孔峰
- 作品数：51 被引量：126H指数：6
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- Caveolae在高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质合成中的作用
- 2013年
- 目的:探讨胞膜小凹(caveolae)在高糖(HG)诱导大鼠肾小球系膜细胞(MCs)细胞外基质(extra-cellular matrix,ECM)表达过程中的作用。方法:传代培养的大鼠MCs同步化后分为:(1)正常糖组;(2)HG组;(3)HG+甲基-β-环糊精(β-MCD)组;(4)HG+β-MCD+胆固醇组。用Western blotting检测小凹蛋白1(Cav-1)、磷酸化小凹蛋白1(p-Cav-1-Y14)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白的表达水平,用实时定量PCR检测细胞中Cav-1 mRNA表达变化,用ELISA方法检测上清中纤维连接蛋白(FN)的蛋白含量。结果:(1)高糖状态下,系膜细胞FN和ColⅠ蛋白表达水平均显著增加(均P<0.05)。(2)高糖培养显著增加p-Cav-1-Y14水平(P<0.01),而对Cav-1 mRNA及蛋白表达无明显影响(P>0.05)。(3)β-MCD预处理抑制了高糖诱导的p-Cav-1-Y14升高(P<0.01)及FN表达(P<0.05),但对高糖诱导的Col I表达无影响;β-MCD的作用可被胆固醇抑制。结论:高糖可显著增加系膜细胞1型胶原及纤维连接蛋白的合成。高糖诱导的纤维连接蛋白合成与Cav-1磷酸化水平增加有关。
- 卢圣霞刘元涛孔峰杜月娟刘晔傅余芹
- 关键词：小凹蛋白1纤维连接蛋白
- 没药倍半萜成分的分离鉴定及抗肿瘤活性被引量：9
- 2008年
- 目的从没药提取物中分离纯化倍半萜单体成分,并探讨其抑制肿瘤细胞增殖的生物活性。方法没药石油醚提取部分经硅胶柱层析分离得到二十多个倍半萜类化合物。其中化合物1和2的结晶分别经熔点测定、薄层层析1、H-NMR和13C-NMR数据分析以及与已知化合物比较,确定其化学结构。利用MTT法检测化合物1和2对大肠癌细胞HT-29和激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3、PC-3M、DU-145及正常肝的永生化细胞LO2细胞增殖的影响。结果经理化性质鉴定、波谱分析,确定化合物1的结构为[1(10)E,2R,4R]-2-甲氧基-8,12-环氧吉玛-1(10),7,11-三烯-6-酮;化合物2的结构为2-甲氧基-5-乙酰基-4-呋喃吉玛-1(10)-烯-6-酮,二者同属没药吉玛烷型倍半萜类化合物。MTT结果表明,化合物1和2对大肠癌细胞增殖的抑制作用较弱。而对三种激素非依赖型前列腺癌细胞的增殖有非常显著的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。另外,化合物对正常肝永生化细胞的增殖无明显影响。结论经分离纯化、理化性质鉴定和波谱分析,确定了没药吉玛型倍半萜化合物1和2的结构,该化合物对前列腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。
- 吉恺孔峰沈涛王小玲许爱辉苑辉卿张秀田
- 关键词：没药前列腺癌细胞株
- 前列腺组织特异性表达载体pPSA-EGFP的构建被引量：2
- 2004年
- 目的:构建前列腺组织特异性表达载体。方法:利用基因重组技术将PSA基因上游5.8kb的调控序列克隆至真核表达载体pEGFP鄄1,构建前列腺组织特异性表达载体pPSA鄄EGFP;用脂质体Lipo鄄fectamine将载体pPSA鄄EGFP分别转染前列腺癌细胞株PC鄄3m、乳腺腺癌细胞株MCF鄄7、结肠腺癌细胞株HT鄄29、肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa和肺腺癌细胞株A549多种细胞,转染后48h荧光显微镜下观察GFP的表达情况,pPSA鄄EGFP和phAR共转染PC鄄3m细胞。结果:在pPSA鄄EGFP和phAR共转染的PC鄄3m细胞中绿色荧光蛋白表达明显,MCF鄄7细胞中绿色荧光蛋白表达微弱,其他细胞中荧光蛋白不表达。结论:构建的前列腺表达载体pPSA鄄EGFP具有组织特异性。
- 贾立宁张建业张莲英孔峰陈蔚文胡晓燕
- 关键词：EGFP前列腺组织特异性表达共转染PC-3M细胞组织特异性
- p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用被引量：6
- 2004年
- 目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:p35基因在PC12细胞中的稳定表达可以有效地抑制MnCl2诱导的PC12细胞凋亡。结论:p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞具有保护作用。
- 曾季平王立祥胡晓燕秦文孔峰杨玲玲崔行刘新垣
- 关键词：氯化锰PC12细胞细胞凋亡
- 褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用被引量：2
- 2004年
- 目的:探讨氧自由基在阿尔茨海默病(AlzheimerDisease熏AD)发生中的作用及可能机制,评价褪黑素(Melatonin熏MT)的临床应用价值。方法:采用超氧自由基产生系统黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统(X/XO)作用于PC12细胞,以褪黑素拮抗其作用,观察细胞的形态学变化;MTT法检测细胞存活率,DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT鄄PCR技术测定凋亡相关基因bcl鄄2、bax的表达。结果:X/XO作用后,PC12细胞出现凋亡特征性改变,凋亡率增加,电泳呈现DNAladders,凋亡相关基因bax上调;而10-5M褪黑素即能改善凋亡情况。结论:氧自由基可诱导神经元凋亡从而促进AD发生,其机制与促凋亡相关基因Bax表达增高有关;褪黑素可减缓神经元凋亡,可用于临床预防与治疗。
- 杨玲玲付振涛孔峰胡晓燕曾季平崔行
- 关键词：活性氧阿尔茨海默病细胞凋亡
- Ⅰ型与Ⅱ型子宫内膜癌细胞抗氧化能力的比较
- 2009年
