吴爱兵 作品数:24 被引量:93 H指数:6 供职机构: 广东医学院附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 湛江市科技攻关计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
miR-494慢病毒表达载体的构建 被引量:3 2013年 目的:构建miR-494基因的慢病毒表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增hsa-miR-494基因,用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切携带EGFP的慢病毒载体pGIPZ,酶切产物电泳后回收约11kb的载体片段。使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与miR-494连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR-494测序,所构建载体命名为pGIPZ-miR-494-eGFP,获pGIPZ-miR-494-eGFP后按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产。将慢病毒颗粒以最适滴度感染人体肺腺癌细胞株A549,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用Real-Time PCR检测感染效率。结果:目的基因与慢病毒载体连接成功。共转染293T细胞包装病毒与浓缩后滴度达1.02×108TU/ml,并转染到肺腺癌细胞株A549上,Aldefluor流式分选出的细胞后通过Real-Time PCR检测结果显示miR-494慢病毒表达载体感染的A549细胞miR-494表达高于对照组达10倍以上。结论:成功构建携带人miR-494基因的慢病毒表达载体pGIPZ-miR-494-eGFP,为相关后续研究打下了良好基础。 林燕明 张庆 唐志 沈湘 吴爱兵 吴斌关键词:EGFP 慢病毒载体 A549 阿司匹林预防肺癌作用Meta分析 被引量:5 2014年 目的:评价阿司匹林预防肺癌发生的疗效,为临床实践和研究提供参考和依据。方法:通过检索中国生物医学文献数据库、中国学术期刊网络出版总库、PudMed和EMbase等国内外权威的数据库,全面收集相关的临床研究,按纳入排除标准筛选文献并收集相关数据和信息,采用Rev Man 5.0统计软件进行Meta分析,并对性别、阿司匹林剂量和疗程等进行亚组分析。结果:共纳入17个临床研究,Meta分析显示,使用阿司匹林者较未使用者肺癌的发生率较低,OR=0.82,95%CI:0.72~0.94。亚组分析显示,低剂量阿司匹林(≤100mg)可能较高剂量阿司匹林(>100mg)效果好,OR及其95%CI分别为0.94(0.81~1.09)和1.01(0.87~1.16);长期服用阿司匹林能降低肺癌发病,服用≤1年、>1~<5年、≥5年与肺癌发生关系的OR值及其95%CI,分别为1.06(0.94~1.20)、0.73(0.57~0.94)和0.73(0.57~0.93)。结论:低剂量(≤100mg)长期(>1年)使用阿司匹林在降低肺癌发病方面收益更大。由于本Meta分析纳入的为观察性临床研究,所以将来有必要开展多中心大样本的随机对照试验来进一步证实。 吴昆鹏 吴爱兵 沈湘 李姝君 梁亚海 杨志雄关键词:肺肿瘤 阿司匹林 非甾体抗炎药 META分析 芹菜素对肝缺血-再灌注大鼠IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响 被引量:6 2019年 目的探讨芹菜素对肝缺血-再灌注大鼠血IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为A(假手术)组、B(肝缺血-再灌注损伤)组、C(芹菜素10 mg/kg)组、D(芹菜素20 mg/kg)组。Pringle法建立肝缺血(1 h)-再灌注(6 h)损伤大鼠模型。C、D组在再灌注的同时腹腔内分别给芹菜素10、20 mg/kg。HE染色观察肝组织病理变化。测定血ALT、AST。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。结果 C、D组肝组织病理改变明显轻于B组。C组血IL-1β、IL-6、TNF-α、ALT、AST均高于D组,且均低于B组(均P<0.01)。IL-1β、IL-6、TNF-α与ALT正相关(r=0.56、0.64、0.57,均P<0.01);与AST正相关(r=0.61、0.58、0.63,均P<0.01)。结论芹菜素对缺血-再灌注损伤大鼠肝损伤的保护机制之一为下调血IL-1β、IL-6、TNF-α表达,呈现剂量效应关系。 