刘燃
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“首都临床特色应用研究”专项北京市重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Colgalt2-酶联免疫试剂盒的制备被引量：1
- 2014年
- 目的 利用N末端Colgalt2多克隆抗体和C末端Colgalt2多克隆抗体,制备Colgalt2双抗体夹心酶联免疫试剂盒.方法 体外扩增Colgalt2的N-末端编码序列,构建其原核表达质粒,诱导纯化Colgalt2重组蛋白.免疫大耳白兔获得抗Colgalt2 N-末端重组蛋白的多克隆抗体.以Colgalt2 N-末端重组蛋白为抗原,利用ELISA和Western Blot技术检测多克隆抗体效价和特异性.以Colgalt2 N-末端多克隆抗体包被酶标板,同时利用HRP标记的C末端Colgalt2抗体,制备Colgalt2-ElISA试剂盒.结果 我们成功克隆表达了N末端Colgalt2基因片段,制备了兔抗Colgalt2多克隆抗体,ELISA分析表明该抗体效价较高（＞1∶1 280000）,Western Blot分析显示该抗体有良好的特异性.对我们所制备的不同浓度的Colgalt2重组蛋白进行分析显示,所制备的分析试剂盒,在1.25～25 μg/ml范围内具有较好分析线性.线性相关系数约为0.98.结论 所制备的Colgalt2-ELISA分析试剂盒可以用于标本内Colgalt2蛋白检测.
- 刘燃李红敏任慧王智强王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因蛋白质工程酶联免疫吸附试验
- 敲除Colgalt2基因加重小鼠急性肝损伤
- 2016年
- 目的：初步探讨Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰在急性肝损伤过程中的作用。方法取60只Colgalt2＋／＋小鼠和60只Colgalt2－／－小鼠进行急性肝损伤实验，雌雄各半。每组随机选取20只小鼠腹腔注射CCl4（CCl4∶橄榄油＝2∶7，20 ml／kg）。观察小鼠死亡情况，并绘制生存曲线。每组剩余40只小鼠随机分为0、4、8、12 h组，每组10只，腹腔注射CCl4（剂量同上）。分别于0、4及8 h各处死6只小鼠，之后将4及8 h组剩余的小鼠均纳入12 h组（ Colgalt2＋／＋小鼠， n＝14； Colgalt2－／－小鼠， n＝16），并于12 h处死小鼠。 HE染色观察肝组织的病理学改变，取血清进行生化指标ALT、 AST测定。利用qRT？PCR和Western印迹技术检测小鼠Colgalt2在基因及蛋白水平的表达情况。结果Colgalt2基因在Col？galt2＋／＋小鼠肝组织内表达，而在Colgalt2－／－小鼠肝组织内不表达。注射CCl4后10 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率为35％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，两组小鼠死亡率差异显著（P＜0．05）。注射CCl4后12 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率达50％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，差异不显著（P＞0．05）。肝功检测及HE染色结果均提示，与Colgalt2＋／＋小鼠相比， Colgalt2－／－小鼠肝损伤较重。注射CCl4后，野生型小鼠Colgalt2在RNA水平和蛋白水平表达下调。结论 Colgalt2基因敲除在一定程度上可加重小鼠急性肝损伤。该观察结果提示， Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰可能与肝损伤的修复有关。
- 杨琪王建文王智强刘燃李玉凤张一帆郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：CCL4急性肝损伤糖基转移酶
- 高剂量O-糖基化修饰抑制剂Benzyl-α-GalNAc诱导体外培养肝细胞脂肪变
- 2013年
- 目的初步探讨蛋白质O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对肝细胞的影响。方法取雌性Balb／c小鼠（8～10周）20只随机分为正常组（n=10），Benzyl—d—GalNAc药物组（n=10），给Benzyl-α-GalNAc药物（5mg／kg，1次／d）灌胃。第2周末取小鼠血清及肝脏进行血清生化指标AIJT及AlJP测定及肝组织HE染色。培养HepG2细胞．Benzyl-α-GalNAc分别以0．5、1及5mg／ml与HepG2细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。5mg／ml药物组完全未贴壁，去除处理因素，继续培养12h观察细胞。Benzyl-α-Gal—NAc以3mg／ml处理HepG2细胞12h及24h观察细胞贴壁情况。培养L02细胞，Benzyl-α-GalNAc分别以0．1及0．5mg／ml与L02细胞共孵育。24h后进行油红O染液染色。结果药物组与正常对照组比较，肝组织切片显示轻微脂肪变。油红O染色显示药物处理组HepG2及L02细胞内的脂滴积聚。高浓度组细胞完全没有贴壁，24h后更换无药物培养基，去除处理因素12h后，可见HepG2开始贴壁生长。结论高浓度O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc抑制体外肝细胞的黏附，并诱导轻微肝细胞脂肪变。
- 张晓静张仁雯郝晓花任慧李红敏刘燃王智强魏红山
- 关键词：肝细胞脂肪变
- 优质护理对血源性传播疾病的初产妇剖宫产率及护理满意度的影响
- 目的:研究优质护理对血源性传播疾病的初产妇剖宫产率及护理满意度的影响。方法:本次研究选取的研究对象为2015年2月016年2月期间在北京地坛医院住院的初产妇,将100例初产妇随机分为2组,50例初产妇为一组。其中,一组初...
