余金辉
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 稻瘟菌MgCYP51B基因稀有密码子和mRNA二级结构分析与表达优化被引量：5
- 2014年
- 在大肠杆菌中异源表达稻瘟菌CYP51(P450-14DM,MgCYP51B)基因,通过对MgCYP51B进行跨膜区预测和同源模建分析,并截短稻瘟菌CYP51B基因,构建了9种不同的重组表达质粒以实现蛋白表达.结果表明:只有pET28-MgB-83在3种宿主菌中实现了表达,且在BL21(DE3)pLysS中表达量最大.通过对稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构进行分析,发现稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构稳定性对MgCYP51B蛋白的表达都有影响,适用于稀有密码子表达的Rossetta(DE3)并不适用于MgCYP51B基因的最优表达.同时只有翻译起始区二级结构自由能最低的pET28-MgB-83才能实现表达.本研究实现了稻瘟菌MgCYP51B基因在大肠杆菌中的异源表达,证实密码子的偏爱性和翻译起始区二级结构稳定性影响MgCYP51B蛋白表达.
- 齐婷刘婧李倩余金辉袁永泽刘德立
- 关键词：翻译起始区稀有密码子
- 嗜温性脂肪酶基因HS-L16的克隆表达及多拷贝载体的构建
- 脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3),是一类催化三脂酰甘油酯水解为甘油和脂肪酸的水解酶。是一类可以催化三酰基甘油酯水解、氨解、转酯、酯化等反应的蛋白质酶类。既可以在水相中,也可以在异相系统(油水界面)作用。嗜温性脂...
- 李娜余金辉朱德锐张凯董佳慧揭瑞耿辉熊丽刘德立
- 关键词：微生物脂肪酶毕赤酵母
- 文献传递
- 2株嗜碱性放线菌的分离鉴定及特性研究被引量：2
- 2012年
- 从新疆巴洲和硕县碱性土壤中分离纯化出2株放线菌菌株XJ-1和XJ-4,对其形态特征、生理生化特性、抗生素产生以及16S rRNA基因序列分析等方面进行了多种特性研究.结果表明.2株放线菌在pH7.0的中性条件下不能生长,在pH12.0的强碱性条件下能够生长,最适生长pH为10.0,属于嗜碱性放线菌.2株放线菌菌株能耐受10%的NaCl,最高耐受温度为45℃.菌株XJ-1产生抗生素,能抑制柑橘绿霉菌、水稻轮纹菌、棉花枯萎菌和小麦赤霉菌的生长.16S rRNA基因同源性分析表明XJ-1属于拟诺卡氏菌属的Nocardiopsis dassonvillei,序列相似性达到了99.9%.而XJ-4与Nocardiopsis. sp. AF-333的序列相似性达到了99.3%,有可能是一新种.
- 熊鹰余金辉阿不都克里木·热依木魏艳红李逸莫小妍陈湖星袁永泽刘德立
- 关键词：抗生素
- 嗜水气单胞菌FNR的表达、纯化及酶活分析
- 2013年
- 铁氧还蛋白还原酶(Ferredoxin-NADP+reductases,FNR)是一种在生物体的多种代谢中起着重要作用的黄素酶.为探讨嗜水气单胞菌(Aeromona s hydrophila)XS91-4-1中FNR的功能和结构,通过克隆其FNR基因,构建重组表达载体pET42a-fnr,表达并分离纯化了具有活性的GST-FNR融合蛋白,根据米曼氏动力学测定了纯化蛋白对NADPH及EDTA-Fe3+的酶活力,采用生物信息学方法对XS91-4-1 FNR蛋白序列进行系统学分析,并初步预测了该蛋白三维结构.结果表明:重组质粒能够在宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中获得高效可溶性表达,经镍柱亲和层析法可纯化出电泳均一的目的蛋白,蛋白浓度为67.3μg/mL;纯化蛋白对NADPH的比活力为1.78 U/mg,对EDTA-Fe3+的比活力为1.13 U/mg,比活力比粗酶分别提高了约29和22倍;生物信息学分析表明XS91-4-1 FNR分布在Bacterial-class FNR分支上且具有与此类FNR相似的结构特点.上述结果显示嗜水气单胞菌FNR具有与已报道的FNR相似的基本特性,并推测其可能属于Bacterial-class FNR.
- 张凯陈湖星余金辉严佳丽刘德立熊丽
- 关键词：嗜水气单胞菌可溶性表达蛋白纯化酶活
- 抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一系列的表达、并用亲和层析法结合离子交换层析法进行纯化。纯化的COMP为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术结合有限稀释传代法筛选得到稳定分泌抗人COMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用COMP单结构域片段结合生物信息学方法分析鉴定单克隆抗体结合表位。用不同种属来源的COMP分析单克隆抗体结合表位的保守性。结果:COMP及单结构域片段为分泌到细胞外的可溶性分子利于蛋白的纯化,筛选获得4株稳定分泌抗人COMP单克隆抗体细胞株,4株单克隆抗体的亚型为IgG1,经COMP单结构域片段检测证明4株单克隆抗体识别不同的表位,表位预测软件初步确定4株单克隆抗体识别表位所在区域,间接ELISA及免疫组化证实其中3株单克隆抗体与不同种属来源的COMP有较好的结合特性。结论:成功制备了4株识别不同表位的抗COMP单克隆抗体,为揭示血液中存在的COMP片段和进一步研究COMP逃避自身免疫耐受机理提供了研究工具。
- 董佳慧揭瑞余金辉韩冬王瑞玲邓灵福熊丽刘德立耿辉
- 关键词：软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体表位类风湿性关节炎
- 基于代谢路径比对分析的稻瘟菌潜在药物靶点研究
- 本研究对稻瘟菌及其宿主水稻的全代谢路径进行了比对分析，可以在糖、脂、氨基酸代谢，能量代谢、维生素和辅因子生物合成途径以及核昔酸代谢等重要代谢途径中定位了86个有意义的潜在药物靶标。通过代谢路径比对分析，发现与宿主相比，稻...
- 何木青李倩余金辉李书祥耿辉袁永泽熊丽刘德立
- 关键词：稻瘟病水稻药物靶点
- 文献传递