冯韦韦 吴爱兵 王宏宾关键词:芹菜素 缺血-再灌注损伤 白细胞介素 甘草提取物(Gc34)对HepG-2细胞侵袭、增殖能力的影响 被引量:3 2016年 目的通过体外实验研究甘草提取物(Gc34)对人肝癌细胞Hep G-2侵袭、增殖生物学行为的影响及其可能的分子机制。方法将人Hep G-2细胞分为对照组、Gc34组。常规培养细胞。对照组用酒精干预,使其终浓度为0.5%;Gc34组用Gc34干预,使其终浓度为12.5、25.0、50.0 mg/L。细胞侵袭实验测定Hep G-2细胞侵袭力。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep G-2细胞的增殖活性。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞培养上清基质金属蛋白酶(MMP)2、9的含量。比色法测定细胞培养上清还原性谷胱甘肽/谷胱甘肽(GSH/GSSG)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果 HE染色光学显微镜下Hep G-2细胞核浆比例增大,核深染、大小、形态和染色不一,核分裂像增多并可见病理性核分裂像:巨核、双核、多核。24 h及以上的同时间,Gc34 25.0、50.0 mg/L组Hep G-2细胞增殖活性显著低于对照组(P均<0.01)。Gc34组Hep G-2细胞侵袭数、MMP-2、MMP-9、GSH/GSSG、SOD分别为45±7、(40.3±6.2)mg/L、(42.7±5.6)mg/L、4.2±0.8、(67.2±7.9)U/(mg·L),均显著低于对照组(P均<0.01)。Gc34组Hep G-2细胞培养上清MDA含量为(45.4±8.5)mmol/g,显著高于对照组(P<0.01)。Hep G-2细胞侵袭力与MMP-2、MMP-9正相关(r分别为0.65、0.72,P均<0.01)。Hep G-2细胞增殖活性与GSH/GSSG、SOD正相关(r分别为0.55、0.64,P均<0.01),与MDA负相关(r=-0.58,P<0.01)。结论甘草提取物(Gc34)下调MMP-2、MMP-9表达,抑制Hep G-2细胞侵袭能力;下调GSH/GSSG、SOD表达,上调MDA表达,抑制Hep G-2细胞增殖活性。 卢根林 吴爱兵 王宏宾关键词:甘草 HEPG-2细胞 增殖 基质金属蛋白酶 微小RNA-494在肿瘤发生发展中的作用 被引量:3 2013年 微小RNA-494(miR-494)参与正常细胞的细胞周期调控、分化和凋亡等过程。近年来研究表明,miR-494的异常表达与肿瘤的发生密切相关,其参与肿瘤细胞的侵袭和转移等过程。miR-494是一种肿瘤抑制基因,也可作为癌基因,其通过多种靶基因、信号通路对肿瘤发生发展进行调控。 黎明春 吴爱兵 杨志雄关键词:微RNAS 肿瘤 靶基因 miR-373与肿瘤侵袭转移研究进展 被引量:7 2015年 microRNA是生物体内一类长度19~24个核苷酸的非编码小分子单链RNA,通过与目的基因mRNA的3'端非编码区互补配对,引起mRNA直接降解或转录后翻译抑制,影响目的蛋白表达,从而影响细胞凋亡、增殖与分化等生物学行为。miR-373在多种肿瘤中均有异常表达,与肿瘤细胞的侵袭、转移和增殖等生物学行为密切相关,可作为肿瘤早期诊断、治疗靶点或预后监测的指标。本文就miR-373在肿瘤侵袭、转移过程中影响的研究进展作一综述。 李金媚 吴爱兵 杨志雄关键词:恶性肿瘤 硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠炎症因子及内毒素血症的影响 被引量:2 2017年 目的研究硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠血C反应蛋白、降钙素原、内毒素、肿瘤坏死因子-α、白介素-6、白介素-8的影响。方法将64只雄性Wistar大鼠随机分为A(假手术)组、B(缺血-再灌注)组,C(缺血-再灌注+NaH S)组,D[缺血-再灌注+炔丙基甘氨酸(PPG)]组。经腹正中切口剖腹及游离肠系膜上动脉(SMA),钳夹B、C、D组大鼠SMA 60 min和再灌注120 min,建立大鼠肠缺血-再灌注损伤模型。C组在灌注前10 min向大鼠尾静脉注入100μmol/kg NaH S后按1 mg/(kg·h)输注直到再灌注2 h,D组在缺血前10 min向腹腔注入PPG50 mg/kg。检测血CRP、降钙素原、内毒素、H_2S、TNF-α、IL-6、IL-8并进行血培养,测定回肠组织匀浆中H_2S。结果与A组比较,B组的CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8升高,H_2S降低。与B组比较,C组的CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8降低,H_2S升高。与C组比较,D组CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8升高,H_2S降低(P<0.01)。