- 刘燃易为张海霞
- 关键词：剖宫产率优质护理护理满意度
- 自身免疫性肝病患者血清GP73变化特征被引量：7
- 2014年
- 目的 明确自身免疫性肝病患者血清GP73的水平特征及可能的临床意义.方法 本研究共观察了健康体检、慢性乙型肝炎患者,以及自身免疫性肝病患者各80例的血清GP73水平.结果 与健康对照人群的血清GP73水平（35.84±11.8） ng/ml相比,自身免疫性肝病患者（112.3±72.55） ng/ml显著升高,也显著高于慢性乙型肝炎患者（86.44±60.69） ng/ml.但自身免疫性肝炎（107.4±90.6）ng/ml,原发性胆汁淤积性肝硬化（89.0±45.38） ng/ml,以及原发性硬化性胆管炎（113.3±50.87） ng/ml患者之间并无显著性差异,但均低于重叠综合症的患者（153.3±86.89ng/ml）.以健康体检人群为参照人群,以61.35 ng/ml为cut-off值,GP73诊断自身免疫性肝病的特异性和敏感性分别为75.0％和97.53％.ROC分析曲线下面积为为0.93（95％ CI：0.89-0.97）.结论 自身免疫性肝病患者血清GP73显著高于健康对照人群,尤其是那些重叠综合征的患者.对于GP73升高的患者,除考虑病毒性肝炎,肝癌外,也应该考虑自身性免疫性肝病的可能.
- 翟庆玲刘燃王智强黄玉波郝晓花冯鑫魏红山
- 关键词：肝炎高尔基体
- 糖基因GLT25D2敲除小鼠的制备与基因型鉴定被引量：7
- 2013年
- 目的建立GLT25D2基因敲除小鼠模型，为胶原糖基化修饰分子机制研究奠定工作基础。方法采用胚胎干细胞线性打靶技术，获得同源重组的干细胞，繁殖嵌合体，GLT25D2^＋/-小鼠杂交获得GLT25D2^-/-纯合子小鼠。采用PCR技术对小鼠进行基因型鉴定。结果共获得Founder小鼠4只，其中雄性和雌性各2只。经过8个月的配笼繁殖，共获得GLT25D2一小鼠40只；GLT25D2^＋/-小鼠89只；GLT25D2^-/-小鼠34只。不同基因型比例符合孟德尔遗传规律。对不同基因型小鼠合笼配对观察发现，GLT25D2^-/-小鼠生育功能下降，每胎数量平均3～4只，显著少于GLT25D2^＋/-小鼠之间的每胎小鼠数（平均6～8只）。对20，40，以及60d小鼠的体重观察显示，GLT25D2^-/-小鼠体重显著高于GLT25D2^＋/-和GLT25D2^＋/＋型小鼠，但这种体重差异的趋势随小鼠年龄的增加而逐渐减少。结论GLT25D2基因敲除小鼠发育异常，与野生型小鼠相比，体重增加，繁殖功能降低。
- 魏红山李红敏任慧郝晓花王志强刘燃黄玉波陈霖王晗李伯安
- 关键词：基因糖基化胶原纤维化小鼠
- 糖基转移酶Colgalt2基因敲除对肝细胞再生过程中增殖和凋亡的作用研究被引量：5
- 2015年
- 目的初步探讨Colgalt2基因敲除对小鼠肝细胞再生过程中细胞增殖和凋亡的作用。方法根据Higgins和Anderson于1931年提出的肝大部分切除模型,实施Colgalt2+/+野生型对照组小鼠和Colgalt2-/-小鼠(均为C57BL/6J品系)70%肝大部分切除术(PH),分别取正常小鼠和PH后1、3、7天的小鼠再生肝脏的右外叶,于10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片。采用免疫组织化学方法比较细胞增殖核抗原(PCNA)在小鼠肝部分切除术后各时间点组间的表达阳性率差异;胶原酶两步灌注法分别分离正常和PH后1、3、5天的Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠的肝细胞。流式细胞仪检测各组肝细胞凋亡率。结果 PH后1、3、7天,Colgalt2-/-小鼠肝细胞PCNA阳性表达率显著高于Colgalt2+/+小鼠肝细胞PCNA阳性表达率,且差异有显著统计学意义(P<0.01)。