刘肖飞
- 作品数：9 被引量：34H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省高校青年骨干教师资助项目河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 根癌农杆菌介导的GFP在洋葱表皮细胞定位研究被引量：20
- 2009年
- 采用根癌农杆菌介导的方法,以受控于CaMV35S启动子的携带有GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1300-35S-GFP转化洋葱表皮细胞.荧光显微镜下观察结果显示,GFP基因在经浸染和共培养后的洋葱表皮细胞中得到了表达,绿色荧光分布在细胞核和细胞质中,为进一步研究新基因的亚细胞定位和瞬时表达奠定了基础.
- 刘肖飞梁卫红
- 关键词：根癌农杆菌洋葱表皮细胞
- 水稻OsRacD蛋白G15V、T20N点突变对其细胞定位的影响及其与靶蛋白的相互作用被引量：2
- 2009年
- OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程.为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引入G15V、T20N点突变,模拟GTP和GDP结合形式的OsRacD.进一步构建了受控于CaMV35S的与绿色荧光蛋白融合表达的双元植物表达载体;采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下观察蛋白在活细胞内定位的特点.结果显示,野生型蛋白在细胞质和细胞膜都有分布,组成型激活的蛋白主要分布在细胞膜上,而失活型蛋白则大都集中到细胞核周围.蛋白相互作用的酵母双杂交体系分析显示,OsRacD及其2个突变体具有不同的靶蛋白结合特性.研究证实,水稻OsRacD蛋白G15V和T20N点突变不仅影响其在活细胞内的定位,而且也影响了与靶蛋白的相互作用.说明处于不同鸟苷酸结合状态的OsRacD具有不同的胞内定位方式,可能通过结合不同的靶蛋白,引发不同的细胞应答事件.
- 梁卫红刘肖飞毕佳佳吕超慧彭威风
- 关键词：定点突变绿色荧光蛋白蛋白相互作用
- CRISPR/Cas9技术编辑OsRhoGDI2基因导致水稻半矮化被引量：3
- 2020年
- OsRhoGDI2是通过酵母双杂交从水稻幼穗中分离的一个与Rho蛋白家族成员OsRacD相互作用蛋白的编码基因,但功能尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术创制水稻OsRhoGDI2基因敲除突变体。检测结果表明,转基因水稻T0代获得2种纯合突变体,T1代获得8种纯合突变体。序列分析显示,在敲除水稻中,该基因的编辑靶点附近发生了碱基的替换或缺失,预期生成丧失RhoGDI保守结构域的截短蛋白。表型比对分析发现,敲除水稻与对照相比,株高显著降低,统计学分析结果显示,敲除水稻株高降低源于第Ⅱ和第Ⅲ茎节的缩短,提示OsRhoGDI2基因可能与水稻株高控制相关。
- 王凯婕安文静刘亚菲刘迪冯连杰王俊杰黄俊骏刘肖飞梁卫红
- 关键词：水稻株高
- 两种水稻OsRhoGDIs基因启动子的克隆及分析被引量：8
- 2008年
- 【目的】OsRacD属于水稻小GTP结合蛋白Rho家族,是与光敏核不育水稻光周期育性转换相关的关键基因,功能之一是通过控制花粉管的延伸生长影响水稻的育性。在采用酵母双杂交技术,筛选到与OsRacD相互作用的两种鸟苷酸解离抑制因子的编码基因OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的基础上,为深入分析OsRhoGDIs的调控机制以及与OsRacD的关系,对其上游调控序列进行克隆和分析。【方法】采用PCR方法克隆了OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的上游调控序列,并利用网络工具对启动子顺式作用元件进行预测。【结果】两种OsRhoGDIs基因具有与激素应答、光调控及胁迫诱导应答相关元件,且一些元件相同或相似;OsRhoGDIs与OsRacD启动子元件的比较显示,都具有与花粉管萌发相关的多个元件。【结论】OsRhoGDIs的表达调控方式复杂,可能受多条信号通路的共同调控;同时也提示OsRhoGDIs与OsRacD基因可能通过协同表达控制光敏核不育水稻的育性。
- 张利娟梁卫红刘悦霞刘肖飞侯成千毕佳佳
- 关键词：水稻RHO顺式作用元件
- CRISPR/Cas9介导的水稻OsRhoGAP2基因的敲除被引量：2
- 2020年
- OsRhoGAP2是通过酵母双杂交从水稻幼穗组织分离的一种Rho GTP酶激活蛋白质编码基因,其功能尚不明确。为鉴定该基因的功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了OsRhoGAP2基因单靶标敲除载体,并转化日本晴水稻。对转基因水稻的筛选以及编辑靶点扩增和测序结果表明,在T0代获得3种杂合突变体,在T1代获得2种纯合突变体,命名为株系1和株系16。2个纯合敲除株系在OsRhoGAP2编辑靶点分别缺失2个和1个碱基,均导致该基因的移码突变并最终造成无义突变。序列分析显示,突变体中预期生成的OsRhoGAP2截短蛋白质丧失了保守的RhoGAP结构域及CRIB基序。抽穗期水稻的叶片扫描电镜观察结果显示,株系1的叶片表皮毛大量缺失;对抽穗期水稻的剑叶进行光合指标测量,发现突变体与野生型在净光合速率与气孔导度上存在显著差异。其中,株系1和株系16的净光合速率分别上升17.79%和7.70%,气孔导度分别上升113.10%和64.50%,提示OsRhoGAP2基因的功能可能涉及这些生物学过程。
- 安文静王凯婕刘亚菲刘迪冯连杰王高华黄俊骏刘肖飞王俊杰梁卫红
- 关键词：水稻叶片
- G15V和T20N点突变对水稻OsRacD胞内定位和蛋白互作特性的影响
- OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程。为研究该蛋白的作用机制,采用重叠延伸PCR方法,分别在其GTPase结构域中引...
- 刘肖飞梁卫红
- 关键词：点突变绿色荧光蛋白蛋白相互作用
- 文献传递
- T20N点突变对水稻OsRacD蛋白GTP酶活性的影响
- OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。本研究在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水...
- 刘肖飞梁卫红
- 关键词：点突变原核表达和纯化
- 文献传递
- T20N点突变对水稻OsRacD蛋白GTP酶活性的影响被引量：1
- 2010年
- OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,其功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期的育性转换。在序列同源性比对和蛋白保守结构域分析的基础上,采用重叠延伸PCR方法在水稻OsRacD基因的第一个高度保守的基序G1区引入T20N点突变,模拟GDP结合形式的OsRacD。进一步构建了与组氨酸标签融合的原核表达载体,原核表达和纯化了野生型和突变型OsRacD蛋白,并通过Western blot证实了融合蛋白表达和纯化的正确性。纯化蛋白的GTP酶活性检测结果显示,突变后的OsRacD蛋白GTP水解活性显著降低,提示OsRacD在T20N突变前后具有不同的生化特性。
- 刘肖飞梁卫红
- 关键词：点突变原核表达和纯化
- 水稻OsRacD及其相互作用蛋白的研究
- OsRacD是水稻小GTP结合蛋白Rho家族成员,功能之一是作为"分子开关",通过控制花粉管的延伸生长,参与光敏核不育水稻光周期育性转换过程。通过酵母双杂交筛选,获得了一些潜在互作蛋白的编码基因。为研究OsRacD蛋白及...
- 刘肖飞侯成千王军张利娟梁卫红
- 关键词：定点突变蛋白相互作用
- 文献传递