B、C、D组分别有14、6、15例血标本培养出大肠杆菌。H_2S与CRP、降钙素原、内毒素、TNF-α、IL-6、IL-8呈负相关。结论 H_2S降低肠缺血-再灌注损伤大鼠血炎症因子,改善内毒素血症。 吴忠明 卢根林 吴海明 吴爱兵 王宏宾关键词:缺血-再灌注 硫化氢 内毒素 炎症因子 MMP2过表达在子宫内膜腺癌的临床意义 被引量:13 2014年 目的:探讨MMP2表达与子宫内膜腺癌临床参数和预后之间相关性。方法我们收集了81例子宫内膜腺癌患者石蜡标本。这些患者的年龄在32-80岁之间。随后,利用免疫组化SP方法检测了81例子宫内膜腺癌中MMP2表达情况。最后,我们使用SPSS软件统计分析了MMP2表达与与子宫内膜腺癌进展和预后之间相关性。结果MMP2在子宫内膜腺癌胞浆中表达。此外,过表达的MMP2与子宫内膜腺癌分化程度(P=0.015)以及预后(P=0.041)呈负性相关。结论MMP2过表达是子宫内膜腺癌患者的一个恶性标志物。 李姝君 沈湘 杨志雄 吴爱兵 唐志 黎明春 令映霞关键词:子宫内膜腺癌 MMP2 MMP2 肺癌患者T细胞亚群和D-二聚体与临床分期相关性分析 被引量:7 2013年 目的研究肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群、D-二聚体与临床分期、临床病理分级之间的关系。方法运用流式细胞术和免疫比浊法分别测定80例肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群比例和D-二聚体含量。结果临床分期Ⅲ~Ⅳ期(晚期)外周血中CD4+(%)比例较临床Ⅰ~Ⅱ期(早期)低(P<0.01)、Ⅲ~Ⅳ期(晚期)CD8+(%)比例较临床Ⅰ~Ⅱ期(早期)高(P<0.01)、CD4+/CD8+(%)比例较临床Ⅰ~Ⅱ期(早期)低(P<0.01),D-二聚体含量(μg/L)较临床Ⅰ~Ⅱ期(早期)高,外周血T细胞亚群比例和D-二聚体的含量与病理类型和病理分级无相关性(P>0.05)。结论肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和D-二聚体含量与肺癌的临床分期早晚相关,与肺癌的病理类型和分化级别无关,提示可作为肺癌患者分期的参考指标。 李姝君 沈湘 吴爱兵 吴艳霞 王永存 唐志关键词:T淋巴细胞 D-二聚体 肺癌 急性胰腺炎患者内源性硫化氢水平的变化 及与凝血功能的关系 被引量:16 2016年 目的:探讨急性胰腺炎(AP)患者内源性硫化氢(H2S)水平的变化及与凝血功能的关系。方法采用前瞻性病例对照研究方法。选取2002年12月至2015年3月浙江省义乌市中心医院住院的轻症急性胰腺炎(MAP组)、重症急性胰腺炎(SAP组)患者各40例,以同期40例健康体检者作为对照(健康组)。留取空腹静脉血,测定血浆H2S、凝血因子Ⅷ(FⅧ)、血管性血友病因子(vWF)、纤溶酶原(PLG)、抗凝血酶(AT)、血小板计数(PLT)、组织因子(TF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及单核细胞蛋白酶激活受体-1(PAR-1)表达水平,并对各指标进行相关性分析。结果3组研究对象性别、年龄、体质量及AP两组间病程比较差异均无统计学意义,具有可比性。与健康组比较,MAP组、SAP组血浆H2S、FⅧ、vWF、TF、TNF-α及单核细胞PAR-1表达均显著升高〔H2S(μmol/L):67.42±6.34、112.47±12.69比42.57±4.18,FⅧ:(67.5±5.8)%、(82.3±4.7)%比(57.2±6.4)%,vWF:(112.6±9.7)%、(142.5±12.5)%比(76.4±8.2)%,TF(ng/L):45.27±4.34、64.76±6.25比18.15±1.89,TNF-α(ng/L):197.67±13.62、324.72±25.54比20.08±2.57, PAR-1(荧光强度):32.16±4.43、56.12±7.07比12.27±2.12,均P<0.01〕,血浆PLG、AT活性显著减低〔PLG:(52.4±4.7)%、(36.7±3.2)%比(62.1±5.6)%,AT:(43.2±6.9)%、(35.5±5.4)%比(53.6±6.1)%,均P<0.01〕,且SAP组各指标升高或降低较MAP组更为显著(均P<0.01)。SAP组PLT明显低于健康组和MAP组(×109/L:8.5±1.1比15.7±2.8、12.4±1.9,均P<0.01)。H2S与FⅧ、vWF、TF、TNF-α、PAR-1呈显著正相关(r值分别为0.56、0.61、0.72、0.66、0.64,均P<0.01),与PLG、AT呈显著负相关(r值分别为-0.64、-0.57,均P<0.01)。结论 AP患者内源性H2S可上调TF、TNF-α、PAR-1表达水平,从而介导AP患者的凝血功能障碍。 卢根林 吴爱兵 王宏宾关键词:硫化氢 凝血功能 肿瘤坏死因子-Α 蛋白酶激活受体-1