分离的肝细胞活细胞比率达94%,正常Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠分离的肝细胞凋亡率分别为(23.36±0.83)%、(21.04±1.16)%;PH后1天,Colgalt2+/+对照组小鼠肝细胞凋亡率和Colgalt2-/-小鼠肝细胞凋亡率分别为(8.27±0.33)%、(8.44±0.30)%,PH后1天肝细胞凋亡率均降至最低,随即肝细胞凋亡率逐渐升高;PH后3天,Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠肝细胞凋亡率分别为(15.92±0.56)%、(12.14±0.37)%,Colgalt2-/-小鼠的肝细胞凋亡率明显低于野生型对照组小鼠的肝细胞凋亡率(P<0.01);PH后5天,Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠肝细胞凋亡率分别为(21.36±0.51)%、(18.92±0.92)%,Colgalt2-/-小鼠的肝细胞凋亡率仍低于野生型对照组小鼠的肝细胞凋亡率(P<0.05),肝细胞凋亡率均接近于恢复正常水平。结论糖基转移酶Colgalt2基因敲除在肝再生过程中在一定程度上具有促进肝细胞增殖和抗肝细胞凋亡的作用,提示该基因介导的胶原Glcα1,2Galβ1-糖基化修饰对肝再生可能起着重要的调控作用。
- 王智强杨琪王建文刘燃郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：肝再生糖基转移酶凋亡
- 分泌蛋白编码基因THEM6克隆表达及组织细胞分布
- 2013年
- 目的体外克隆表达THEM6，诱导重组蛋白，制备多克隆抗体，明确在不同组织细胞的表达特征。方法以外周血单核细胞总RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增THEM6基因片段，诱导剂IFrG诱导THEM6重组蛋白表达，制备多克隆抗体，分析特异性、检测效价。用CCK-8检测试剂盒，分析THEM6重组蛋白对Jurkat细胞增殖的影响；观察该蛋白的组织、细胞系表达分布。结果成功体外克隆THEM6．获得重组蛋白及抗THEM6的多克隆抗体，ELISA （enzyme-linked immuno sorbent assay）酶联免疫吸附测定检测效价〉1280000；低浓度THEM6重组蛋白对Jurkat细胞增殖有影响，THEM6蛋白在Jurkat细胞等多种细胞及淋巴、肝脏等多种组织中表达。，结论THEM6基因在多种组织细胞中有广泛表达。
- 李红敏任慧乔雍郝晓花刘燃王智强魏红山
- 关键词：乙型肝炎病毒重组蛋白多克隆抗体
- 优质护理对血源性传播疾病的初产妇剖宫产率及护理满意度的影响
- 目的:研究优质护理对血源性传播疾病的初产妇剖宫产率及护理满意度的影响。方法:本次研究选取的研究对象为2015年2月~2016年2月期间在北京地坛医院住院的初产妇,将100例初产妇随机分为2组,50例初产妇为一组。其中,一...
- 刘燃易为张海霞
- 关键词：剖宫产率优质护理护理满意度
- 文献传递
- 免疫调控相关基因C12orf28在免疫组织中的分布特征
- 2013年
- 目的制备抗人C12orf28多克隆抗体,明确C12orf28编码蛋白在免疫组织中的分布特征。方法选取免疫原性高、特异性强的羧基端257个氨基酸作为目的片段,以人外周血单个核细胞(PBMC)cDNA为模板,采用PCR获得目的基因C12orf28C257;构建其原核表达载体pET32a(+)-C12orf28C257,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白;将重组蛋白免疫大耳白大白兔制备兔源性多克隆抗体,采用ELISA和Western blot分析检测多克隆抗体效价和特异性,采用Western blot明确C12orf28的组织分布特征。结果 PCR扩增得到C12orf28C257目的基因片段,诱导表达重组蛋白并制备了其多克隆抗体。ELISA分析结果显示,多克隆抗体效价>1︰1.28×106,Western blot分析鉴定得出多克隆抗体具有较高的特异性。结论未知功能基因C12orf28在胎儿肠、淋巴、胸腺和心肌等组织中均有不同程度的表达。
- 任慧李红敏乔雍刘燃郝晓花魏红山
- 关键词：基因表达重组蛋白多克隆抗体
