吉滢
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金病原微生物生物安全国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 伤寒沙门菌外膜囊泡通过调控铁死亡抑制结直肠癌细胞的增殖及机制初探
- 2024年
- 近年来,细菌外膜囊泡(OMVs)在抗肿瘤治疗中展现出的巨大潜力引起了广泛的关注.为探究伤寒沙门菌外膜囊泡(S.Typhi-OMVs)对人结直肠癌细胞株HT-29增殖的影响及可能的作用机制,通过超速离心法提取不同细菌的OMVs,细胞增殖实验(CCK-8)检测各细菌OMVs对细胞活力的影响;转录组测序(RNA-seq)分析处理后细胞基因表达水平的变化;试剂盒检测铁死亡相关标志物的含量变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(western blot)分别检测相关基因mRNA和蛋白质的表达变化.结果显示,在提取的6种细菌OMVs中,S.Typhi-OMVs对HT-29细胞的增殖产生了最明显的抑制作用,并且呈现出浓度和时间梯度依赖性;RNA-seq显示HT-29细胞可能发生了铁死亡;S.Typhi-OMVs作用后,细胞内发生了铁沉积,氧化产物增多,抗氧化剂减少,符合铁死亡生化特征;SAT1是S.Typhi-OMVs处理后HT-29胞内mRNA表达量变化最大的基因;p53-SAT1-ALOX15是铁死亡的信号通路之一,S.Typhi-OMVs处理后胞内p53、SAT1、ALOX15的mRNA与蛋白表达均增高.以上结果表明,S.Typhi-OMVs能够抑制结直肠癌细胞HT-29的增殖,其机制可能与通过p53-SAT1-ALOX15信号通路诱导HT-29发生铁死亡有关.
- 戈艺潼吉滢曾敏敏郑学明黄新祥张盈
- 关键词：伤寒沙门菌结直肠癌细胞增殖
- 不同培养条件下伤寒沙门菌外膜囊泡对结直肠癌细胞增殖的影响
- 2023年
- 为探讨不同培养条件下伤寒沙门菌外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)对结直肠癌细胞增殖的影响,本研究采用超速离心法分别提取伤寒沙门菌在正常、酸性、高渗、氧化环境LB液体培养基及LPM液体培养基中分泌的OMV,并比较其形态、粒径及所含蛋白大小。体外培养结直肠癌HT-29、SW480及CT-26细胞,采用CCK-8实验检测OMV对结直肠癌细胞增殖的影响,并用克隆形成实验进一步验证;采用流式细胞术检测细胞周期;通过统计体重及肝、肾组织苏木精-伊红染色切片评价OMV在小鼠体内的毒性。结果显示,不同培养条件下伤寒沙门菌分泌的OMV在形态、大小方面无明显差异,高渗应激环境下分泌的OMV更多。OMV所含蛋白相对分子质量在正常和酸性环境LB液体培养基中为37×10^(3)~72×10^(3),在高渗和氧化环境LB液体培养基中为25×10^(3)~72×10^(3),在LPM液体培养基中为8×10^(3)~55×10^(3)。LPM培养条件下OMV能显著抑制SW480和CT-26细胞的增殖,将SW480细胞周期阻滞于G2/M期,且对小鼠无明显肝、肾毒性。结果表明,LPM培养条件下OMV对结直肠癌细胞SW480、CT-26增殖具有直接抑制作用,有望成为结直肠癌治疗的新方案。
- 曾敏敏吉滢王雨柔戈艺潼郑学明孟苒黄新祥
- 关键词：结直肠癌伤寒沙门菌增殖细胞周期
- PTD-mLumin-HMGB1 A原核蛋白的表达、纯化及初步鉴定
- 2012年
- 目的:构建含有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)和荧光蛋白mLumin的人HMGB1 A盒原核表达载体,表达并纯化PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白。方法:利用基因重组技术构建pET28a-PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosette(DE3)中表达融合蛋白,经Ni2+分离柱纯化PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白,激光共聚焦显微镜观察其穿膜能力。结果:成功构建了PTD-mLumin-HMGB1 A原核表达载体,并表达和纯化了PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白,该融合蛋白能高效地穿过细胞膜进入细胞内。结论:成功地表达和纯化了PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白,此融合蛋白具有良好的穿膜能力,为更好地研究HMGB1 A的细胞内定位和体内定位提供了重要的依据。
- 高升刘月芳田伊卿吉滢曾子涵殷丝雨邵启祥
- 关键词：蛋白转导结构域高迁移率族蛋白1融合蛋白
- 非编码小RNA T64对伤寒沙门菌基因表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:对由转录组测序获得的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)非编码小RNA(small non-coding RNA,snRNA)T64的表达进行验证,并对其功能进行初步探讨。方法:选取特异性引物采用反转录PCR(RT-PCR)和普通PCR确认T64在S.Typhi中的表达;将含有T64 snRNA序列的重组质粒导入S.Typhi野生株构建T64高表达株;结合应用S.Typhi全基因组芯片分析技术,比较S.Typhi T64高表达株和空载体对照株在对数期基因表达谱差异,并对部分基因芯片结果进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果:RT-PCR结果显示,snRNA T64在S.Typhi确有表达;基因芯片分析结果显示,与空载体对照株比,snRNA T64高表达株在对数期有20个基因表达上调,7个下调;4个被选基因表达的qRT-PCR结果与芯片分析结果相符。结论:snRNA T64在S.Typhi中表达,可能在基因的表达调节中发挥重要作用。
- 王哲鑫吉滢赵昕徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌基因芯片分析实时荧光定量PCR基因表达调节
- QseBC双组分调控系统对伤寒沙门菌动力的调节作用被引量：2
- 2015年
- 目的研究伤寒沙门菌Qse BC双组分调控系统对伤寒菌动力的调节作用。方法比较伤寒沙门菌野生株(WT)、qse B缺陷株(Δqse B)和qse C缺陷株(Δqse C)动力差异,选取主要鞭毛基因flh D进行实时定量RT-PCR检测,同时检测qse B的表达水平;构建qse B高表达株,比较其与空载体对照株动力和flh D表达差异。结果与WT相比,Δqse B动力无变化,Δqse C动力减弱;在Δqse C中,flh D表达量下调至约1/4而qse B表达上调;qse B高表达株动力较WT减弱,flh D表达下调。结论 qse BC双组分调控系统能调节伤寒菌动力和主要鞭毛基因flh D的表达;qse B高表达时可抑制细菌动力。
- 吉滢倪斌张义全杨瑞馥黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌
