期细胞减少(P<0.05)。结论靶向PrxⅠ基因的shRNA真核表达载体构建成功,能够特异性下调乳腺癌MCF-7细胞的PrxⅠ基因的表达,并明显抑制乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,调控细胞周期再分布。
- 郭启帅黄曦张俊李少林
- 关键词：RNA干扰乳腺癌
- hsa-miR-150慢病毒表达质粒的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建hsa-miR-150慢病毒表达质粒,并鉴定其感染肝癌细胞系Hep3B后miR-150的表达水平。方法根据hsa-miR-150序列化学合成hsa-miR-150基因片段,克隆至慢病毒载体pGIPZ上,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150,转染包装细胞293T进行包装,检测病毒滴度。收获并浓缩重组慢病毒颗粒,稳定转染Hep3B细胞,流式细胞术检测GFP的表达率;荧光定量PCR检测miR-150的表达水平。结果重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150经菌落PCR及测序证实构建正确;重组慢病毒的滴度约为5.7×108 TU/ml;稳定转染Hep3B细胞后,GFP的表达率为(97.78±1.14)%,重组慢病毒转染组miR-150的表达水平较空白对照组增加约6倍(P<0.05)。结论成功构建了hsa-miR-150慢病毒表达质粒,其在Hep3B细胞中可高效表达,为进一步研究miR-150的生物学功能奠定了基础。
- 张俊张涛王勃李少林
- 关键词：微RNAS慢病毒载体肝肿瘤
- 甘氨双唑钠对鼻咽癌移植瘤的时辰放射增敏作用被引量：2
- 2010年
- 目的观察甘氨双唑钠(CMNa)联合时辰放疗对鼻咽癌裸鼠移植瘤的时辰放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法将荷瘤裸鼠随机分为3组:放疗组、放疗+CMNa组、空白对照组,每组分3HALO(光照后小时,hours after light onset)、9HALO、15HALO、21HALO四个时辰进行相应处理。测定肿瘤再生长延长时间(regrowth delay time,TGD),绘制生长曲线。用免疫组化法检测各组肿瘤标本中HIF-1α、γ-H2AX和凋亡蛋白的表达。结果通过对各组TGD的比较,以放疗+CMNa组对肿瘤的抑制效果最好。在该组中,TGD:15HALO>21HALO>9HALO>3HALO,15HALO与3HALO的TGD比较有统计学意义;15HALO与3HALO的HIF-1 α、γ-H2AX及凋亡蛋白的表达水平比较有统计学意义。结论甘氨双唑钠联合时辰放疗对鼻咽癌裸鼠移植瘤有明显的时辰放射增敏作用,以15HALO放疗+CMNa组对肿瘤的抑制效果最佳。其机制可能与HIF-1α的表达,DNA双链损伤,凋亡有关。
- 陈宓李少林彭志平王晶张俊
- 关键词：甘氨双唑钠Γ-H2AX
- CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义被引量：5
- 2012年
- 目的研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达,并探讨其在肝癌细胞增殖和侵袭转移过程中的作用。方法利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系,并通过Transwell小室侵袭实验比较两细胞亚系的侵袭能力从而对其进行验证,应用RT-PCR和Western blot检测CXCR4在两细胞亚系中的表达。CCK8法检测两细胞亚系生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两细胞亚系细胞周期和凋亡率。结果成功筛选出高、低转移潜能肝癌细胞亚系,并通过Transwell小室侵袭实验证实高转移潜能肝癌细胞的侵袭能力高于低转移潜能肝癌细胞;RT-PCR和Western blot均显示高转移潜能肝癌细胞在基因水平和蛋白水平的CXCR4表达均显著高于低转移潜能肝癌细胞;且两细胞亚系体外生长速度、倍增时间、细胞周期和凋亡率差异均具有统计学意义。结论上述结果表明CXCR4在肝癌进展中发挥重要的作用,可能为未来肝癌的诊疗提供理论依据。
- 王勃李少林张俊胡敏袁犁
- 关键词：肝癌趋化因子受体CXCR4TRANSWELL