- 目的比较Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌细胞对氧化应激的抵抗并探讨其机制。方法①H2O2处理Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌细胞,噻唑蓝(MTT)法检测两型细胞的增殖水平;②120μmol H2O2和800μmol H2O2分别处理Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶标仪检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。结果在不进行处理的情况下,Ⅰ型子宫内膜癌细胞较Ⅱ型子宫内膜癌细胞ROS水平及CAT活性较低,GSH水平、GSH/GSSG比值及SOD和GPx活性较高(P<0.01)。在氧化应激条件下,Ⅰ型子宫内膜癌细胞GSH水平及GSH/GSSG比值下降,SOD和CAT活性降低(P<0.01);Ⅱ型子宫内膜癌细胞GSH、GSSG水平明显升高,GSH/GSSG比值略有升高,SOD、CAT和GPx活性升高(P<0.01)。结论Ⅱ型子宫内膜癌细胞与Ⅰ型子宫内膜癌细胞相比较,其本身ROS水平较高,细胞内抗氧化系统及抗氧化酶系统对氧化刺激可进行有效应答,细胞不易受到氧化损伤。
- 丁宁毕文祥孔峰张培海
- 关键词：子宫内膜肿瘤活性氧谷胱甘肽抗氧化酶
- 氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制被引量：7
- 2005年
- 目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。
- 曾季平王立祥胡晓燕杨玲玲孔峰吴伟芳陈蔚文崔行
- 关键词：氯化钴PCI2细胞细胞凋亡活性氧
- 中性内肽酶高表达对β-淀粉样肽诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
- 2007年
- 目的确定中性内肽酶(NEP)高表达对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹法(Western blot法)检测基因在细胞中的表达。利用Aβ_(25-35)诱导PC12细胞,CellTiter96^(?)AQueous单溶液检测系统(MTS)检测细胞存活率;分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量、活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase- 3表达量的变化。结果在Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡中,NEP高表达可明显提高细胞存活率,降低培养基中LDH含量和ROS生成量;提高细胞ATP释放量;抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活,与正常PC12细胞相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤,抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活,从而提高Aβ_(25-35)诱导的神经细胞的存活率。
- 曾季平杨玲玲吴伟芳孔峰胡晓燕崔行
- 关键词：淀粉样Β-蛋白脱噬作用
- 以神经内肽酶为靶点筛选治疗阿尔茨海默症天然药物的实验研究被引量：7
- 2009年
- 目的筛选具有提高神经内肽酶(NEP)活性从而降低神经细胞β-淀粉样肽(Aβ)水平的药物,为临床治疗阿尔茨海默症(AD)提供实验依据。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导瑞典突变型淀粉样肽前体蛋白(sweAPP)表达质粒pcDNA3.1-sweAPP转染神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,G418筛选获得稳定表达细胞株作为AD模型细胞,采用蛋白印迹技术检测sweAPP表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养基中A4β0和A4β2含量变化,进而以MTT法检测各天然药物对SK-N-SH细胞增殖能力的影响,确定药物的有效浓度及最佳作用时间,以NEP肽酶实验检测药物对NEP酶活性影响,ELISA法检测药物对Aβ水平的影响。结果Western Blot结果显示,转染后SK-N-SH细胞高表达sweAPP蛋白;ELISA结果显示,转染后的SK-N-SH细胞分泌A4β0、A4β2明显升高,分别为转染前的7.26和3.27倍(P<0.05)。NEP肽酶实验检测结果显示,茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3能够明显提高NEP酶活性,分别为(117±2.8)%(、131±4.0)%和(121±1.6)%。ELISA结果显示,经茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3作用后,细胞培养基中A4β0和Aβ42水平明显降低,分别为对照组的(82±0.78)%和(85±2.21)%(、74±1.61)%和(99±3.31)%、(83±5.31)%和(76±6.74)%。结论成功构建AD模型细胞;茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3可提高NEP酶活性,从而有效降低Aβ的水平;本研究为茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3在临床上的应用以及分子机制研究提供了试验数据。
- 杨玲玲张静崔云燕胡晓燕孔峰崔行
- 关键词：Β-淀粉样肽阿尔茨海默症茶多酚人参皂苷
- 小分子干扰RNA联合反义脱氧寡核苷酸靶向逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨针对多药耐药基因(MDR-1)的小分子干扰RNA(siRNAs)和反义脱氧寡核苷酸(asODNs)联合应用逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用效果。方法设计并合成针对MDR-1基因同一序列的siRNAs和asODNs及阴性对照siRNAs,采用转染试剂lipofectamineTM2000分别转染人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR;利用RT-PCR检测MDR-1mRNA和Western blot检测MDR-1蛋白质的表达;采用罗丹明123外排实验检测P-gp的转运功能,MTT法检测MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药逆转效果。结果siRNAs、asODNs、asODNs和siRNAs联合应用均能降低MDR-1mRNA及其蛋白质表达,提高P-gp的转运功能,使细胞对阿霉素的敏感性明显恢复;asODNs和siRNAs联合应用效果明显提高;低浓度siRNAs(200nmol/L)比高浓度asODNs(5μmol/L)的效果强。结论siRNAs、asODNs能有效逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的多药耐药,asODNs和siRNAs联合应用效果明显加强。
- 魏军民侯明李丽珍孔峰高鹏
- 关键词：反义脱氧寡核苷酸MDR-1
